Nampt及高糖高胰岛素微环境对人顺铂耐药肺癌细胞株增殖和转移的影响

摘要 目的：探究烟酰胺磷酸核糖转移酶（Nampt）及高糖高胰岛素（HG+HI）微环境对人顺铂耐药肺癌细胞增殖和转移的影响。方法：将人顺铂耐药细胞株A549/DDP分为6组（n=6）：对照组（control）、高糖高胰岛素干预组（HH，使用添加30 mmol/L的葡萄糖和500 mU/L的胰岛素的培养基培养72 h）、分别转染sh-NC和sh-Nampt组（sh-NC和sh-Nampt，使用Lipofectamine 2000将sh-NC和sh-Nampt分别转染到细胞中，转染时间为48 h）、HH干预sh-NC和sh-Nampt组（HH+sh-NC和HH+sh-Nampt）。每组6个重复样本。qRT-PCR检测转染效率，MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡，Transwell检测细胞迁移和侵袭，qRT-PCR检测Nampt mRNA，Western blot检测Nampt、Bcl-2、Bax、MMP-2、MMP-9、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白表达。结果：与对照组和sh-NC组比较，sh-Nampt组的Nampt mRNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量降低，而细胞凋亡率升高，Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Nampt、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低，Bax蛋白表达水平升高（P<0.005）。与对照组和sh-NC组比较，HH组和HH+sh-NC组的Nampt mRNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量升高，Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Nampt、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平升高，Bax蛋白表达水平降低（P<0.005）。与HH组和HH+sh-NC组比较，HH+sh-Nampt组的Nampt mRNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量降低，细胞凋亡率升高，Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Nampt、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低，Bax蛋白表达水平升高（P<0.005）。结论：高糖高胰岛素微环境可能通过上调Nampt/PI3K/AKT信号通路诱导人顺铂耐药肺癌细胞的增殖和转移。     

体外研究UGT2B7基因SNP rs28365062对霉酚酸酯代谢的影响

目的:体外研究尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT2B7)基因SNP rs28365062对霉酚酸酯(MMF)代谢的影响,明确该位点变异是否与MMF副作用具有潜在关系。方法:采用基因重组、定点突变技术构建UGT2B7基因SNP rs28365062不同等位基因过表达载体,POLO3000转染法将重组过表达载体转染HEK293细胞,采用液相色谱-质谱联用仪(LC/MS/MS)系统检测霉酚酸(MPA)代谢产物--酰基化葡萄糖醛酸化物(Ac MPAG)24小时的生成量来评估转染不同等位基因细胞的酶活性。结果:成功构建过表达载体p IRES2-EGFP-prom(A)和p IRES2-EGFP-prom(G)并转染至HEK293细胞。LC/MS/MS系统检测结果显示携带G等位基因的突变型UGT2B7代谢MMF产生Ac MPAG的能力降低,产物Ac MPAG 24小时的生成量仅为野生型的18.60%(P0.001)。结论:UGT2B7基因SNP rs28365062可显著影响MMF代谢产物Ac MPAG的生成,可能是导致病人对MMF产生不同程度副作用的因素之一。     

一株人参内生1-氨基环丙烷-1-1羧酸(ACC)脱氨酶活性细菌的筛选、鉴定及其对宿主生长的影响

【目的】从人参内生细菌中获得具有1-氨基环丙烷1-羧酸(ACC)脱氨酶活性的菌株,并进行促生效果的验证。【方法】结合初筛和复筛的方法筛选具有ACC脱氨酶活性的人参内生菌株;采用Ashby培养基和固氮酶基因验证其固氮潜能;菌碟法及钼锑抗比色法测定其解磷能力;CAS方法检测产生铁载体能力;通过室内及田间试验测定菌株对人参生长的促进作用。通过形态学、生理生化测定及16S rRNA序列分析明确菌株的分类地位。【结果】从120株人参内生菌中获得了一株具有较高ACC脱氨酶活性的菌株JJ8-3,其酶活性为α-酮丁酸6.7μmol/(mg·h);且具有解磷特性、固氮潜能和产生铁载体能力;能明显促进人参种子及根部的生长;经鉴定菌株JJ8-3为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)。【结论】获得了一株具有ACC脱氨酶活性的人参内生细菌,将为其在促进植物生长中的应用和研究奠定基础。     

