特异切割番茄 1-氨基环丙烷羧酸合成酶mRNA的核酶基因序列的合成与克隆

根据番茄1-氨基环丙烷羧酸合成酶(ACC合成酶)基因cDNA序列, 按照锤头状核酶作用模式, 设计合成长度分别为40mer和48mer的一对引物,经体外退火、延伸、连接,插入质粒pGEM-3Zf(+)的KpnI和BamHI位点之间,经菌落原位杂交、双酶切、聚丙烯酰胺凝胶电泳和序列分析证明,人工合成了特异切割ACC合成酶mRNA第667-669位点GUC序列的核酶基因序列。 Abstract:In order to interrupting the ACC synthase activity in tomato,a hammerhead ribozyme targeting to cleave GUC triplet at the position 667~699 of ACC synthase mRNA was established and integrated into KpnI and BanHI site of vector pGEM-3Zf(+).Four positive clones were gotten by in situ hybridization.The recombinatant plasmids were digested with restriction endonuclease KpnI and BanHI.By polyacrylamide gels electrophoresis and sequence analysis,the size and the sequence of one of the digested product was the same as those of what we expected.These results showed that the ribozyme gene sequence has been obtained.     

艾氏剂环氧化酶及细胞色素P-450对小菜蛾抗药性发展的影响

本文对室内长期饲养的小菜蛾(Plutella xylostella L.)敏感品系和田间采集的抗性种群体内的艾氏剂环氧化酶及细胞色素P-450进行了比较研究。结果证明,艾氏剂环氧化酶在感性和抗性小菜蛾间存在着量及质的差异。 抗性种群的艾氏剂环氧化酶的Vmax和Km值分别为感性品系的5.4倍和6.5倍。抗性种群的细胞色素P-450的含量是感性品系的1.1-1.3倍。艾氏剂环氧化酶在量上及质上的差异及细胞色素P-450含量的提高是导致小菜蛾抗药性发生与发展的重要机制之一。而且质的差异较之量的差异可能起着更为重要的作用,     

植物组织内ACC含量测定的一些问题探讨

在许多植物组织中,乙烯生物合成的速率与组织中ACC含量密切相关,灵敏而准确地测定植物组织中ACC含量变化,对了解ACC含量对乙烯生成速率的影响十分必要。目前,测定ACC含量多数是应用LhaL和Yang［。j根据ACC可被Na0CI氧化产生乙烯的原理而提出的方法,此法的灵敏度和准确度取决于ACC转化为乙烯的效率,而ACC转化为乙烯的效率受植物样品内某些有机成分的影响,这些有机成分影响的大小与分析样品的前处理方法有密切关系。其前处理方法大致分为两类,一类是用5％横基水杨酸抽提样品中的ACC,再用阳离子交换树脂或离子交换纤维素…     

单股环DNA病毒基因组的复制及其转录调控因子结合序列

单股环ＤＮＡ病毒基因组的复制及其转录调控因子结合序列崔治中（扬州大学农学院兽医系,生物技术系,扬州２２５００１）关键词单股环ＤＮＡ病毒,基因组复制,调控区结构最近定名的单股环ＤＮＡ病毒科（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ）是迄今为止发现的一类最小的动物病毒。...     

梨形环棱螺凝集素的初步研究

通过Sepharose 4B-甲状腺球蛋白亲和层析,从梨形环棱螺Bellamya purificata体内分离到的一种凝集素,不连续PAGE显示其为单一的蛋白质谱带.它能凝集兔、猪、鸭等动物的红细胞,但不能凝集人的A、B、O及AB型血的红细胞和固定后的兔红细胞.其凝集活力可被1.0mol/L的乳糖、半乳糖和60g/L的甲状腺球蛋白抑制,但不能被碱性硼酸缓冲液抑制.对温度变化敏感,有较宽的最适pH范围.     

环介导等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测志贺氏菌

【目的】将环介导等温扩增技术(LAMP)与横向流动试纸条(LFD)联合应用,建立一种可应用于志贺氏菌快速检测的LAMP-LFD技术。【方法】以福氏志贺氏菌的侵袭性质粒抗原H(ipa H)基因为检测靶标设计3对特异性引物(其中上游内引物Sfl-ipa H-FIP由生物素标记),进行LAMP反应;同时设计1条异硫氰酸荧光素(FITC)标记的探针Sfl-ipa H-HP,与获得的LAMP产物进行特异性杂交,杂交产物经LFD完成检测。【结果】优化后的LAMP反应条件为63°C 40 min,加上LFD结果判读共需50 min。LAMP-LFD方法能够特异性检测出福氏志贺氏菌,而对肠炎沙门氏菌等其它4种导致腹泻的致病菌和创伤弧菌等5种常见食物源性致病菌,以及4株不同大肠杆菌的检测结果呈阴性。该方法针对福氏志贺氏菌的检测灵敏度为1.0×10~2 CFU/m L或4 CFU/反应,针对人工污染鲤鱼肠组织的检测灵敏度是5.0×10~2 CFU/m L,是以LAMP外引物Sfl-ipa H-F3/Sfl-ipa H-B3的常规PCR方法的100倍。【结论】建立的LAMP-LFD技术具有操作简单、检测快速准确、检测成本低等优点,有望在志贺氏菌的常规监测和即时检测中被普及使用。     

