鼠源Filia N端蛋白在GSH条件中的一种全新三维结构

母性效应因子复合体SCMC(subcorticalmaternalcomplex)中的Filia蛋白,其N端具有Ⅰ型KH结构域的特征,通过结合RNA参与卵子发生及胚胎发育过程中的RNA转录调控.此外,Filia蛋白对染色体整倍体化的维持起重要作用.缺乏Filia的雌鼠体内早期胚胎发育进程延迟,致使雌鼠生殖力降低,但不会不育.在卵母细胞成熟过程中,还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)浓度发生变化以维持胞内的氧化还原环境.本文成功解析了在含有GSH的条件中生长的Filia(N1-124)蛋白晶体结构.与在不含GSH的条件中生长的Filia(N1-124)蛋白晶体相比,在含有GSH的条件中,Filia(N1-124)蛋白晶体的一个不对称单位中含有5对二聚体,Filia(N1-124)单体分子在α3螺旋区与邻近分子发生了结构域交换.Filia(N1-124)晶体内凭借链间的离子键、氢键和疏水相互作用,形成了独特的十聚体组装方式.本文为进一步研究在不同生理条件下Filia的结构与功能的关系提供了结构依据.     

苏云金芽孢杆菌Bt9875晶体蛋白诱导HL-60细胞凋亡

[目的]研究苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)Bt9875菌株晶体蛋白对人急性髓细胞性白血病细胞HL-60的影响.[方法]采用MTT比色、荧光显微观察、DNA凝胶电泳、流式细胞术等方法来检测不同浓度的Bt9875晶体蛋白处理后HL-60细胞的凋亡特征.[结果]Bt9875晶体蛋白对HL-60细胞的生长具有明显的抑制作用,且随着蛋白质浓度的增加对HL-60细胞生长抑制愈加明显,而对正常人外周血单个核细胞(PBMC)无作用;荧光显微镜下观察发现经该蛋白作用后HL-60细胞核的形态呈现凋亡特征;流式细胞术分析表明,HL-60细胞经100 μg/mL晶体蛋白作用后,凋亡率达到52%;琼脂糖凝胶电泳显示细胞DNA呈梯状降解.[结论]初步证明了Bt9875晶体蛋白在体外能够明显抑制HL-60细胞的增长,并诱导其凋亡,这为苏云金芽抱杆菌晶体蛋白的应用开创了新的思路.     

晶胞接种法在肌动蛋白和木聚糖酶结晶中的应用

晶胞接种法（seeding technique）包括微晶胞接种法（micro-seeding technique）和大晶胞接种法（macro-seeding technique）.微晶胞接种法主要用于改善晶体的衍射质量.大晶胞接种法主要用于得到大体积晶体以提高衍射分辨率,尤其是晶体的中子衍射分辨率. 本文采用连续多次微晶胞接种法极大地改进了肌动蛋白（actin）晶体的衍射质量,获得的单晶X-光衍射分辨率达到1.9 Å. 本文丰富了大晶胞接种法的内容,以此技术获得了体积达到2立方毫米的木聚糖酶(xylanase)巨大单晶, 其中子衍射分辨率达到了2.0 Å ,从而为它的第一个中子衍射晶体结构的解析奠定了坚实的基础.     

压电免疫传感器的研究进展

生物传感器是近年来发展起来的一种新技术,能实时检测到传感器表面的抗原抗体反应,它可促使免疫诊断方法向定量化、操作自动化方向发展,成为生物医学领域的研究热点之一.本文简要介绍了生物传感器的基本概念与压电晶体免疫传感器的基本原理、设计与构造,并对常见的压电石英晶体免疫传感器生物敏感膜的制备方法进行了综述.     

