HBV pre-c-Fc融合蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及其生物学活性研究

目的:在杆状病毒表达系统中表达融合蛋白乙型肝炎病毒前C蛋白-小鼠IgG Fc蛋白(HBV precore protein-mouse IgG Fc,HBV pre-c-Fc),并鉴定其免疫原性。方法:目的基因HBV prec-Fc连接到pFastBac1载体,获得的pFastBac1-HBV pre-c-Fc质粒转化DH10Bac感受态,通过Tn7转座子将目的基因转座到Bacmid中,得到Bacmid-HBV pre-c-Fc穿梭载体,脂质体包被后转染Sf9昆虫细胞获得P1代病毒,重复转染Sf9获得高滴度病毒。收集细胞上清超滤后通过Protein G亲和层析柱纯化得到目的蛋白HBV pre-c-Fc。纯化的蛋白大腿内侧肌肉注射免疫BALB/c小鼠并检测血清中乙型肝炎病毒核心蛋白抗体产生量。结果:HBV pre-c-Fc在昆虫细胞中成功表达,纯化后蛋白纯度达90%以上,蛋白产量约为3.03mg/L,纯化蛋白能有效刺激BALB/c小鼠产生特异抗体。结论:成功地在杆状病毒表达系统中表达了具有免疫原性的HBV pre-c-Fc蛋白,为生产乙肝治疗性疫苗奠定了基础。     

VE和L-肌肽对大菱鲆幼鱼生长、抗氧化、非特异性免疫及血清生化指标的影响

实验以大菱鲆（Scophthalmus maximus）幼鱼[（14.00±0.02）g]为研究对象,采用2×4双因素设计,设2个VE水平（0和75 mg/kg）和4个L-肌肽水平（0、50、100和200 mg/kg）,研究VE和L-肌肽对其生长、抗氧化、非特异性免疫及血清生化指标的影响。实验共分8组,每组3个重复,每个重复46尾鱼,实验周期为8周。结果显示:（1）在饲料中添加75 mg/kg VE显著提高了大菱鲆幼鱼增重率（WGR）和特定生长率（SGR）（P < 0.05）,L-肌肽添加量≤100 mg/kg对实验鱼生长性能无显著影响（P>0.05）,添加量为200 mg/kg时鱼体WGR、SGR和蛋白质效率（PER）显著降低,饲料系数（FCR）显著升高（P < 0.05）;（2）VE和L-肌肽对血清谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）含量及肝脏总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和MDA含量均具有显著的交互作用（P < 0.05）,在VE 75 mg/kg水平下,L-肌肽添加量为50和100 mg/kg时血清GSH-PX活性最高,L-肌肽添加量为100和200 mg/kg时血清CAT活性最高且与添加量为50 mg/kg差异不显著（P>0.05）,添加100 mg/kg肝脏T-AOC和SOD活性达到最高且50 mg/kg组的SOD与100 mg/kg组差异不显著（P>0.05）,主效应结果显示,VE显著提高了血清T-AOC、SOD及肝脏CAT活性（P < 0.05）,L-肌肽显著提高了血清T-AOC（P < 0.05）;（3）VE和L-肌肽对血清补体C3和LZM活性交互作用显著,在75 mg/kg VE水平下,L-肌肽添加量为50 mg/kg时,补体C3水平最高（P < 0.05）,主效应显示,VE和L-肌肽对血清总蛋白（TP）影响均不显著（P>0.05）;（4）添加VE显著降低了血清总胆固醇（TCHO）和甘油三酯（TG）含量（P < 0.05）,添加L-肌肽显著降低了血清TG含量,且在L-肌肽50 mg/kg时达到最低。综合考虑大菱鲆幼鱼[（14.00-39.43）g]的生长性能、抗氧化性能、非特异性免疫及血清生化指标得出,在实验配方条件下（鱼油70 g/kg,大豆卵磷脂10 g/kg）,添加VE 75 mg/kg时,L-肌肽的适宜添加量为50 mg/kg。     

骨钙素对高糖低脂饮食引起的糖尿病新西兰兔胰腺的影响

目的:基于一贯性高血糖症能导致胰岛素抵抗的假说,我们研究了高糖低脂饮食导致的非胰岛素依赖糖尿病大鼠的生理功能和组织学改变.方法:取正常新西兰兔24只,随机分为正常组、糖尿病(DM)组、糖尿病骨钙素干预(DM+OCGY)组.采用高唐低脂饮食喂养新西兰兔,建立非胰岛素依赖糖尿病模型.建立模型后,DM+OCGY组腹腔注射骨钙素(2.5 mg/kg·d),DM组腹腔注射相等量生理盐水.一个月后处死新西兰兔.用HE染色方法检测新西兰兔胰腺形态改变.结果:高糖低脂饮食能有效引起新西兰兔血糖的升高,尿糖阳性,HE染色表明胰腺细胞发生相应改变,DM+OCGY组空腹血糖的浓度明显降低,能逆转胰腺的相关改变.结论:高糖低脂饮食能诱导非胰岛素依赖糖尿病的发生,骨钙素对非胰岛素依赖型糖尿病血糖浓度有一定的调节作用.     

