枯草芽孢杆菌B115优化培养及其对气单胞菌的抗菌效果的研究

采用正交实验设计确定了枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）B115的基础培养基成份为：胰蛋白胨1％,酵母膏0．25％,氯化钠0．5％;添加成份最优组合为（NH4）2SO4 0.1％,（K2HPO4＋KH2PO4）（1．4＋0．6）％和柠檬酸三钠0．1％;添加成分最优组合与基础培养基培养产量比较,表明添加K^＋、NH4^＋和柠檬酸三钠能极显著地促进B115的生长。研究了B115对致病性气单胞菌的抗菌效果,结果表明：B115对BSK-10和CL990920有明显抑、杀菌效果,对TL970424无抑菌效果。     

罗氏沼虾野田村病毒中国株RT-LAMP-LFD快速检测方法的研究北大核心CSCD

罗氏沼虾白尾病(White tail disease,WTD)是流行于罗氏沼虾苗种阶段的重要疾病,该病病原被确定为罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachium rosenbergii Nodavirus,MrNV),为了建立罗氏沼虾野田村病毒中国分离株(MrNV-chin)的便捷、灵敏、特异的分子诊断方法,本研究根据罗氏沼虾野田村病毒RNA2基因保守序列的6个区域设计了4条特异性引物和1条检测探针,将环介导等温扩增技术与侧向流层析试纸(Lateral flow dipstick,LFD)相结合,建立了MrNV的RT-LAMP-LFD检测方法。结果表明,该方法的灵敏度是常规琼脂糖凝胶电泳的10倍;从核酸提取到检测结果判定仅需45min;反应特异性强,对其他虾类病毒WSSV、IHHNV、IMNV、TSV和YHV扩增结果均为阴性;操作简单,不需要复杂的仪器,在61℃水浴反应即可;利用LFD试纸显示结果,肉眼可直接观察判定。作为一种快速灵敏实用的分子诊断技术,该方法有利于罗氏沼虾白尾病的诊断与预防。     

罗氏沼虾野田村病毒中国株RT-LAMP-LFD快速检测方法的研究

罗氏沼虾白尾病(White tail disease,WTD)是流行于罗氏沼虾苗种阶段的重要疾病,该病病原被确定为罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachium rosenbergii Nodavirus,MrNV),为了建立罗氏沼虾野田村病毒中国分离株(MrNV-chin)的便捷、灵敏、特异的分子诊断方法,本研究根据罗氏沼虾野田村病毒RNA2基因保守序列的6个区域设计了4条特异性引物和1条检测探针,将环介导等温扩增技术与侧向流层析试纸(Lateral flow dipstick,LFD)相结合,建立了MrNV的RT-LAMP-LFD检测方法。结果表明,该方法的灵敏度是常规琼脂糖凝胶电泳的10倍;从核酸提取到检测结果判定仅需45min;反应特异性强,对其他虾类病毒WSSV、IHHNV、IMNV、TSV和YHV扩增结果均为阴性;操作简单,不需要复杂的仪器,在61℃水浴反应即可;利用LFD试纸显示结果,肉眼可直接观察判定。作为一种快速灵敏实用的分子诊断技术,该方法有利于罗氏沼虾白尾病的诊断与预防。     

枯草芽孢杆菌B115抗菌蛋白的分离纯化及部分性质

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B115分离自水产养殖池塘,对鱼类细菌性败血症致病菌具有较强的拮抗能力。除去菌体培养液用浓盐酸沉淀,乙醇抽提所得的拮抗物粗提液对热不稳定,4℃保存不能超过两周,-18℃保存不能超过45d,对胰蛋白酶不敏感,对蛋白酶K部分敏感,对氯仿敏感,其作用活性pH范围较广,对pH不敏感。粗提液经CM柱离子交换层析和P-60柱层析,得到一个拮抗活性峰P2。粗提物经丙酮分级沉淀及高压液相色谱分离,得到较纯的LP,经质谱仪测定分子量为803.6D。1L发酵的细菌培养液可得到约1mg LP纯品。       

乌鳢结节病病原-诺卡氏菌的分离与鉴定

乌鳢(Ophiocealus argus)又称黑鱼、乌鱼、才鱼,隶属于硬骨鱼、鲈形目、攀鲈亚目、鳢科、鳢属,我国分布于除新疆、西藏外的各大水系,为凶猛的肉食性鱼类,营养、药用和经济价值较高,具有生长快、疾病少、适应性强、产量高等特点,价格稳定,深受养殖户喜爱,已成为淡水名特优养殖的主导品种之一.