广西眼镜蛇毒磷脂酶A2初步晶体学分析

广西眼镜蛇毒酸性磷脂酶A2具有抗凝血活性和溶血活性。采用悬滴气相扩散法,培养出该酶四方和立方两种晶型的单晶,并进行了X射线衍射鉴定。四方晶型的空间群为P43212或P41212,晶胞参数为α=b=8.797nm,c=10.831nm。每不对称单位中含3个分子;立方晶型的空间群为P213,晶胞参数为a=b=c=6.840nm,其不对称单位含1个分子,对两种晶型分别收集了0.28nm分辨率衍射数据。对不同地域眼镜蛇毒磷脂酶A2的晶体特性进行了比较。     

基于表面质子化聚多巴胺修饰电极用于拟南芥原生质体的黏附与测定

采用自氧化方法将多巴胺(DA)聚合修饰到光透ITO(或金)电极表面上,通过缓冲溶液(pH 3)处理后形成带正电、可与带负电荷原生质体静电相互作用的表面膜。经循环伏安、电化学阻抗方法证明修饰薄膜对拟南芥原生质体黏附的有效性,在一定原生质体数目范围(1000~30 000),质子化聚多巴胺膜界面电荷转移电阻(R_(ct))随原生质体数目(N_(cells))增加而增加,1/R_(ct)与1/N_(cells)呈线性关系。此外,石英晶体微天平动态测试结果亦证明,本方法制备的修饰薄膜对原生质体具良好的黏附效果。本研究提供了一种用于原生质体固定与传感的有效方法,为在细胞层次研究植物结构、功能与行为及植物生命多样性提供参考。     

苏云金芽胞杆菌CTC菌株的S-层蛋白可以形成伴胞晶体

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)CTC菌株产生卵圆形伴胞晶体,晶体蛋白分子量为100kD;透射电子显微镜观察结果表明该菌株有S—层结构,而且在母细胞内可以形成伴胞晶体和S—层的初体结构;其蛋白基因导入苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB171后,扫描电子显微镜观察结果表明转化子能形成晶体,而其形状与CTC菌株的相同;转化子晶体蛋白的分子量大小也与CTC菌株的相同,为100kD。以上实验结果结合以前晶体蛋白N—末端测序和基因核苦酸序列,表明苏云金芽胞杆菌CTC菌株的S—层蛋白可以形成伴胞晶体。     

苏云金芽胞杆菌鲇泽亚种HD-133 cry1D和cry1Ab mRNA含量及稳定性研究

苏云金芽胞杆菌鲇泽亚种菌株HD－133含有代表性的三种cry1类基因cry1Ab,cry1C和cry1D,它们的表达量却明显不同。通过Northern杂交检测了菌株HD－133中基因cry1D和cry1Ab的mRNA含量及其稳定性。结果表明：基因cry1D mRNA的形成比基因cry1Ab的mRNA滞后3h,且基因cry1D形成mRNA的量很低,产生过程很平稳,在芽胞形成中期比cry1Ab mRNA低3．7倍;cry1Ab mRNA含量在芽胞形成前期高于后期,在后期仍能大量持续稳定地转录。cry1D mRNA的半衰期为18min,而cry1Ab mRNA的半衰期为14min。尽管cry1D mRNA比cry1Ab mRNA的半衰期更长,但cry1D和cry1Ab转录时间和转录量的差异是导致其表达量差异的重要原因。     

经高浓度味精废水驯化的B.t菌株伴胞晶体特性及其活性成分研究

对3株能在味精废水中生长的苏云金芽孢杆菌菌株T.4,G.1,S-2.5进行了废水茄子瓶培养基培养,应用液体双相法分离晶体,通过SDS－PAGE电泳确定了它们的分子量为120KD,104KD,67－68KD,43－45KD,选取菌珠G．1经分离后的晶体通过DEAE－纤维素离子交换层析和Sephadex G-100凝胶排阻层析分离到两上峰,分子量分别为120KD,68KD,致死中浓度LC50分别为0．609,＞25。     

用石英晶体DNA传感器检测单链DNA的探索

利用自组装法,将5′末端标记有巯基醇的单链DNA探针,固定在4.43MHzAT切石英晶体的镀金表面,制成石英晶体DNA传感器,并用该DAN传感器进行了互补单链DNA定量定性检测的探索。