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41.
大鼠卵巢绒毛膜促性腺激素受体在CHO中的表达和扩增 总被引:1,自引:0,他引:1
本文报道了利用二氢叶酸还原酶放大系统将大鼠LH/hCG受体(记为F-hCGR)及其胞外肽段(记为T-hCGR)在中国苍鼠卵巢细胞(CHO)中的表达。SDS-PAGE分析表明,F-hCGR为一条蛋白质带,其表观分子量为92kd,而T-hCGR为35kd和37kd两条带。表达受体对其配基hCG表现出高的亲合力,F-hCGR的解离常数为7×10-9mol/L,T-hCGR为6.4×10-9mol/L。表达F-hCGR的转染CHO细胞可结合125I-hCG,而表达T-hCGB者不结合125I-hCG。这提示F-hCGR主要存在于细胞质膜表面上。表达F-hCGR的转染CHO细胞能刺激。cAMP的形成,而表达T-hCGR者不能刺激cAMP形成。免疫荧光定位结果表明,T-hCGR主要分布于质膜的细胞质侧以及胞内其他一些细胞器膜上。用免疫亲和层析可以得到纯化的T-hCGR。 相似文献
42.
促黄体激素/人绒毛膜促性腺激素受体(LH/hCG receptor)是一种与G-蛋白偶联的糖蛋白。本文报道了从大鼠卵巢cDNA库中筛选LH/hCG受体cDNA及其在昆虫细胞中的高效表达。LH/hCG受体cDNA全长2403bp,编码受体信号肽和成熟受体674个氨基酸。用多角体病毒表达载体pVL1393,LH/hCG受体cDNA在昆虫细胞中得到高效表达。在非还原和还原条件下的SDS-PAGE分析显示,用亲和层析分离纯化的受体表观分子量分别为120Kd和92Kd。经配基结合和Scatchard Plot分析表明,其与hCG反应的Kd为8.4×10~(-9)mol/L,与CHO细胞表达产物相似。 相似文献
43.
将切去3’端穿膜序列的EB病毒膜抗原(MA)基因,插入pSV2-dhfr质粒的SV40早期启动子下游,构建了真核表达载体pSV2-dhfrGPTR,使两个SV40早期启动子分别调控MA和二氢叶酸还原酶(dhfr)基因。将该重组质粒转化CHO-dhfr细胞,在选择培养基中筛选阳性克隆,用氨甲喋呤加压扩增,建立了表达EBV-MA的克隆细胞系。westernblot分析证明,所表达的蛋白的分子量大约为340kd和220kd。经过细Sepharose2B琼脂糖凝胶层析初步纯化的抗原与福氏佐剂混合免疫小鼠,2周后小鼠血清中出现明显的gp340/220特异性抗体,表明切去嵌膜区结构的EBV-MA基因在CHO细胞中的表达产物具有同天然膜抗原相似的分子量大小、糖基化程度、免疫特异性和免疫原性,可望成为EB病毒人用基因工程亚单位疫苗。 相似文献
44.
在自生异养条件下,旋扭山绿豆根瘤菌MXDI6菌株的氢酶诱导表达受气相、pH值、镍等因子影响:氢酶表达的最适氧浓度为4%,最适氢浓度为15%,二氧化碳没有明显影响;氢酶表达的pH值以5.0—6.0为宜;0.5μmol/LNiCl2明显促进吸氢活性,但镍浓度大于1μmol/L则抑制吸氢活性. 相似文献
45.
利用人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF)cDNA3′端非翻译区(3′-UTR)中存在的DraⅠ酶切位点,通过部分酶切与完全酶切,删除3′-UTR不同长度,构建了四种hG-CSFcDNA瞬时重组表达质粒。转染COS-7细胞后,生物活性测定结果提示,hG-CSFcDNA3′-UTR对其表达起负调控作用,其关键性序列位于紧接终止密码子TGA下游的65bp范围内,3′-UTR对hG-CSFcDNA表达的影响与转录水平的差别有一定关系。 相似文献
46.
在大肠杆菌中,利用新构建的含T7g-10L RBS以及λ-PR启动子的新型原核表达载体,通过表达gag-pol基因片段,获得了具有天然序列的人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核心蛋白p24的高效表达。克隆的gag-pol基因片段在其阅读框架移位区域插入了4bp碱基,其表达的病毒蛋白酶在阅读框架上与gag一致,从而实现了对gag-pol融合蛋白的有效加工,产生成熟的核心蛋白p24及其它产物。重组p24以可溶形式存在,可以被抗p24的单克隆抗体特异识别。测定的N端8个氨基酸序列与从病毒纯化的p24完全一致。在使用硫酸铵沉淀后,采用两步离子柱层析,可将重组蛋白纯化到95%以上的纯度。结果表明,纯化的p24可以作为特异性很强的试剂而用于HIV感染的诊断及病情的预后,并可用于p24的生化及结构分析。 相似文献
47.
48.
49.
The nest site characteristics of the freshwater three-spined stickleback, Gasterosteus aculeatus (form leiurus ), were quantitatively investigated in springs and the main stream of the Yamayoke and the Tsuya River system, central Japan. Most nests (93·4%) were on a muddy or sandy substratum, at depths of 10–40 cm (84·3%), in water velocities less than 15 cm s−1 (76·2%) and in the temperature range of 14 to 16° C (82·7%), Spring-fed localities provided more of these conditions than the main stream channel and hence contained more potential nesting areas. Thus, they were utilized by male sticklebacks both temporally (prolonged breeding season) and spatially (more nest sites). 相似文献
50.
Organisms inhabiting metal-contaminated areas can be stressed by metal exposure and are possibly subject to selection, resulting
in increased metal tolerance and changes in growth and/or reproduction characteristics. In a previous study it was found that
in the terrestrial isopod Porcellio scaber, sampled from the vicinity of a zine smelter, the body size was small and the brood size was large compared to isopods from
a reference area. To assess whether these differences were due to genetic differentiation between strains, isopods collected
from a reference wood, a zinc smelter area and a lead mine were cultured on non-polluted food, while growth, reproduction
and metal concentrations were studied in first and second laboratory generations. The isopods from the three populations differed
in age and weight at first reproduction, although there were hardly any differences in growth. The females of the mine and
the smelter population started to reproduce earlier, at a lower weight, which resulted in fewer young per female. However,
reproductive allocation (=wight of young relative to the weight of the mother) was higher in mine and smelter isopods. We
conclude that the isopods at the metal-contaminated sites have been selected for early reproduction and increased reproductive
allocation. The results indicate that populations inhabiting metal-polluted sites have probably undergone evolutionary changes.
This study showed that growth and reproduction characteristics of different populations under laboratory conditions may provide
information on selection processes in the field. 相似文献