全文获取类型
收费全文 | 1816篇 |
免费 | 74篇 |
国内免费 | 493篇 |
出版年
2024年 | 7篇 |
2023年 | 17篇 |
2022年 | 20篇 |
2021年 | 20篇 |
2020年 | 22篇 |
2019年 | 25篇 |
2018年 | 24篇 |
2017年 | 25篇 |
2016年 | 17篇 |
2015年 | 24篇 |
2014年 | 94篇 |
2013年 | 83篇 |
2012年 | 61篇 |
2011年 | 79篇 |
2010年 | 83篇 |
2009年 | 102篇 |
2008年 | 98篇 |
2007年 | 78篇 |
2006年 | 65篇 |
2005年 | 115篇 |
2004年 | 110篇 |
2003年 | 148篇 |
2002年 | 67篇 |
2001年 | 58篇 |
2000年 | 68篇 |
1999年 | 73篇 |
1998年 | 61篇 |
1997年 | 73篇 |
1996年 | 108篇 |
1995年 | 87篇 |
1994年 | 82篇 |
1993年 | 95篇 |
1992年 | 76篇 |
1991年 | 49篇 |
1990年 | 31篇 |
1989年 | 39篇 |
1988年 | 28篇 |
1987年 | 20篇 |
1986年 | 26篇 |
1985年 | 8篇 |
1984年 | 11篇 |
1983年 | 2篇 |
1982年 | 2篇 |
1981年 | 1篇 |
1965年 | 1篇 |
排序方式: 共有2383条查询结果,搜索用时 203 毫秒
51.
棉铃虫致病菌BT—931菌株的应用研究 总被引:1,自引:0,他引:1
1992-1993年,作者从菏泽、聊城棉田采集的自然罹病死亡棉铃虫幼虫体内,分离到2个较高毒效的Bt菌株,编号为BT—931和BT—021,经室内毒力测定和田间药效试验表明,防效及保蕾效果接近或超过化学农药,菌药混剂3—5天平均防治效果达87.0-91.6%,增效作用显著。经1994年大田防治示范表明,利用BT—931菌剂。配合化学农药防治棉铃虫,具有成本低、保护天敌、持效期长、增产效益高等优点。本研究对菌剂的田间应用技术进行了试验示范。 相似文献
52.
本文以人分裂细胞核抗原(PCNA)基因作为目的基因,把包括PCNA基因5′端非翻译区(5′NTR)的24bp和编码38个氨基酸114 bp的顺序插入pTZ19R,构建与LacZ’5′端的融合基因。用寡核苷酸定点突变法在PCNA 5′NTR形成SD顺序,再用PCR法在SD顺序左右两侧分别随机突变6个和7个碱基,使它们与结构基因5′端顺序自发地形成各种可能的翻译起始区(TIR)二级结构。重组质粒转化JM109(DE3),以T7 RNA聚合酶-T7启动子调控转录。对288个重组子的β-gal活性测定表明,不同重组的表达量可相差55倍,其中9个表达量不同的重组子的RNA dot blot证实它们在转录水平无明显表达差异。由此提示,该研究策略和方法能有效地改变目的基因的TIR二级结构和捕获具有高翻译起始效率的表达克隆。 相似文献
53.
精子介导鱼类基因转移和聚合酶链反应检测技术 总被引:18,自引:0,他引:18
金鱼精子与美洲大绵wei的抗冻蛋白基因一起保温30分钟后,再与卵子受精,共获得145尾成鱼和若干胚胎。从胚胎和成鱼中提取DNA经聚合酶链反应(PCR法)扩增和Southern blot分子杂交表明,外源的抗冻蛋白基因进入了部分受体鱼的染色体组内。测定了45尾一年龄实验鱼中,有12尾显示出明确的杂交带,阳性率为26%。 相似文献
54.
利用基因工程技术,将质粒pYX382用xbaI和EcoRl切下插入的TGFa—PE40融合
基因片段-连接到可表达载体pCB604的XbaⅠ/EcoR Ⅰ位点中,构建成新的重组质粒p2x—TP1。P2x—TP1转化E.coli BL2l感受志菌后,在ⅠPTG诱导下Ⅰpp启动子转录表达TGFα—PE40融合蛋白。表达产物主要以包涵体形式沉积在细胞内。融合蛋白表达量的高低与诱导时的细胞密度,诱导的温度以及培养基有关。在一定范围内与诱导剂的剂量以及诱导时间的长短无关。P2x—TPl重组质粒在工程菌中的表达TGFα-PE40融合蛋白量约为50mg/L。 相似文献
55.
