经程序化冷冻的小鼠休眠胚胎的基因表达谱差异分析

目的探讨小鼠休眠胚胎经程序化冷冻后基因表达谱的变化及相关信号通路的改变趋势。方法采用Affymetrix基因芯片检测小鼠正常休眠胚胎和经程序化冷冻后的休眠胚胎的差异表达基因;采用GO分析和Pathway分析等生物信息学方法进一步了解相关信号通路的改变。结果经程序化冷冻后的小鼠休眠胚胎与正常休眠胚胎相比,存在228个差异表达基因,其中50个基因表达上调,178个基因表达下调。Pathway分析显示黏着斑通路、细胞外基质受体相互作用通路、肌动蛋白细胞骨架调节通路、细胞凋亡通路、细胞通讯通路、泛素介导的蛋白质水解通路、甘油磷脂代谢通路、小细胞肺癌通路、TGF-β信号通路、MAPK信号通路等基因差异表达变化趋势明显。结论小鼠休眠胚胎经程序化冷冻后会导致一系列基因调控变化,并可能影响多条信号通路的协同变化。     

自然发情与诱导发情小鼠子宫内膜中雌激素受体α表达的比较

目的从雌激素受体α(ERα)的角度探讨自然发情小鼠与诱导发情小鼠的子宫内膜上,雌激素受体α表达是否受内源雌激素的特异诱导而变化,两者之间是否存在差异。方法27只同日龄母鼠,根据处理方式的不同随机分为3个组:自然发情假孕组(对照组)、诱导发情处理假孕组和自然发情假孕第1天摘除卵巢组,3个组的小鼠在见栓后第4、6、8天分别取样后,采用免疫组织化学法观察小鼠子宫内膜中雌激素受体α的表达情况。结果免疫组化结果显示,3个处理组的小鼠子宫内膜上皮细胞核、胞质都有ERα存在,且主要表达在腺上皮;见栓第4、6、8天时,诱导发情处理组小鼠子宫内膜的ERα阳性率均显著高于自然发情组和自然发情第1天摘除卵巢组(P0.05);见栓第8天时,自然发情处理组小鼠子宫内膜中的ERα阳性率与自然发情第1天摘除卵巢组差异不显著(P0.05),但见栓第4、6天时两者阳性率差异显著,自然发情处理组小鼠子宫内膜中的ERα阳性率显著高于自然发情第1天摘除卵巢组(P0.05)。结论诱导发情处理的小鼠子宫内膜,其表面雌激素受体α表达显著高于自然发情小鼠,且两者都受其内源性雌激素的特异诱导而变化。     

雌激素和孕激素对不同发情方式小鼠子宫内膜中孕激素受体分布的影响

目的探讨雌（Estrogen,E2）、孕激素（Progesterone,P4）对同期发情与自然发情小鼠子宫内膜中孕激素受体（Progesterone receptor,PR）分布的影响。方法45只同日龄雌鼠,根据处理方式的不同随机分为5组：自然发情组（对照组）、同期发情组、卵巢摘除组、P4处理组和E2处理组,5组小鼠在见栓后第4、6、8天分别取样后,采用免疫组织化学法观察小鼠子宫内膜中PR的分布变化情况。结果免疫组织化学染色结果显示,5个处理组小鼠子宫内膜的三种细胞中都有PR存在;同期发情组小鼠子宫内膜中三种类型细胞PR的表达与自然发情组差异有显著性（P〈0.05）;P4处理组小鼠子宫内膜中三种类型细胞PR的表达在见栓第4、6天显著低于卵巢摘除组（P〈0.05）;E2处理组小鼠子宫内膜腺上皮和间质中PR在第4、6、8天时都显著高于卵巢摘除组（P〈0.05）,而在腔上皮中则显著低于卵巢摘除组（P〈0.05）。结论同期发情处理与自然发情小鼠的子宫内膜上PR的分布,都受E2和P4的特异诱导而变化。     

PGE2、PGF2α和Iloprost对小鼠2-细胞胚胎体外发育的影响

目的研究PGE2、PGF2。以及Hoprost（PGl2的稳定类似物）对小鼠2-细胞胚胎体外发育的影响。方法在含0．5％BSA的mCZB液中分别添加0、10^-4、10^-5和10^-6mol／L的PGE2,0、10^-4、10^-5和10^-6mol／L PGF2α以及0、1×10^-6、2×10^-6和4×10^-6mol/L Iloprost,观察小鼠2-细胞胚胎的体外发育,同时利用H33342染色进行囊胚和孵化囊胚的细胞核计数。结果添加PGE2、PGF2α以及Iloprost的各处理组2-细胞胚胎体外培养的囊胚率和孵化率均显著低于对照组（P〈0．05）,但各处理组与对照组之间在囊胚或孵化胚胎的细胞数上差异不显著（P〉0．05）。结论培养液中添加这三种前列腺素均不利于小鼠2-细胞胚胎的体外发育,但不影响囊胚或孵化胚胎的细胞数。     

ADAM19 在小鼠睾丸发育中的时空表达

目的 阐明含有去整合素和金属蛋白酶结构域的跨膜蛋白19(ADAM19)在小鼠睾丸发育中的作用.方法 采用半定量RT-PCR和免疫组化两种实验方法,分别检测ADAM19 mRNA和蛋白质在小鼠睾丸发育中的时空表达.结果 ①最早在胚胎发育的15.5 d才能检测到ADAM19 mRNA的表达,后其表达随着胚胎发育天数的增加而逐渐升高,到围产期表达水平达到最高.出生后,ADAM19 mRNA的表达呈现显著下降的趋势,到成体睾丸中就几乎检测不到ADAM19的表达.②和其mRNA表达变化趋势一样,ADAM19蛋白也是首次在胚胎发育的15.5 d被检测到,一直持续存在到出生后一周,一周后则几乎检测不到;阳性表达信号主要定位在睾丸的曲细精管(睾索)中.结论 ADAM19 在小鼠睾丸中的表达具有显著的发育依赖性.     

