籽瓜多糖对H_2O_2致PC12细胞氧化损伤的保护作用

本文研究了籽瓜多糖(SWP)对H2O2致PC12细胞氧化应激损伤的影响及其机制。通过建立H2O2诱导PC12细胞氧化损伤模型,CCK-8法测定细胞存活率;硫辛酰胺脱氢酶催化的INT显色反应检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量,DCFH-DA检测细胞内ROS;ELISA法检测8-OHd G;JC-1染色检测细胞线粒体膜电位;利用caspase-3可以催化底物Ac-DEVD-p NA的反应检测caspase-3活性;应用caspase-9催化特异性底物Ac-LEHDp NA检测caspase-9活性。结果显示:过氧化氢组与对照组相比,终浓度为500μmol/L H2O2作用细胞24 h后,细胞活力显著下降(P0.01);LDH释放量和细胞内ROS增加(P0.01);8-OHd G含量上升(P0.01);线粒体膜电位下降(P0.01);caspase-3和caspase-9活性增强(P0.01)。与H2O2损伤组相比,不同剂量的SWP预处理后,能显著改善H2O2引起的上述指标的变化(P0.05)。由此得出:SWP对H2O2诱导的PC12细胞的氧化损伤具有一定的保护作用。     

rSac3, a novel Sac domain phosphoinositide phosphatase, promotes neurite outgrowth in PC12 cells

Sac domain-containing proteins belong to a newly identified family of phosphoinositide phosphatases （the PIPPase family）. Despite well-characterized enzymatic activity, the biological functions of this mammalian Sac domain PIPPase family remain largely unknown. We identified a novel Sac domain-containing protein, rat Sac3 （rSac3）, which is widely expressed in various tissues and localized to the endoplasmic reticulum, Golgi complex and recycling endosomes, rSac3 displays PIPPase activity with PI（3）P, PI（4）P and PI（3,5）P2 as substrates in vitro, and a mutation in the catalytic core of the Sac domain abolishes its enzymatic activity. The expression of rSac3 is upregulated during nerve growth factor （NGF）-stimulated PC 12 cell neuronal differentiation, and overexpression of this protein promotes neurite outgrowth in PC 12 cells. Conversely, inhibition ofrSac3 expression by antisense oligonucleotides reduces neurite outgrowth of NGF- stimulated PC 12 cells, and the active site mutation of rSac3 eliminates its neurite-outgrowth-promoting activity. These results indicate that rSac3 promotes neurite outgrowth in differentiating neurons through its PIPPase activity, suggesting that Sac domain PIPPase proteins may participate in forward membrane trafficking from the endoplasmic reticulum and Golgi complex to the plasma membrane, and may function as regulators of this crucial process of neuronal cell growth and differentiation.[第一段]     

圣草酚对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的保护作用及其机制

目的:探讨圣草酚对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及其机制。方法:采用MTT法筛选圣草酚对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞损伤的有效保护浓度,进一步采用流式细胞术检测圣草酚对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞的凋亡率的影响,并通过试剂盒检测圣草酚对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞胆碱能系统受体活性的影响。结果:MTT结果显示2×10~(-3)μmol/L圣草酚可显著促进Aβ2_(25-35)诱导的PC12细胞增殖(P0.05)。流式细胞术结果显示2×10~(-3)μmol/L圣草酚和雌二醇均可以显著抑制Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡(P0.05),提高其乙酰胆碱及乙酰胆碱转移酶活性并且降低乙酰胆碱酯酶的活性(P0.05),且二者的作用相当,差异无统计学意义(P0.05)。结论:圣草酚可能通过提高Ach及ChAT的含量,降低AchE的含量,调节胆碱能系统相关酶的活性,发挥对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞的保护作用。     

绞股蓝皂苷对PC12细胞增殖及细胞损伤模型的保护作用

本文通过采用四氮唑蓝(MTT)比色法检测绞股蓝皂苷对PC12细胞增殖活力的影响,并用低糖低血清、谷氨酸、β淀粉样蛋白(Aβ25~35)诱导PC12细胞制备细胞损伤模型,观察绞股蓝皂苷低(50μg·mL~(-1))、中(200μg·mL~(-1))、高(500μg·mL~(-1))剂量在3种细胞损伤模型中对细胞存活率和胞浆中乳酸脱氢酶(LDH)释放量的影响。结果表明,绞股蓝皂苷能显著提高正常PC12细胞的存活率,并能有效对抗低糖低血清、谷氨酸、β淀粉样蛋白引起的细胞凋亡,降低胞浆中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量。     

