DEB-TACE联合卡瑞利珠单抗治疗中晚期肝癌的临床疗效及对肿瘤标志物和T淋巴细胞亚群的影响

摘要 目的：探讨载药微球-肝动脉化疗栓塞术（DEB-TACE）联合卡瑞利珠单抗治疗中晚期肝癌的临床疗效及对肿瘤标志物和T淋巴细胞亚群的影响。方法：采用随机数字表法,将徐州医科大学附属医院于2019年7月-2020年7月期间收治的80例中晚期肝癌患者分为对照组（DEB-TACE治疗,n=40）和研究组（对照组的基础上接受经肝动脉灌注卡瑞利珠单抗治疗,n=40）。对比两组疗效、血清肿瘤标志物、T淋巴细胞亚群指标的变化情况和总生存期（OS）、无进展生存期（PFS）,并观察两组不良反发生情况。结果：研究组的客观缓解率（ORR）、疾病控制率（DCR）均高于对照组（P<0.05）。两组治疗1个月后CD8⁺下降,且研究组低于对照组同期（P<0.05）,CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺升高,且研究组高于对照组同期（P<0.05）。两组治疗1个月后甲胎蛋白（AFP）、异常凝血酶原（PIVKA-II）下降,且研究组低于对照组同期（P<0.05）。研究组的OS（中位OS为13.3个月,2年生存率30.00%）、PFS（中位OS为8.2个月,2年生存率17.50%）,均长于对照组（P<0.05）。两组不良反应发生率对比无差异（P>0.05）。结论：DEB-TACE联合经肝动脉灌注卡瑞利珠单抗治疗中晚期肝癌,可改善免疫功能,降低血清肿瘤标志物水平,安全有效。     

卡瑞利珠单抗联合标准二线化疗对晚期食管鳞癌患者肿瘤标志物和外周血NLR、LMR的影响及其预后的影响因素分析

摘要 目的：探讨卡瑞利珠单抗联合标准二线化疗对晚期食管鳞癌患者肿瘤标志物和外周血中性粒细胞/淋巴细胞比值（NLR）、淋巴细胞/单核细胞比值（LMR）的影响,并分析影响晚期食管鳞癌预后的因素。方法：选择2019年8月至2021年8月安徽医科大学附属巢湖医院收治的80例晚期食管鳞癌患者,根据治疗方法将其分为对照组（40例）采用标准二线化疗治疗,观察组（40例）采用卡瑞利珠单抗联合标准二线化疗治疗。比较两组疗效、血清肿瘤标志物以及外周血NLR、LMR水平以及安全性差异。绘制Kaplan-Meier曲线,分析不同治疗方案晚期食管鳞癌患者总生存期（OS）期差异,多因素Cox回归分析影响晚期食管鳞癌患者预后的因素。结果：观察组客观缓解率（ORR）、疾病控制率（DCR）高于对照组（P＜0.05）;两组治疗后血清糖类抗原125（CA125）、糖类抗原199（CA199）、癌胚抗原（CEA）、糖类抗原724（CA724）以及外周血NLR水平均较治疗前降低（P＜0.05）,外周血LMR较治疗前增高（P＜0.05）,观察组治疗后血清CA125、CA199、CEA、CA724水平以及外周血NLR低于对照组（P＜0.05）,外周血LMR水平高于对照组（P＜0.05）;两组不良反应发生率比较无差异（P＞0.05）。观察组中位无进展生存期（PFS）、OS生存期长于对照组（P＜0.05）。多因素Cox回归分析结果显示TNM分期Ⅳ期、远处转移、高NLR是影响晚期食管鳞癌患者预后的危险因素（P＜0.05）,高LMR、卡瑞利珠单抗联合标准二线化疗是保护因素（P＜0.05）。结论：卡瑞利珠单抗联合标准二线化疗可提高晚期食管磷癌临床疗效,降低血清肿瘤标志物以及外周血NLR水平,提高外周血LMR水平,TNM分期Ⅳ期、远处转移、高NLR是影响晚期食管鳞癌患者预后的危险因素,高LMR、卡瑞利珠单抗联合标准二线化疗是其保护因素。     

基于单克隆抗体的肿瘤免疫疗法研究进展

一百多年前,"魔术子弹"学说首次提出了具有靶向特异性的抗体可以用来治疗疾病。此后,随着单克隆抗体制备技术的成熟,以及癌症血清疗法的发展,靶向肿瘤抗原的治疗性抗体开始进入临床,至今已有20余种抗体药物用于癌症的治疗。近两年,以免疫检查点蛋白拮抗剂、双特异性抗体、抗体药物偶联药物等为代表的新一代抗体药物,不断在治疗恶性肿瘤上取得突破性进展。本文回顾了抗肿瘤抗体的发展历程,总结了新一代抗体药物的作用机制与构建策略,以及主要临床副作用。并对基于抗体的肿瘤免疫疗法未来发展趋势进行了展望。     