小鼠电激活孤雌胚胎早期体内外发育能力的比较

目的探讨小鼠电激活孤雌胚胎的早期体内、外发育能力。方法 利用不同电脉冲参数和激活液对小鼠卵母细胞进行活化,观察激活后的小鼠孤雌胚体外发育状况和移植后的发育能力。结果非电解质激活液优于电解质液,脉冲强度、脉冲宽度和脉冲次数3个参数各自处于某一范围内时,他们之间存在某种相关性,降低其中1个参数可通过升高另外2个参数得到补偿,经筛选较适宜的电脉冲参数为：1.0 kV/cm、40μs、2 p,或者1.5kV/cm、30/μs、2 p,分别为74.65%和71.19%,体外囊胚发育率分别为43.40%和47.62%。电激活孤雌胚体外发育时序比正常胚胎慢,但囊胚细胞数与对照组差异不显著。它们经胚胎移植后,其中的一部分能够着床,但着床率仅为3.6%,极显著低于对照组（67%,P〈0.01）。结论电刺激能够较好地模拟正常受精过程激活小鼠卵母细胞,但激活后的多数小鼠孤雌胚胎着床能力较低,不能够顺利着床。     

Wnt3a在小鼠孤雌胚胎及正常胚胎早期着床部位的表达变化

目的研究小鼠孤雌激活胚胎和体内正常发育胚胎在子宫中发生着床过程时,在早期着床部位上Wnt3a信号分子的表达变化。方法运用免疫组织化学染色法比较受体子宫中的孤雌胚胎着床位点和体内正常发育胚胎着床位点上Wnt3a的表达状况。结果免疫组织化学染色结果发现:(1)在着床期怀孕第5.5天和6.5天,受体子宫中孤雌胚胎的着床位点处和体内正常发育胚胎的着床位点处,Wnt3a在两种子宫上的表达情况相似,而在两种胚胎上的表达情况不同;(2)Wnt3a信号在空怀假孕母鼠子宫上表达情况与相同怀孕期有正常胚胎着床的子宫上的表达情况相似。结论胚胎着床与否及胚胎正常与否均不影响Wnt3a在小鼠早期着床期子宫上的表达,但在怀孕第5.5天和6.5天时孤雌激活胚胎和体内正常发育胚胎上Wnt3a的表达有差异。     

PMSG和FSH同期发情处理对小鼠子宫、卵巢和输卵管中雌激素α受体分布的影响

目的从雌激素α受体（estrogen receptorα,ERα）的角度探讨孕马血清促性腺激素（pregnant mareserum gonadotropin,PMSG）和促卵泡激素（follicle-stimulating hormone,FSH）处理小鼠的卵巢、输卵管和子宫中,ERα分布是否有显著性差异。方法 10只8周龄母鼠,随机分为处理方式不同的两个组：PMSG组和FSH组,两组均在处理第48小时取其卵巢、输卵管和子宫样固定,采用免疫组织化学法分别观察组织中ERα分布情况。结果免疫组化结果显示,两个处理组小鼠卵巢、输卵管和子宫内膜的细胞中都有ERα表达;PMSG处理组卵巢中的初级卵泡和成熟卵泡上ERα阳性率和平均吸光度均显著高于FSH处理组;FSH处理组的输卵管中ERα阳性率和平均吸光度均高于PMSG处理组;FSH处理组子宫基质和腺上皮细胞中ERα的阳性率显著高于PMSG组,其中PMSG组基质中的平均吸光度显著高于FSH组,而子宫内膜上皮细胞的阳性率和平均吸光度两处理组间差异无显著性。结论 PMSG和FSH同期发情诱导由于其特性可不同程度地影响小鼠卵巢、输卵管和子宫中ERα的分布,使之在不同组织中产生差异性变化。     

溶菌酶1在小鼠超数排卵前后孵化及休眠囊胚中差异表达的研究

目的研究溶菌酶1(lysozyme 1,LYZ1)基因在超数排卵前后小鼠孵化囊胚和休眠胚胎中的分布以及表达,探究动物胚胎着床过程中新的调节机制。方法从妊娠5 d ICR小鼠体内获取的正常孵化囊胚和超排囊胚,利用小鼠延迟着床模型于妊娠第8天获取休眠胚胎和超排休眠胚胎。利用免疫荧光和Western Blot方法检测LYZ1蛋白在四组胚胎中的分布和差异表达变化。结果 LYZ1在超数排卵前、后小鼠孵化囊胚和休眠胚胎中均有表达,且主要集中在内细胞团中,滋养层细胞和胞质中少见分布;与未进行超排的小鼠相比,LYZ1蛋白在超排后小鼠胚胎中表达量显著上调,与未营造休眠模型的小鼠相比,LYZ1蛋白在休眠模型小鼠胚胎中的表达量显著上调。结论 LYZ1蛋白在囊胚内细胞团中表达,可能参与调节胚胎内细胞团的发育;LYZ1蛋白在超排-休眠胚胎中的高表达,说明LYZ1蛋白在休眠和超数排卵的双重影响下,会因为抵御不利环境而上调。