正常和环割条件下不同形态氮素添加对红椎幼苗光合特性的影响

采用盆栽试验和韧皮部环割方法研究了碳水化合物供应、氮素形态及其交互作用对红椎幼苗叶片光合特性的影响。无机氮源采用硝酸铵(AN)、铵态氮(NH_4~+-N)、硝态氮(NO_3~--N),有机氮源采用尿素(Urea)、精氨酸(Arg)和甘氨酸(Gly),氮素施用量均为10g N/m~2,处理时间为10 d。研究结果表明,环割、氮素形态及其交互作用均显著影响了红椎幼苗叶片的净光合速率(Pn);单一环割处理显著降低了红椎幼苗叶片Pn、气孔导度(Gs)、胞间CO_2浓度(Ci)、蒸腾速率(Tr)、相对叶绿素含量和CO2利用效率(CUE),但显著提高了叶片水分利用效率(WUE)和气孔限制值(Ls),其叶片Pn降低主要是由气孔限制和叶绿素含量降低所导致的。正常条件下,所有氮素形态处理均显著降低了红椎幼苗叶片的Pn、Gs、Ci和Tr,但显著升高了叶片Ls和WUE,其叶片Pn降低的主要原因是供氮过高引起的叶片气孔限制。正常条件下,除Arg处理外,其他氮素形态均显著升高了红椎幼苗叶片的CUE,其中以Gly处理的促进作用最大。环割条件下,3种有机态氮素的添加均显著缓解了单一环割处理对红椎幼苗叶片Pn的抑制作用,尤其以精氨酸最为明显,供应精氨酸的叶片Pn值从单一环割处理的强烈抑制中恢复到了对照水平,而无机态氮的供应均未显著改变这种抑制。结果表明短期碳水化合物供应的阻断会显著抑制红椎幼苗叶片的光合能力,适量供应精氨酸、甘氨酸和尿素等有机态氮会有效缓解这种抑制作用,其中以精氨酸的作用最为明显。     

METTL3对猪干细胞多能基因表达的调控作用

m~6A是真核生物m RNA中重要的转录后修饰,METTL3作为m~6A甲基转移酶复合物中的重要组分,在细胞重编程、胚胎干细胞和诱导多能干细胞的干性维持、胚胎发育等过程中发挥重要作用。为了揭示猪METTL3的表达模式,对不同物种METTL3蛋白序列进行了比对,用RT-PCR检测了METTL3基因在不同猪组织和细胞中的表达情况,并确认了METTL3的细胞核定位。为了研究METTL3对猪干细胞多能基因表达的调控作用,克隆了猪METTL3编码区序列,设计了METTL3干扰片段,并构建了相应的过表达和沉默载体。发现干扰METTL3的表达后,猪多能干细胞出现类似na?ve状态的细胞克隆,NANOG、OCT4和LIN28A表达水平显著升高。在猪多能干细胞培养基中添加m~6A甲基化抑制剂环亮氨酸培养细胞48 h后,试验结果与干扰METTL3表达的结果一致。本研究为优化猪多能干细胞的培养体系提供了新的方向和依据。     

替加环素不敏感鲍曼不动杆菌的分子流行病学及耐药机制

为探讨替加环素不敏感鲍曼不动杆菌Acinetobacter baumannii的耐药机制,为院内感染控制及临床合理用药提供理论依据,采用琼脂稀释法和微量肉汤稀释法检测全国多中心12个城市20家医院临床分离的94株非重复的替加环素不敏感鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC),应用多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)技术进行分子流行病学研究,应用eBURST软件对MLST结果进行分析;用PCR和测序技术分析常见耐药基因(bla_(OXA-40-like)、bla_(OXA-58-like)、bla_(OXA-23-like)、bla_(OXA-51-like)、bla_(NDM-1)),与替加环素耐药相关的外排泵调控基因adeR和adeS的突变位点、trm的突变位点。经检测94株鲍曼不动杆菌除对多粘菌素B 100%敏感、对米诺环素敏感率25.5%外,其他抗菌药物的敏感率均低于3.5%,亚胺培南和美罗培南敏感率均只有1.1%。MLST分型得到12种ST分型,以ST195(45株,47.9%)、ST208(19株,20.2%)和ST457(10株,10.6%)为主,eBURST分析发现其中8个ST型均属于克隆复合体92(Clonal Complex 92,CC92);99%菌株bla_(OXA-23-like)型碳青霉烯酶基因阳性;均未扩增出bla_(NDM-1)基因;外排泵调控基因adeR和adeS的检出率分别是73.4%和91.5%,Asp26Asn和Ala97Glu分别为adeR和adeS的高频突变位点;在12株鲍曼不动杆菌中检测到了adeS基因的ISAba1,以北部地区为主;trm基因均在第240位核苷酸发生缺失突变。综上所述,替加环素不敏感鲍曼不动杆菌对除多粘菌素B外的大多数抗菌药物具有很高的耐药性,AdeABC外排泵上游的双组分调控系统adeR和adeS的缺失和突变,trm缺失突变是导致鲍曼不动杆菌对替加环素敏感性降低的主要原因。