两株真养产碱杆菌部分基因的克隆与序列分析

采用随机引物PCR技术从新建细胞培养室空气中获得两段长度414 bp及450 bp的片段.通过克隆测序及序列分析,结果表明,所测序列与真养产碱杆菌主要参考菌株的同源性分别高迭79%-83%及79%-84%,由其推导的氨基酸序列与真养产碱杆菌主要参考菌株的同源性高达86.4%-89.1%,由两分离菌株所获得基因片段推导的氨基酸序列之间的同源性高达98.1%,从而确定所分离两菌株为真养产碱杆菌不同亚型的菌株.     

1999～2013年山东H9N2亚型禽流感病毒HA基因的演化和HI抗原性差异分析

利用生物信息学方法和血凝交叉抑制(HI)试验比较研究了山东地区低致病性禽流感H9N2亚型病毒的分子遗传变异和抗原性变化.对1999~2013年在山东地区分离并鉴定的35株H9N2病毒进行了HA基因测序和同源性分析,绘制了系统发育树.同源性比较显示,同一时期的毒株同源性较高,而不同年代的H9N2流行毒相差较大,如2010~2013年的H9N2流行毒之间核苷酸(氨基酸)同源性为94.5%~100%(96.1%~100%),但与疫苗株SD-6的核苷酸(氨基酸)同源性已降至90.0%~92.5%(91.8%~95.0%).系统发育树显示,35株H9N2病毒均属欧亚谱系,其中28株属于S2-like亚群,表明该类型毒株是山东地区最主要的流行株.重要氨基酸位点分析表明,2010年以后的H9N2流行毒,其HA蛋白裂解位点基序为PSRSSR↓GL,334位点均由原来的A变为S;与受体结合位点相关的234位点,则由Q变为L.选择不同亚群的H9N2代表毒株制备单因子血清,进行HI交叉抑制实验,结果发现,H9N2不同毒株之间均可发生一定的交叉反应,但相关指数最低已降至0.31,表明病毒已出现明显的抗原性变化.本研究证实,山东H9N2亚型禽流感病毒在分子和抗原水平上均已发生一定程度的变异.     

高度重视高致病性禽流感病毒的公共卫生学意义

1997年发生于香港和2004年发生于泰国、越南的高致病性禽流感疫情,导致人感染发病和死亡,说明高致病性禽流感病毒可突破种间屏障而直接传染人。且尚无迹象表明禽流感在这些地区得到有效控制。2004年,我国部分地区发生了高致病性禽流感,但经各级政府和全国人民的共同努力,除在安徽省有一起复发外,全部得到了控制。鉴于我国曾有高致病性禽流感暴发的历史以及周边国家仍不断有禽流感疫情的发生以及H5N1亚型禽流感病毒的毒力逐年增加的现实,我们不得不高度重视高致病性禽流感病毒的公共卫生学意义。因此,我刊特邀专家就人感染禽流感病毒的历史、人感染禽流感病毒后的表现、禽流感病毒在以往人流感大流行中的作用以及防控措施等方面进行了专题介绍,并将国内部分研究成果集专论形式刊登。因时间仓促难免有不完善的地方,欢迎读者来信商榷,我刊将在以后的办刊过程中不断补充、完善。     

鸡源H9N2亚型流行性感冒病毒神经氨酸酶基因序列分析

对1996～2001年间自中国部分养鸡场发病鸡或死亡鸡分离鉴定的8株H9N2亚型禽流感病毒的神经氨酸酶基因(NA),进行了扩增和序列测定,并分析和比较了其核苷酸和氨基酸的同源性.结果表明,NA基因核苷酸和氨基酸同源性分别为97.1%～99.8%和95.7%～99.7%,说明NA基因稳定遗传,高度保守.与A/chicken/HongKong/G9/97相比较,发现中国大陆鸡源H9N2分离株的神经氨酸酶蛋白在其茎部的第63、64、65位点上都有3个氨基酸的丢失,而与中国邻近的韩国、巴基斯坦鸡源H9N2分离株的神经氨酸酶没有氨基酸的丢失,因此这些部位的氨基酸丢失可初步认为是中国大陆H9N2流感病毒分离株的一个标记.系统进化树分析表明,该8株病毒的NA基因属于相同的进化分支,即A/duck/HongKong/Y280/97-like分支,尚未发现NA基因属于A/quail/HongKong/G1/97-like分支的分离株.中国的H9N2分离株与韩国、巴基斯坦等地的H9N2分离株隶属于不同的进化亚分支,说明H9N2亚型禽流感的发生与流行和地域有一定的相关性.     