shRNA沉默CBS基因的慢病毒载体构建及稳定转染PC12细胞系的建立

目的:硫化氢是一种重要的气体信号分子,作为一种神经调质在神经系统中起重要作用。胱硫醚-β-合成酶(CBS)是脑内硫化氢合成的主要酶。构建针对大鼠CBS基因的shRNA干扰载体,稳定转染PC12细胞,观察该载体对PC12细胞CBS基因的沉默效应。方法:构建三条针对大鼠CBS基因的shRNA,经前期实验筛序一条最有效靶点与载体GV248(h U6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin)连接,经转化及PCR阳性克隆筛选及测序鉴定。将LV-CBS-ShRNA慢病毒载体连同包装载体经脂质体2 000共转染到293T细胞,慢病毒包装后用荧光法进行滴度测定。将包装好的慢病毒转染到PC12细胞,用嘌呤霉素进行筛选,得到稳定转染LV-CBS ShRNA的PC12细胞。实时荧光定量PCR检测CBSmRNA的表达,Western-blot检测CBS蛋白的表达。结果:PCR扩增和测序结果证明,成功构建大鼠LV-CBS ShRNA慢病毒载体,经包装产生的慢病毒滴度为1×109TU/m L。与转染阴性对照慢病毒(LV-NC-ShRNA)的细胞比较,LV-CBS ShRNA慢病毒转染可使PC12的CBSmRNA和CBS蛋白表达分别下降51.2%和48%。成功构建CBS基因ShRNA干扰的PC12细胞株,为后续研究CBS在神经系统中的作用奠定基础。     

序列同源性比较软件Blast的本地化实现及VB接口程序的编制

美国国家生物技术信息中心（ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ,ＮＣＢＩ）的Ｂｌａｓｔ软件是进行核酸序列和蛋白质序列同源性比较的有力工具［１,２］．通过访问ＮＣＢＩ的主页（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）进行Ｂｌａｓｔ同源性比较是常用的分析方法．然而在很多场合需要在脱机状态下使用Ｂｌａｓｔ进行同源性比较,所以,Ｂｌａｓｔ软件的本地化实现有其必要性．本文介绍实现Ｂｌａｓｔ本地化过程的经验,同时用ＶｉｓｕａｌＢａｓｉｃ５．０（以下…     

人APP基因C-末端片段在PC12细胞中的稳定表达及其对细胞生长和发育的影响

APP在AD病因学中是一个重要的分子,但到目前为止尚缺乏良好的动物和细胞模型用来探讨APP在AD发病中的作用。本研究旨在建立过表达人APP基因C-末端片段的遗传工程细胞系。将人APP695cDNA 中编码C-末端105 个氨基酸的片段重组到真核表达载体pDORneo中形成重组质粒pDORneo-CT, 然后用脂质体将其转染到大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)中。用800μg/ml G418 筛选获得了在mRNA 和蛋白质水平均表达相应片段的稳定细胞系。细胞形态学观察和MTT,LDH分析表明, 该片段在细胞内的表达未能对NGF处理的PC12细胞产生明显的毒性作用。 Abstract:The major obstacles to clarify molecular mechanisms involved in amyloid metabolism of Alzheimer's disease has been the unavailability of animal and cell models for this unique human disease. The present research was aimed at establishing genetically engineering cell lines that overexpress the C-terminal fragment of human APPgene. Cloned human APPcDNA and retrovirus eukaryocytic expressing vector pDoRneo were used to prepare for the transformed PC12 Cell lines. RT-PCR and Western Blot showed that stable transfectants which express the correspoding fragment of APPgene in mRNA and protein level have been obtained. Morphological observation and MTT, LDH assay showed that no apparent toxic effects have been observed.     

中枢神经蛋白质组分析中双向电泳技术的建立

建立和优化了中枢神经组织蛋白质组分析所需的双向电泳及相关技术.由于中枢神经组织结构的特殊性,样品处理非常困难.对样品液组成、样品处理、上样方式、上样量、IPG胶条和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法和保存等相关技术进行了比较研究和条件优化后,以固相pH梯度等电聚焦为第一向和SDS均一胶（T=12.5%）的水平电泳为第二向,成功地得到了神经组织双向电泳图谱.     

L-谷氨酰胺对PC12细胞中grp75的调控作用

条件必需氨基酸谷胺酰胺可上调细胞中热激蛋白（hsp）的表达,为观察谷氨酰胺是否对hsp家族成员grp75的表达具有调控作用,以PC12细胞为模型用免疫组化、蛋白质印迹法和RT—PCR等方法检测谷胺酰胺对grp75基因的表达的影响：并以MTT法观察谷氨酰胺对PC12的细胞和grp75低表达的PC12细胞缺糖损伤的保护作用。结果表明谷氨酰胺可以上调grp75的表达．特别是对缺糖细胞的上调作用更显著;但这种上调作用与谷氨酰胺的作用浓度和作用时间并未显示出有明显的关系。MTT检测显示,谷氨酰胺使细胞在缺糖条件下的存活率明显上升：grp75低表达细胞与未转染的细胞相比这种保护效应明显降低,说明谷氨酰胺通过调节grp75的表达对缺糖损伤起到保护作用。     

应用生长、分级的自组织映射模型进行意识任务分类

提出一种使用生长、分级的自组织映射(growing hierarchical self-organizing map,GHSOM)模型进行基于EEG信号的意识任务分类来实现脑机接口技术的方法.GHSOM模型是自组织映射(self-organizing map,SOM)的一种变体,由多层的SOM组成,具有一定的分级结构,能够表达数据中不同层次的信息.同时研究了使用平均量化误差(mean quantization error,mqe)和量化误差(quantization error,qe)两种方法实现的GHSOM模型对意识任务分类的作用.结果表明,GHSOM模型对于意识任务的可分性能够提供可视化的信息,并且发现使用量化误差方法实现的GHSOM模型提供较多的数据信息和较高的分类精度.使用GHSOM模型进行了5类意识任务的分类,平均分类精度可达80%.