体内体外培养下飞蝗雄性生殖细胞的分化 总被引:1,自引:1,他引:0
在单一TCl99或GRACE培养液中培养的四龄三天东亚飞蝗(Locusta mtgratoria mani lensis精小管,其精子发生只发育至初级精母细胞期,培养液中添加10%小牛血清或飞蝗精巢匀浆液可促使其发育至次级精母细胞期,添加10%分别取自东亚飞蝗蝗蝻、柞蚕蛹及蓖麻蚕蛹的血淋巴可促进其产生约20%的精子。 蜕皮激素及保幼激素对精子的产生无显著影响。移植培养的精小管在受体飞蝗体内不能发育产生精子,注射20μg/虫蜕皮激素可促使其产生大量精子。完整精巢无需注射蜕皮激素即可在受体飞蝗体内发育产生精子。结果表明,昆虫血淋巴内可能含有促细胞分化类因子,此(类)因子可能无种属特异性,外源蜕皮激素可能对精子发生无直接作用,但精子发生同时需要蜕皮激素和血淋巴因子,精巢本身可能有自己的蜕皮激素来源。 相似文献
56.
双价外壳蛋白基因植物表达载体的构建及马铃薯转基因植株的鉴定 总被引:10,自引:0,他引:10
在克隆了马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y 病毒(PVY)和马铃薯卷叶病毒(PLRV)的外壳蛋白基因的基础上,构建同时包含PVX和PVY 与PVY 和PLRV 两个外壳蛋白基因植物表达框架的表达载体,通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化烟草(Nicotianatabacum )和生产上常用的几个马铃薯(Solanum tuberosum )优良品种:“Favorita”、“虎头”、“克4”。经PCR检测证明外源基因已整合到植物的染色体上,得到批量转基因植株。在转PVX+PVY 外壳蛋白基因的烟草上接种PVX (5 μg/m L)、PVY(20 μg/m L)病毒,得到有一定抗性的植株 相似文献
57.
人脑髓鞘碱性蛋白cDNA体外扩增、克隆和鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
采用聚合酶链反应(PCR)从人脑cDNA文库中扩增出600bp的髓鞘碱性蛋白(MBP)cDNA片段,与载体pGEM-3Zf(+)平端连接.重组质粒DNA转化宿主菌JM109,在含X-gal和IPTG的平板上直接筛选阳性克隆.限制性内切酶分析和成套引物扩增鉴定证明,该克隆含有7个外显子的21.5kD人脑MBP全长编码序列. 相似文献
58.
非同位素PCR-单链构象多态性技术的建立和应用 总被引:2,自引:0,他引:2
PCR-单链构象多态性技术问世以来,成为研究基因突变的工具,特别是在分子肿瘤学研究中,广泛应用于癌基因,抑癌基因突变的研究,常规PCR-SSCP采用同位素标记PCR产物,测序板电泳分离突变,在操作和费用上有种种局限,文章建立了一种非同位素PCR-SSCP技术;通过不对称PCR获得单链,普通PAGE分离,经银染检出突变,用这种方法,还研究了四株鼻咽癌细胞株CNE1,CNE2,HK1和SUNE1中肿瘤 相似文献
59.
人白细胞介素-3(humanInterleukin3,hIL-3)是一种造血前体细胞早期分化的关键调节因子。用PCR方法从人T淋巴细胞cDNA文库中扩增出0.44kb的DNA片段,并克隆入pUC19载体中。经DNA序列测定,确定0.44kb的PCR产物合完整的编码人白细胞介素-3成熟蛋白cDNA序列,并在信号肽与成熟蛋白编码序列之间通过突变引入了限制性内切酶位点和ATG起始密码。构建的PL启动子控制下的hIL-3cDNA表达质粒,转入大肠杆菌Tap106,经42℃热诱导,获得hIL-3的表达产物。SDS-PAGE电泳显示表达产物为15kd,约占细菌总蛋白的15%。表达产物经ELISA和Western-blot验证。hIL-3表达产物在细胞内形成包涵体,纯化包涵体,使产物纯度提高到70.8%,产物复性后,能明显促进hIL-3依赖细胞株生长,具有明显的生物活性。产物转移到PVDF膜后进行N端序列分析,N端16个氨基酸正确。 相似文献
60.