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101.
采用Rotofor等电聚焦和分子筛技术纯化大肠杆菌表达的重组链激酶(r—SK),其纯度为97%。比活性1×106IU/mg,回收率41%。分析所纯化的r—SK N端氨基酸顺序证实其1—15个氨基酸顺序与SK基因的核苷酸顺序所示3联密码子一致。以纯化r—SK为抗原,通过杂交瘤技术构建了分泌抗r—SK单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞(4D11),该McAb属IgG1亚型.特异地作用于r-SK和C组口溶血性链球菌分泌的SK。用底物显色法测定该McAb可抑制SK对纤溶酶原的激活。Western blot法证实该McAb能识别分子量为16 250Da的r—SK的CNBr裂解片段。推测SK蛋白中第71残基至第237残基间的氨基酸顺序参与SK与纤溶酶原的结合。 相似文献
102.
鲑鱼生长激素基因分泌型表达质粒的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
生长激素(GH)是动物垂体前叶分泌的一种多肽类激素.应用分子重组及PCR等技术,构建了一种鲑鱼生长激素基因分泌型表达质粒pOsGH153,使编码鲑鱼生长激素成熟肽的序列克隆在大肠杆菌分泌型表达载体PIN-Ⅲ-ompA内,直接位于编码大肠杆菌外膜蛋白A信号肽序列的下游,在Lpp-Lac杂合启动子控制下,经IPTG诱导,分子量约23 000的鲑鱼生长激素在大肠杆菌中获得高效表达,该产物具有天然鲑鱼生长激素的免疫活性,直接分泌到细胞周质,而信号肽被自动剪除. 相似文献
103.
牛生长激素释放因子的融合表达及其产物的化学加工 总被引:2,自引:0,他引:2
通过寡核苷酸引导的定位突变,在人工全合成的第27位为Ile的牛生长激素释放因子[Ile27]bGRF(1-44)OH基因的5'端ATG后插入Trp密码子序列,并分别了构建了Pl promoter控制下、以β-半乳糖苷酶和protein A结合IgG domainB、C为载体蛋白的融合型基因表达质粒pBLE310和pBLPAE2D,在大肠杆菌中得到高效表达。经SDS-PAGE分析,表达产物β-Gal 相似文献
104.
人白细胞介素-3(humanInterleukin3,hIL-3)是一种造血前体细胞早期分化的关键调节因子。用PCR方法从人T淋巴细胞cDNA文库中扩增出0.44kb的DNA片段,并克隆入pUC19载体中。经DNA序列测定,确定0.44kb的PCR产物合完整的编码人白细胞介素-3成熟蛋白cDNA序列,并在信号肽与成熟蛋白编码序列之间通过突变引入了限制性内切酶位点和ATG起始密码。构建的PL启动子控制下的hIL-3cDNA表达质粒,转入大肠杆菌Tap106,经42℃热诱导,获得hIL-3的表达产物。SDS-PAGE电泳显示表达产物为15kd,约占细菌总蛋白的15%。表达产物经ELISA和Western-blot验证。hIL-3表达产物在细胞内形成包涵体,纯化包涵体,使产物纯度提高到70.8%,产物复性后,能明显促进hIL-3依赖细胞株生长,具有明显的生物活性。产物转移到PVDF膜后进行N端序列分析,N端16个氨基酸正确。 相似文献
105.
重组纤溶酶原激活剂抑制剂—2基因在HT1080亚克隆中的表达 总被引:3,自引:1,他引:2
曹祥荣 《Acta biochimica et biophysica Sinica》1994,26(3):333-337
106.
人抑胃肽的研究:合成和性质 总被引:1,自引:0,他引:1
人抑胃肽的研究:合成和性质崔大敷,崔恒苒,徐明华,曹蕙婷,朱尚权(中国科学院上海生物化学研究所,200031)陈可靖,邓华云(上海医科大学附属中山医院,200032)关键词人抑胃肽,合成,生物活性抑胃肽(简称GIP)最早由Brown等’”从猪小肠分离... 相似文献
107.
利用标记N-糖链的凝集素亲和层析法研究了佛波醇肉桂酸乙酸酯(PMA)对人肝癌细胞SMMC-7721表面糖蛋白上N-糖链结构的影响,发现100nmol/L的PMA处理5天后,可使细胞表面N-糖链中高甘露糖型和杂合型以及四天线、C2C2,6三天线复杂型的比例增高,而二天线复杂型降低。此结果与我们曾报道的视黄酸(RA)和双丁配环磷酸腺苷(db-cAMP)对该细胞表面N-糖链的影响相反。因RA和db-cAMP是SMMC-7721细胞的分化诱导剂,可抑制细胞生长;而PMA是该细胞的增殖促进剂,故细胞表面N-糖链的变化与细胞的分化和增殖密切相关。 相似文献
108.
正常细胞转化成癌细胞后,其表型发生了一系列不同于正常细胞的变化,成为肿瘤细胞的标志。Gold和Freeman(1965)用人结肠癌组织的抽提物免疫兔,发现有些用人正常结肠组织吸收后的抗血清能够与肿瘤组织和胚胎肠道抽提物起反应,但不与正常组织抽提物起反应,由于这种抗原最初被发现在胚胎组织,故名为癌胚抗原(embryonic carcinoma antigen,简称CEA)。用敏感的放射免疫或免疫酶标方 相似文献
109.
以人类腺病毒(Ad)为表达载体发展多价展组口服活疫苗,尤其在乙型肝炎病毒(HBV)疫苗研制上成效显著,表达HBcAg,HBeAg和HBsAg的重组人类Ad7型(d7)活载体疫苗在实验动物免疫上取得良好效果。在重组Ad活载体疫苗研制方面是一项重大进展,表达HBsAg的重组Ad7活载体口服疫苗已有人体初次免疫试验的报道。 相似文献
110.
本工作利用放射性标记的bGH基因(3.0kb)为探针,通过原位杂交定位牛生长激素基因于染色体5q22-26内。该结果与以前的bGH基因定位的结果不同,讨论了基因探针、基因定位方法等方面与定位准确性的关系。 相似文献