鸡贫血病毒衣壳蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备

利用PCR技术,以pPrpo-VP1为模板扩增得到鸡贫血病毒的衣壳蛋白基因(VP1),以T4多聚核苷酸激酶磷酸化处理、纯化后,克隆至表达载体pET-30a(+) 中,从而构建了原核表达质粒pET30-VP1.将pET30-VP1转化至感受态细胞E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析,可见约45kDa的目的蛋白获得表达.该蛋白经亲和层析纯化后,免疫6-8w的雌性Balb/c鼠,三次免疫后,采血分离血清,制得抗VP1的多克隆血清.以纯化的VP1为包被抗原,用ELISA方法检测,制备的血清效价达12800×以上.以Western blot 检测,该血清可与目的蛋白发生特异性反应,证明其具有良好的免疫原性.VP1蛋白的成功表达及其多克隆抗体的制备为进一步研究VP1蛋白的功能及开展CAV疫苗及诊断制剂的研制奠定了基础.     

西安市居民膳食磷摄入与高血压罹患的关联性研究

目的：研究西安市居民膳食磷摄入状况及其与高血压罹患的相关关系,为制定高血压综合防治策略提供科学依据。方法：于2019年1月调查西安市某社区18岁以上在该地居住6个月以上的居民共1 474人,采用健康危险因素问卷和膳食频率调查表获取个人基本信息、膳食磷摄入及高血压患病情况。通过单因素分析和多因素Logistic回归模型,探讨膳食磷摄入和高血压患病的影响因素及相互关联。结果：西安市成年人高血压患病率为27.1%,其中男性为30.9%、女性为22.7%。调查对象膳食总能量和磷的日均摄入量分别为（2 260.1±866.0）kcal/d和（1 404.1±646.2）mg/d。性别、文化程度、家庭人均月收入、体重指数（BMI）和饮酒均会影响高血压患病和膳食磷日均摄入量。多因素回归分析结果显示,调整以上混杂因素及膳食因素后,膳食磷摄入与高血压罹患风险正相关,磷摄入最高分位组的高血压患病风险是最低摄入组的1.86（95%CI：1.01~3.46）倍。结论：西安市成人膳食磷摄入量与高血压罹患风险的增加相关,适量降低膳食磷摄入量对高血压防治具有重要意义。     

不同年龄大鼠尿液代谢组学研究

旨在探究健康大鼠的尿液代谢物在生长、发育和衰老过程中的年龄相关性变化。采集大鼠出生后3周、5周、7周、9周、12周、56周和111周共7个年龄点的尿液样本,利用GC/TOF-MS平台进行代谢组学检测。结果显示,所有尿液样本在主成分分析与偏最小二乘法判别分析中出现组内聚类和组间分离。氨基酸类、有机酸类和碳水化合物类代谢物是大鼠尿液样本中的主要代谢物类型。尿液代谢物如4-羟基脯氨酸、L-赖氨酸和尿酸等随年龄增加逐渐下降,D-核糖、乌头酸和富马酸等在老年阶段水平升高,而烟酸和5-羟基吲哚等在老年阶段水平下降。以上结果揭示了年龄影响大鼠尿液代谢,多种尿液代谢物在生长、发育和衰老过程中出现年龄相关性变化。     

乌司他丁对机械通气致肺损伤大鼠肺组织CC16表达的影响

目的通过观察乌司他丁（UTI）对大潮气量机械通气大鼠肺组织Clara细胞分泌蛋白（CC16）表达的影响,探讨CC16在机械通气所致肺损伤（VILI）发病中作用以及UTI对VILI的干预作用。方法 24只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、大潮气量组和UTI干预组,观察其肺组织病理学改变,测定肺组织中丙二醛（MDA）和BALF中总蛋白（TP）含量,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测肺组织CC16 mRNA的表达,采用免疫组织化学染色法检测肺组织中CC16蛋白表达及Clara细胞计数。结果与对照组比较,大潮气量肺组织MDA的含量及BALF总蛋白含量明显升高（P〈0.01）,而肺细支气管上皮细胞CC16mRNA及其蛋白表达水平明显降低（P〈0.01）;与大潮气量组比较,UTI干预组大鼠肺组织中MDA的含量及BALF总蛋白含量明显降低（P〈0.01）,而肺细支气管上皮细胞CC16mRNA及其蛋白表达水平明显升高（P〈0.01）。结论大潮气量机械通气导致肺组织CC16 mRNA及其蛋白表达水平降低在VILI发病中起重要作用,乌司他丁不但能促进Clara细胞分泌CC16而抑制肺组织炎症反应,还能抑制脂质过氧化物的产生,对VILI有一定保护作用。     