应用实时荧光PCR检测致病性蜡样芽孢杆菌

目的:利用SYBRGreenⅠ染料能与双链DNA结合发出荧光的特点,建立一种用来检测致病性蜡样芽孢杆菌(B.cereus)的实时PCR方法。方法:对致病性蜡样芽孢杆菌致病相关基因cereolysinAB基因序列进行分析,设计1对特异引物,通过对SYBRGreenⅠ实时PCR反应条件的优化,实现对致病性蜡样芽孢杆菌的检测。结果:该方法具有较强的灵敏性及特异性,能够对致病性蜡样芽孢杆菌进行有效检测,其最低检出限可达8CFU/mL。结论:利用该技术检测蜡样芽孢杆菌,较常规的生化检测方法具有省时省力的特点,且灵敏性较高,具有实际应用价值。     

基于TaqMan探针的蜜蜂囊状幼虫病病毒荧光PCR检测方法的建立和应用

为建立快速有效的蜜蜂囊状幼虫病检疫方法, 依据TaqMan荧光标记探针技术原理, 针对蜜蜂囊状幼虫病病毒保守序列, 设计出一对特异性引物和一条探针, 建立了一种快速检测蜜蜂囊状幼虫病病毒的荧光PCR方法。该方法对蜜蜂囊状幼虫病的检测具有较好的特异性, 与蜜蜂急性麻痹病病毒、蜜蜂慢性麻痹病病毒、蜜蜂残翼病病毒和黑蜂王台病病毒之间均无交叉反应。检测灵敏度可达1.0×10²拷贝/μL阳性质粒, 可对低病毒含量的样品进行准确检测。重复性和稳定性试验结果显示, 变异系数为1.6%, 说明该方法具有较好的重复性和稳定性。应用该方法对蜜蜂及蜂制品进行检测, 结果显示所建立的荧光PCR检测方法4 h内即可报告检测结果, 该方法具有快速、灵敏、特异及重复性好等优点, 适用于蜜蜂及其制品中蜜蜂囊状幼虫病病毒的快速检疫。     

高致病性禽流感(H5N1)在迁徙鸟类中的感染

禽流感不仅对养禽业造成了沉重打击,而且给人类健康带来了严重威胁。今年五月初在我国青海湖发生了斑头雁、棕头鸥等品种候鸟的成批死亡,我校刘金华教授等前往发生地进行了临床诊断,提出了控制措施和建议。采集样品紧急运送回实验室后,经过血清抗体检测、病毒分离与鉴定和组织病理学等研究工作,确诊了候鸟的发病与死亡系H5N1亚型禽流感病毒感染所致。由于候鸟发生禽流感而造成大批死亡尚属首次,因此对病毒的特性进行了分析与研究。结果表明,其血凝素基裂解位点为PQKKKRR/G,符合高致病性禽流感病毒的特征。值得注意的是病毒PB2基因的第6…     

海南岛蠛蠓属二新种（双翅目：蠓科）

报道采自海南岛琼中县黎母岭的蠛蠓属Ｌａｓｉｏｈｅｌｅａ２新中为小溪蠛蠓Ｌａ．ｒｉｐａ,ｓｐ．ｎｏｖ．和鹤吻蠛蠓Ｌａ．ｓｉｒｙｃｔａ,ｓｐ．ｏｎｖ．模式标本保存于北京医学昆虫标本馆。     

海南岛小兽类寄生蜱的群落结构

本文定量研究了海南岛三亚市９种小兽类体外寄生蜱的群落结构,共发现８种寄生蜱,粒形硬蜱的宿主范围广,在所捕获的９种小兽体外均有寄生。珀氏长吻松鼠体表粒形硬蜱率相当高（＞５０％）。社鼠和海南毛猥的多样性指数低。     

吸血蠓类生殖行为和习性研究综述

双翅目长角亚国蠓科（Ceratopogonidae）小型昆虫中刺吸人畜血液的库蠓Culicoides、蠛蠓Lasioheea和细蠓Leptoconops3属统称为吸血蠓类,因其传播病毒、细菌、线虫、原虫和丝虫等多种病原体而具有重要的医学意义。为研究其媒介效能、生态和防治,迫待建立实验室驯养的媒介种群,吸血和交配则是实验室驯养吸血蠓的关键,建立生殖营养节律各个时期的指标又是生态学调查和模型设计的基础。鉴于此,国内外学者早已重视吸血蠓类重要种群生殖营养节律的研究,阐明了许多问题,并建立了某些研究方法,为媒介效能、生态和防治研究奠定了基础。本文…