枯草杆菌蛋白酶突变体的纯化和晶体生长

应用基因工程手段,获得了枯草杆菌蛋白酶Ｅ的双突变体基因（Ｍ２２２Ａ,Ｎ１１８Ｓ）,此基因在枯草芽孢杆菌中表达得到了既抗氧又耐高温的碱性蛋白酶,含Ｍ２２２,Ｎ１１８Ｓ碱性蛋白酶基因的枯草杆菌发酵液经过硫酸铵分级沉淀和ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５阴离子交换层析柱,再在ＦＰＬＣ层析系统上用Ｈｉｌｏａｄ２６／１０ＳＳｅｐｈａｒｏｓｅＨＰ阳离子交换柱分离得到ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳纯的蛋白酶样品。突变体酶的等电点为ｐＨ８．９,分子量为２７４００,用四肽底物测得的动力学参数也有较大的变化。对该突变体酶进行了晶体生长研究,获得了较大的单晶体。     

天然结晶纤维素的生物合成及其去晶化途径

纤维素是高等植物细胞壁的结构骨架和重要组成成分,由细胞质膜上的纤维素合成酶合成.一个纤维素合成酶亚基合成一根纤维素分子链,多个亚基聚集在一起形成末端复合体(TC),可同时合成多根葡聚糖分子糖链,其在氢键和范德华力作用下快速有序堆积,形成结构紧密的天然微纤丝结晶结构.质膜上有序线性排列的超分子TC合成结晶纤维素Ⅰα,而玫瑰花型排列的TC合成结晶纤维素Ⅰβ.结晶微纤丝的密切有效堆积是植物抗降解的天然屏障.高浓度的酸和离子液体可以在微纤丝间有效扩散,破坏晶体分子链的有序堆积、分子间氢键网络,甚至打断晶体内部的糖苷键,完成天然结晶纤维素的去晶化及解聚过程.酶分子的去晶化过程是发生在微纤丝特定表面上的非均相反应过程,可在常温常压下固或液表面上快速完成,但有效可及表面积是其主要限速瓶颈.因此结合物理、化学方法预处理,低成本高效打破限制酶分子有效扩散的屏障,增加酶分子对结晶纤维素特异性结合的效率和有效可及面积,从而实现天然结晶纤维素高效去晶化及绿色快速降解转化.     

细菌过氧化氢酶的分离、结晶及性质

过氧化氢酶又称触酶(Catalase EC 1.11.1.6),它广泛存在动植物和微生物的细胞内,是一种很有用的工具酶。细菌触酶目前国内外均无产品。本文就细菌酶的分离、结晶和鉴定及性质进行了研究。     

竹叶马兜铃化学成分的研究(Ⅱ)

<正> 竹叶马兜铃Aristolochia bambusifolia的化学成分,我们在前文曾报导,从其块根分得结晶性单体,已鉴定为D—甘露醇、马兜铃酸,马兜铃酸C、朱砂莲内酰胺,β—谷甾醇外,现本文通过光谱方法,报导其另一个化合物晶V1的鉴定。 晶V1:浅黄色针状结晶,溶于氯仿时呈蓝色荧光,熔点207～208℃。其红外光谱有C=O及CH_3吸收峰1710,1225,1060cm~(-1),无NO_2吸收峰。质谱m/z:340(M~+),     

尿激酶催化结构域S356A突变体在毕氏酵母中的表达、纯化及结晶

采用定位突变和重叠延伸PCR方法扩增尿激酶催化结构域基因片段,将其克隆至表达栽体pPICZαA上,转化毕氏酵母X-33.重组蛋白通过阳离子琼脂糖柱纯化、凝胶层析柱检测,纯度达到99%以上,该重组的尿激酶催化结构域(C279A/N302Q/S356A)不具有丝氨酸蛋白酶活性.用气相扩散法获得蛋白晶体,其衍射分辨率迭1.77(A),结构解析发现在其复合物结构中有三个抑制剂分子苯甲醚.     

流动电位法对甘氨酸水溶液结晶过程的表征

以流动电位法研究甘氨酸饱和水溶液降温结晶过程。考察了溶液酸度和起始温度对结晶过程中流动电位υ-结晶器温度t曲线的影响。结果表明,甘氨酸饱和溶液在较高起始温度30和35℃下成核能力较差,在较低起始温度20和25℃下成核能力较强。随着甘氨酸饱和溶液酸度的变化,相同起始温度的υ-t曲线表明成核能力有较大差异。溶液酸度为pH=7.0、pH=5.0、pH=4.0的条件下成核作用明显,但低温下成核具有较大的偶然性。等电点附近(pH=6.0)成核能力较差,容易析出不定型固体。运用生长基元理论进行了分析。     

谷氨酸提取产业现状与无废化发展方向

谷氨酸提取的工艺路线及其技术对味精生产成本、质量和环境等因素的影响最为重要：现有“等电离交”工艺技术收率高,但存在辅料消耗大、废水多等缺陷;“浓缩等电转晶工艺”辅料消耗低、廒水少且质量好,但存在谷氨酸收率低的缺点;“喷浆造粒工艺”消除了高浓废水的污染,但又造成严重的废气污染,环境问题随着味精制造规模的扩大而呈加重趋势“谷氨酸提取无废低耗工艺”在清洁生产思想指导下,吸收现有技术的优点,整体谋求经济、环境和质量的集成,通过开发关键技术,形成成本低、质量好、无污染且易于工程放大的谷氨酸提取新型工艺路线。     

可溶性尿激酶受体的表达、纯化和结晶

克隆尿激酶受体可溶区域(suPAR)到果蝇胚胎细胞分泌表达载体pMT/Bip/v5-his,重组质粒与pCoHygro共转染果蝇S2细胞,筛选多拷贝稳定表达细胞系suPARS2.suPAR表达蛋白经尿激酶N端片段亲和柱、ResourceQ阴离子交换柱两步纯化后,得到高纯度的、稳定的suPAR单体.纯化后的蛋白质,与其抗体ATN615及尿激酶N端片段结构域等摩尔混合,浓缩至10g/L,以透析法进行该三元复合物晶体生长,获得衍射分辨率为1.9#的蛋白质晶体.     

来自于变性链球菌的脱氧胞嘧啶核苷酸脱氨酶的表达，纯化，结晶以及初步晶体学研究

脱氧胞嘧啶核苷酸脱氨酶属于脱氧胞苷酸脱氨家族.对来自于变性链球菌UA159的脱氧胞嘧啶核苷酸脱氨酶进行了克隆,在大肠杆菌中进行了表达,最后纯化.快速液相分子排阻色谱分析表明这种酶在溶液中形成六聚体.利用悬滴气相扩散技术获得了这个蛋白的晶体.在北京同步辐射的3W1A线站,收集了衍射分辨率到达3.1!的数据.这个晶体属于P213空间群,其晶胞参数为a=b=c=113.2",!="=#=90°.计算可得马修斯系数为3.6#3·Da-1,据此可估计在一个不对称单位中含有两个单亚基.据目前所知,这是第一个关于野生型的脱氧胞嘧啶核苷酸脱氨酶的结晶学报道.