洞庭青鲫肌肉营养成分分析及营养价值评定

对2002年在湖南澧县澧水尾闾、洞庭湖区边缘化的封闭型湖泊——北民湖发现的洞庭青鲫(Carassius auratus var.dongtingking)(n=15)的含肉率和肌肉中的生化成分、比能值及氨基酸测定分析。结果表明,洞庭青鲫的含肉率为52.18%;其肌肉生化成分(鲜重百分比)为:水分78.14%,蛋白质18.63%,脂肪1.51%,灰分1.22%,比能值5.09kJ/g及E/P值27.32kJ/g。肌肉中含有17种氨基酸,总量为866.12mg/g(干重比);其中9种人体必需氨基酸含量占氨基酸总量的48.21%(盐酸水解法);支/芳值达2.81,接近人体正常所需;4种鲜味氨基酸占氨基酸总量的50.39%。根据氨基酸评分(AAS)和化学评分(CS)标准,洞庭青鲫的第一限制因子是甲硫氨酸和胱氨酸,其次是缬氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸。即洞庭青鲫氨基酸含量与组成与彭泽鲫(C.a.var.pengze)、异育银鲫(C.a.var.allogynogeneticrp)、萍乡肉红鲫(C.a.var.pingxing red)相比,均存在差异。     

季节因素对过敏性结膜炎就诊及用药的影响研究

目的:探讨过敏性结膜炎(AC)与抗过敏滴眼液用量间的关系,并分析季节因素对其产生的影响。方法:采用重力沉降法于2015年全年对北京城区主要气传花粉浓度进行监测,统计2015年我院变态反应科门诊AC就诊诊次及三种主要抗过敏滴眼液处方量,并采用Spearman相关性分析AC就诊诊次与抗过敏滴眼液用量间的关系。结果:2015年全年共监测花粉76164颗,花粉分布呈现春秋两季高峰,花粉分布最高的月份为4月(34.84%),其次为3月(29.72%),5月(10.87%),9月(10.52%),8月(9.94%);花粉分布最少的月份为1月和11月(0.11%)。春季花粉高峰期(3-5月份)月平均花粉数量为19150颗,秋季花粉高峰期(8-9月份)月平均花粉数量为7792颗,秋季花粉高峰期月平均花粉数量低于春季。2015年我院变态反应科AC月平均就诊诊次为(80.42±54.28)人次,8月份AC诊次最高,占全年的18.03%,其次为9月份(16.99%)、4月份(13.99%)、3月份(12.54%)、5月份(7.98%)。抗过敏滴眼液月平均用量为(148.67±148.63)瓶,8月份抗过敏滴眼液用量最高,占全年的28.25%,其次为3月份(17.21%)、9月份(14.18%)、4月份(13.11%)、5月份(8.30%),AC就诊次数及抗过敏滴眼液处方量均呈现春秋季节高峰。Spearman相关性分析显示,每月花粉量与AC就诊诊次、抗过敏滴眼液用量呈正相关(r=0.806,0.830,P=0.000,0.000),AC就诊诊次与抗过敏滴眼液用量呈正相关(r=0.923,P=0.000)。结论:花粉分布、AC诊次及抗过敏滴眼液用量均出现春秋季节高峰。秋季花粉致敏性高于春季花粉,用药及AC就诊最高峰均出现在秋季。     

龙眼采后果肉劣变的差异表达蛋白分析

为探索龙眼(Dimocarpus longan)果肉常温劣变过程中蛋白质的变化, 采用蛋白质组学的方法, 在‘福眼’龙眼果肉常温劣变过程中发现共有24 个2 倍差异表达蛋白, 其中21 个蛋白被成功鉴定。这些蛋白参与了应激反应与防御(56%)、能量与碳代谢(19%)、初级代谢(5%)、蛋白转运(5%)和细胞骨架(5%)等细胞代谢活动。大多数与抗氧化作用密切相关的蛋白质都下调表达, 说明龙眼采后果肉的抗氧化能力有所下降, 不能有效地缓解ROS 积累引起的毒性作用, 从而使果肉劣变。此外, 与能量代谢相关的蛋白全部下调表达, 表明龙眼果实采后果肉劣变可能与能量供应不足有关。这些结果为龙眼采后保鲜技术研究提供科学依据。