人血红蛋白α,β基因在大肠杆菌中的表达

从人外周血细胞中提取出ＲＮＡ,通过逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）得到人血红蛋白的α和β基因片段,与ｐＴ７Ｂｌｕｅ质粒连接,然后将α、β基因克隆进ｐＢＶ２２０原核表达载体中,采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧终止法测序的结果与文献报道一致。宿主菌经热诱导,在１．６×１０５处有特异的蛋白带表达,表达量占总菌体总蛋白的２０％。     

无胶筛分毛细管电泳中核酸的迁移行为及分离的研究

无胶筛分毛细管电泳分析小于1kb的核酸,其迁移率与碱基数的对数成线性关系,长度大于1kb核酸的迁移率不是仅由其分子大小决定。据此可推测小于1kb核酸片段的大小。采用不更换聚合物法分析核酸,迁移时间的变异系数小于1.3％,适于大量样本的快速测定。考虑温度对核酸迁移行为的影响时,观察到22℃时,柱效最高。电进样与压力进样相比,分析大于300bp核酸的柱效提高,但不适于定量分析。     

HCVNS3基因片段酵母展示文库的构建和鉴定

 HCV NS3特异的 CD4+T细胞反应与 HCV感染的良性转归相关 .为了筛选其 CD4+T细胞表位 ,构建了 HCV NS3基因片段酵母展示文库 .首先 DNase 不完全酶切 HCV NS3基因产生长度为 1 0 0～ 30 0 bp的随机片段 ,然后在它们两端加上含限制性内切酶 Bam H 作用位点的接头 ,再以接头序列作引物进行 PCR扩增 .最后扩增产物用 Bam H 酶切后与 Bam H 线性化的穿梭载体 p YD1连接 ,转化大肠杆菌 (E.coli) DH5α,共得到 2× 1 0 6个转化子 .转化菌落的 PCR扩增结果表明 ,约 50 %转化子含插入片段 .随机选择 5个插入片段测序 ,然后与 DNA序列数据库中的序列比较 .结果显示它们分别与 HCV NS3序列有 96%～ 99%的同源性 .用从转化菌落中提取的质粒转化酵母 (S.cerevisiae)菌株 EBY1 0 0 ,得到含 2× 1 0 5个插入片段的 HCV NS3基因片段酵母展示文库 .半乳糖诱导的酵母细胞通过和 FITC标记的抗体结合 ,用 FACS可以在 2 0 %的细胞表面检测到融合蛋白的表达 .     

多维液相色谱技术在生物大分子分离纯化中的应用

生物技术是当今最活跃的科技领域之一,生物技术革命有助于解决现在人类生存所面临的健康、食品、环境等问题.以单克隆抗体为标志的生物制药是生物技术产业中发展最为迅速的部分.目前,全球己批准35个抗体药物上市,用于癌症、自身免疫、黄斑变性、血液病和感染治疗等.