干细胞培养中的新发现

在培养人胚胎干细胞时需使用小鼠血清成分作为滋养元素,如果撤除小鼠血清成分,干细胞就会从干细胞状态变为分化状态。这些小鼠血清成分有可能对分化的组织器官造成污染,从而引起免疫排斥。生物学家数年来一直寻找不使用小鼠成分的培养条件保持人胚胎干细胞非分化状态。今年,美国威斯康辛的科学家,徐和James Thomson等(James Thomson是第一个成功分离人胚胎干细胞的科学家)发现用人工合成的成纤维生长因子2就可以保持人胚胎干细胞处于不分化状态。成纤维生长因子2是通过抑制骨髓多形遗传蛋白(这是一种促干细胞分化的分子)起作用的。     

瓦氏黄颡鱼的胚后发育观察

2002年5~6月,在四川省泸州市、合江县分数批收集到长江野生瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrusvachelli)亲本,通过人工催产、人工授精获得受精卵,对其胚后发育过程进行了观察。瓦氏黄颡鱼的胚后发育过程可以分为卵黄囊仔鱼、晚期仔鱼和幼鱼3个阶段。初孵仔鱼淡黄色,肌节40对,平均全长5.2mm。水温20~22℃时,孵出后第3d口张开;第7d开始摄食;第9d卵黄吸尽,此时鱼苗平均全长12mm,卵黄囊仔鱼阶段结束。晚期仔鱼阶段的仔鱼,胸鳍、尾鳍、臀鳍、背鳍、腹鳍先后发育,至鳍褶消失时晚期仔鱼阶段结束。经过30d的生长和发育,进入幼鱼阶段;此时平均全长达37mm,其形态特征和生态习性均与成鱼相似。     

大熊猫皮肤成纤维细胞系的建立和冷冻保存

简要介绍了大熊猫（Ailuropoda melanoleuca）皮肤成纤维细胞的建系过程和冷冻保存。在研究中,采用200IU／ml的胶原蛋白酶Ⅰ酶在4℃下解离皮肤组织。在DME／Ham’sF12和M199两种培养液中添加100Iu,ml青链霉素、5pg,ml两性霉素B、5pg／ml M-Plasmocin^TM、2mmol／L L-Glu、10μg/ml的胰岛素、40ng/ml EGF和20％（原代）或10％（传代）FBS组成培养液,分别用于细胞的贴壁培养和植块培养,均获得培养成功。用PBS添加0．4％BSA、0．1mol／L蔗糖和10％DMSO组成的冷冻保存液对细胞进行冷冻保存,解冻后获得93．258％的活率,解冻细胞再次培养能正常生长。研究结果表明,大熊猫皮肤成纤维细胞建系和冷冻保存获得成功。     

肌肽对离体培养的鸡肝细胞的影响

研究了肌肽对离体培养的鸡肝细胞的影响。实验采用胶原酶原位二步灌流法获得鸡肝细胞,再用不同浓度的肌肽(①2 μmol L、②2 0 μmol L、③2 0 0 μmol L ,④2 0mmol L)分别进行处理。结果表明,1 )在各个时期,含2 0 μmol L肌肽的实验组肝细胞生长均好于对照组(0 μmol L肌肽) ,而且在48和72h时二者差异显著(P <0 0 5 ) ;2 ) 2 0mmol L肌肽能显著提高肝细胞的分泌白蛋白的功能(P <0 0 5 ) ;3 )添加肌肽的各实验组上清液中丙二醛(MDA)含量在2 4和48h时均低于对照组;4)添加2 0mmol L肌肽的实验组与对照组相比,能维持无血清培养肝细胞的形态达8d。表明了肌肽对鸡肝细胞增殖和分泌白蛋白有促进作用,同时可以保护肝细胞对抗过氧化,保护细胞形态。     

枯草芽孢杆菌B115优化培养及其对气单胞菌的抗菌效果的研究

采用正交实验设计确定了枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）B115的基础培养基成份为：胰蛋白胨1％,酵母膏0．25％,氯化钠0．5％;添加成份最优组合为（NH4）2SO4 0.1％,（K2HPO4＋KH2PO4）（1．4＋0．6）％和柠檬酸三钠0．1％;添加成分最优组合与基础培养基培养产量比较,表明添加K^＋、NH4^＋和柠檬酸三钠能极显著地促进B115的生长。研究了B115对致病性气单胞菌的抗菌效果,结果表明：B115对BSK-10和CL990920有明显抑、杀菌效果,对TL970424无抑菌效果。     

液体培养蛹虫草虫草素和腺苷的代谢量

为提高虫草素和腺苷的代谢量,用高效液相色谱法作检测手段,以二者含量为检测指标,对液体培养的氮源种类、氮源水平、碳源水平、动态变化、培养体系的虫草素及腺苷含量和总量进行研究,结果表明:不仅蚕蛹粉,豆粕和豆粉也是很好的氮源;培养液以3%氮源、4%碳源为佳;振荡培养8d,培养液中虫草素总量是菌丝体中虫草素总量的6倍多;振荡培养7~9d,可使每瓶培养物的虫草素和腺苷总量达到10mg以上。     

灵芝胞内三萜高产菌株的筛选及发酵条件的优化*

通过摇床培养实验,从22个灵芝菌株中筛选出三萜高产菌株GL31,通过单因子和正交试验优化了该菌株生产胞内三萜的发酵条件,包括碳源、氮源、无机盐,初始pH,装液量,接种量,发酵时间等。同时研究了GL31发酵过程中生物量、胞内三萜含量及胞内三萜产量的变化曲线,发现该菌株在摇床培养过程中第84h时菌丝内三萜产量高达3.51×10²g/100mL;另外先摇床培养84h后再静止培养144h的菌丝三萜含量,菌丝三萜产量分别比仅摇床培养84h的菌丝三萜含量,菌丝三萜产量提高了48.6%和65%,该     

枯草芽孢杆菌B115优化培养及其对气单胞菌的抗菌效果的研究*

采用正交实验设计确定了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B115的基础培养基成份为:胰蛋白胨1%,酵母膏0.25%,氯化钠0.5%;添加成份最优组合为(NH₄)₂SO₄0.1%,(K₂HPO₄+KH₂PO₄)(1.4+0.6)%和柠檬酸三钠0.1%;添加成分最优组合与基础培养基培养产量比较,表明添加K⁺     

未培养微生物资源

简要介绍未培养微生物的概念、多样性、研究的理论基础和方法,并就未培养微生物资源的存在形式、开发利用途径和应用前景进行了讨论。     

高硝性化活亚硝酸盐氧化细菌的培养和应用研究

针对本实验室筛选得到的一株亚硝酸盐氧化细菌(nitrite-oxidizingbacteria),研究了在28℃~30℃、摇床转速为110r/min时,pH、氮源、碳源、NaCl、有机物对菌体生长的影响。结果表明,培养基pH8·0~8·5、NaNO2含量4,500mg/L、Na2CO3含量1·5g/L、NaCl含量0~0·5%、葡萄糖含量0~0·1%时,亚硝酸盐氧化细菌生长良好,培养9d时,细菌浓度可达4·6×109MPN/mL,且培养基中的NO2--N能全部被硝化为NO3--N。培养基中NaCl含量大于0·5%、葡萄糖含量大于0·1%时,亚硝酸盐氧化细菌对氮源的利用受到抑制。亚硝酸盐氧化细菌降解淡水养殖池塘中的NO2--N试验表明,在水温25℃、pH8·6的池塘中,NO2--N从菌体投放后的第3d开始下降,18d后NO2--N由1·47mol/L下降至0·49mol/L。