曲妥珠单抗修饰的阿霉素免疫脂质体的制备及体外性质研究

目的:制备表面键合曲妥珠单抗(trastuzumab,TMAB)的阿霉素免疫脂质(Doxorubicin-loadedimmunoliposome,DOX-IML),并对其体外性质进行研究。方法:将磷脂酰胆碱、胆固醇、阿霉素、DSPE-MPEG2000以一定比例混合,采用薄膜超声分散法制备阿霉素脂质体,将聚乙二醇衍生物(1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[succinimidyl(polyethylene glycol)-3400]、DSPE-PEG3400-NHS)连接到TMAB;再与阿霉素脂质体连接得到DOX-IML。研究不同浓度的TMAB对DOX-IML入胞能力及细胞毒性的影响;测定免疫脂质体的包封率、载药率、粒径、电荷及稳定性等性质;动态透析法模拟体外释药特性,激光共聚焦观察免疫脂质体对AU565细胞抗体介导的入胞作用;MTT法研究DOX-IML抑制肿瘤细胞的生长。结果:成功制备了表面键合TMAB的阿霉素免疫脂质体,配体载入率分别是53%、75.5%、84%;每毫克DOX-IML中抗体的含量分别是37、83、108μg·mg-1;阿霉素的包封率为76.85%、载药量为8.03%;粒径131.8nm;表面电荷-27mV。抗体含量83μg·mg-1的DOX-IML组的细胞存活率最低,细胞内荧光强度最高,且该免疫脂质体稳定性良好,具有一定缓释作用。DOX-IML具有较强的特异性靶向作用,其入胞能力和细胞毒性均高于阿霉素脂质体。结论:DOX-IML具有较强的特异性靶向作用,其入胞能力和细胞毒性均高于阿霉素脂质体,抗体含量适中时其入胞能力和细胞毒性最强。     

曲妥珠单抗联合常规化疗治疗HER-2过度表达晚期贲门癌患者的临床效果与2年预后

目的：观察并探讨曲妥珠单抗（herceptin,HCP）联合常规化疗治疗HER-2过度表达晚期贲门癌患者的临床疗效与药物安全性分析并化疗后2年内随访结果。方法：将我院2008年11月-2009年10月间入选的HER-2表达＂＋＋＂及以上的72例晚期贲门癌患者随机单盲分为观察组（37例）与对照组（35例）,对照组患者采用DCF（多西紫杉醇、顺铂、5-氟尿嘧啶）动脉灌注化疗方案,观察组在此基础上联合使用靶向药物HCP,对比两组化疗结束后临床效果、生活质量改善情况、化疗中药物不良反应及2年内生存率。结果：①观察组与对照组化疗效果与生活质量改善情况构成不同（P〈0.05）,观察组部分缓解比例（62.2%）、总有效率（64.9%）及生活质量改善比例（64.9%）均高于对照组水平（42.9%、42.9%、42.9%）;②两组不良发生情况相仿,观察组出现Ⅱ度及以发热（52.8%）、寒战（45.9%）比例与出现心功能障碍的比例（10.8%）高于对照组比例（22.9%、17.1%、0.0%）;③观察组与对照组24个月生存率分别为43.2%、20.0%,死亡者平均存活时间分别为（14.7±2.8）m、（12.5±2.1）m,两指标差别均具有统计学意义（P〈0.05）。结论：HCP联合DCF化疗方案能明显改善HER-2过度表达晚期贲门癌患者疗效与生活质量,并延长患者生存时间,但应警惕联合用药中的心血管毒性。     

非洲猪瘟病毒CP204L基因的原核表达与单抗制备

由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的非洲猪瘟(ASF)给我国养猪业带来了不可估量的经济损失,严重阻碍了我国养猪业的发展,研发ASFV快速诊断试剂是目前最重要的内容之一。CP204L基因编码ASFV结构蛋白p30。本研究以克隆ASFV的CP204L基因为基础,通过基因重组技术,加入His标签,将构建的重组质粒命名为pET-28a-CP204L。将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,37℃经1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达6h,表达蛋白进行SDS-PAGE鉴定和Western Blot检测。重组蛋白纯化后免疫小鼠制备筛选单克隆抗体,Western Blot和IFA验证单抗的结合特异性。结果表明,重组的pET-28a-CP204L诱导后表达蛋白为30kD,以不可溶性包涵体形式存在;表达蛋白利用His标签进行纯化,获得纯化蛋白2mg,单克隆抗体筛选获得5株IgG亚型的ASFV p30蛋白的单抗,且均具有良好的结合活性。本研究为发展ASFV检测方法提供了基础。     

传染性法氏囊病病毒VP3抗原表位的鉴定

利用肽扫描技术对4株IBDV VP3的单克隆抗体(HRB-3F、HRB-7B、HRB-7C和HRB-10E)的抗原表位进行了研究.通过Western blot和ELISA鉴定,将HRB-3F和HRB-7B的抗原表位定位于VP3 109～119 aa(位于IB-DV聚合蛋白的864～874 aa),HRB-7C和HRB-10E的抗原表位定位于VP3 177～190 aa(位于IBDV聚合蛋白的932～945 aa).进一步检测其反应原性及免疫原性,结果表明,这两个表位均能与抗IBDV阳性血清反应.将这两个表位短肽免疫BALB/c小鼠,其血清可以和IBDV反应,具有较好的免疫原性.与D6948、HK46和UK661等多株IBDV相应区域的同源性进行了比较,结果显示,这两个表位在多种毒株中同源性为100%.通过IBDV VP3抗原表位的研究,筛出两个新的保守线性表位并进行精确定位,对进一步分析IBDV结构与功能以及建立以表位为基础的抗原抗体诊断方法具有重要的意义.     

抗黄曲霉尿酸氧化酶单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的:制备抗黄曲霉尿酸氧化酶单克隆抗体。方法:采用杂交瘤技术,获得2株针对重组黄曲霉尿酸氧化酶(rUOX)的杂交瘤细胞McAb17和McAb3;采用盐析和A蛋白亲合层析柱纯化该抗体。结果:McAb17和McAb3的腹水效价达到1∶512000,纯化后获得纯度大于95%的单抗,抗体亚类(型)分别为IgG1/k型和IgG2a/k型;ELISA结果显示制备的单抗与rUOX和Rasburicase(商品化rUOX)可发生特异反应。结论:制备了抗黄曲霉尿酸氧化酶单克隆抗体McAb17和McAb3,为检测rUOX在动物体内的代谢变化提供了良好的实验基础。     

雷珠单抗联合复方血栓通与单独雷珠单抗治疗渗出老年性黄斑变性的前瞻性随机对照试验研究

目的:探讨复方血栓通(cFXST)对玻璃体腔注射雷珠单抗(IVR)治疗湿性老年性黄斑变性(wet-AMD)的辅助治疗作用。方法:纳入湿性老年性黄斑变性患者38例,以1:1的比例随机纳入Lucentis组(单独玻璃体腔注射雷珠单抗,19例)和cFXST组(玻璃体腔注射雷珠单抗联合复方血栓通,19例)。Lucentis组患者每月行玻璃体腔注射雷珠单抗(IVR),共计3次;cFXST组患者除IVR外,每日口服cFXST。分别在基线、玻璃体腔注射Lucentis后1个月、3个月记录最佳矫正视力(BCVA)和光学相干断层扫描(OCT)影像上视网膜新生血干至色素上皮下厚度(CNV-PED)。结果:cFXST组CNV-PED厚度在1月和3月分别降低31.7%和36.1%,高于Lucentis组的19.7%(P=0.021)、24.2%(P=0.018)。3个月后,cFXST组BCVA变化(P=0.045)及视力提高显著的患者比例(16/16 vs 8/17,P=0.001)明显高于Lucentis组。结论:每日口服cFXST治疗可提高抗VEGF治疗老年wet-AMD的短期疗效。     

离子交换色谱对抗VEGFR2单抗的电荷异质性分析

目的采用离子交换高效液相色谱(CEX-HPLC)分析抗VEGFR2(抗血管内皮生长因子受体2)单抗制品的电荷异质性。方法应用CEX-HPLC技术,对VEGFR2单抗进行电荷异质性分析,并结合羧肽酶B(CpB)和N-糖酰胺酶F(EndoF2)酶切,初步研究其电荷异质性的成因。结果用CEX-HPLC分析CpB酶切前后单抗,证明其碱性变异体主要由C末端赖氨酸不均一性引起;分析EndoF2酶切前后处理的单抗,证明其酸性变异体部分由N-糖末端上的唾液酸修饰所引起。通过2种酶的顺序酶切可相对准确地分析含C-末端赖氨酸以及含唾液酸单抗的比例。结论采用CEX-HPLC可较好地分析单抗的电荷异质性;并结合合适的酶切处理,可判断单抗主要电荷异质性的来源,为保证单抗制品生产工艺的稳定性及质量控制提供了有效手段。