共表达SHMT和TPase载体的构建及双酶法合成L-色氨酸

利用重组大肠杆菌表达丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT)和色氨酸酶(TPase),并利用双酶法合成L-色氨酸。采用PCR从大肠杆菌K12基因组中扩增上述两种酶的基因,利用pET-28a载体,构建单表达重组质粒pET-SHMT、pET-TPase和共表达重组质粒pET-ST。将上述3种重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)进行表达。SDS-PAGE结果表明,单表达基因工程菌BL21(DE3)/pET-SHMT和BL21(DE3)/pET-TPase分别在47kDa(SHMT)和50kDa(TPase)处有蛋白表达带;共表达基因工程菌BL21(DE3)/pET-ST在上述两处均有蛋白表达带。与宿主菌相比,单表达SHMT基因工程菌产酶活性提高了6.4倍;单表达TPase基因工程菌产酶活性提高了8.4倍;共表达SHMT和TPase基因工程菌产酶活性分别提高了6.1和6.9倍。利用工程菌所产酶进行双菌双酶法和单菌双酶法合成L-色氨酸。两菌双酶合成L-色氨酸的累积量达到41.5g/L,甘氨酸转化率为83.3%,吲哚转化率为92.5%;单菌双酶合成L-色氨酸的累积量达到28.9g/L,甘氨酸转化率为82.7%,吲哚转化率为82.9%。     

细菌多糖的生物合成机制

近些年来,细菌多糖因其重要的医学价值和工业用途引起了人们的广泛关注。随着细菌基因组的不断测序,众多与细菌多糖合成相关的基因簇被发现。不同多糖合成基因簇的比对分析结果表明,尽管自然界中多糖的结构复杂多变,但是它们的合成机制却是相对单一的。本文就当前国际国内不同细菌多糖的合成机制,以及多糖合成途径中相关糖基转移酶和聚合酶的研究进展进行了论述。     

绝经后女性血清瘦素、骨密度及血骨特异性碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原交联氨基末端肽的测定及意义

目的:测定绝经后女性血清瘦素(leptin)与骨密度及及血清骨特异性碱性磷酸酶(BAP)和Ⅰ型胶原交联氨基末端肽(NTx)并探讨其关系。方法:用酶联免疫吸附试验测定287名40-80岁健康绝经后女性血清leptin以及血清骨特异性碱性磷酸酶(BAP)和Ⅰ型胶原交联氨基末端肽(NTx);用双能X线骨密度扫描仪测定总体、腰椎正位、总髋部骨密度以及体脂、瘦体重;分析它们之间的关系。结果:Leptin与髋部总体BMD呈正相关(r=0.162,P<0.05),校正年龄和体脂后,Leptin与髋部总体BMD相关性消失,Leptin与BAP相关无统计学意义;与NTX呈负相关(r=-0.119,P<0.05),校正年龄和体脂后,相关无统计学意义。BAP与总体骨密度、腰椎骨密度、髋部总体骨密度均呈负相关(r=-0.210,r=-0.236,r=-0.223,P<0.05),校正年龄和体质指数后,相关性都依然存在(r=-0.168,r=-0.187,r=-0.169,P<0.05)。NTx与总体骨密度、腰椎骨密度、髋部总体骨密度均呈负相关(r=-0.238,r=-0.232,r=-0.239,P<0.05),校正年龄和体质指数后...     

用于丙型肝炎病毒抗原测定的SiO_2载体的制备及其性质分析

为了优化将抗体偶联在二氧化硅试管表面上以便进行丙型肝炎抗原检测的分析系统,本研究通过氨基硅烷的活化作用,在玻璃表面形成活化的氨基,以戊二醛作为化学交联试剂,在已硅化的玻璃表面固定丙肝单克隆抗体,并进行丙肝抗原(HCAg)的测定。结果显示,通过条件优化实验,发现以10%(V/V)的氨基硅烷水溶液处理玻璃试管3h后,再用3%(V/V)的戊二醛水溶液交联丙肝单克隆抗体2h,可以得到固定效果较好,非特异性较低的玻璃载体,对HCAg可测至1μg/L。可见,用该方法制备的玻璃载体可为进一步建立新的HCAg磁性免疫检测系统提供理论和实验依据。     

大豆酪氨酸氨基转移酶基因的克隆与表达分析

采用电子克隆与实验克隆相结合的方法获得了大豆酪氨酸氨基转移酶基因的cDNA序列,GenBank登录号为DQ003328.序列分析结果表明,该cDNA序列含有一个编码425个氨基酸的完整的开放读码框,5′非翻译区具有多个同框终止密码子,3′端具有3个加尾信号和polyA尾巴.启动子区除含有通用核心元件外,还含有许多与光反应有关的作用元件.氨基酸序列比对和系统发育分析结果显示,不同物种之间酪氨酸氨基转移酶的氨基酸序列同源性较高.电子表达分析和RT-PCR组织表达分析结果表明,该基因的表达量与组织中叶绿体含量具有很高的关联,强光逆境能够上调该基因的表达.     

自拟益气通阳活血方治疗阿尔茨海默病的临床研究

摘要 目的：分析自拟益气通阳活血方治疗阿尔茨海默病的临床效果。方法：选取2020年10月~2022年4月于中国人民解放军空军军医大学第一附属医院接受治疗的阿尔茨海默病患者104例，依据入院先后顺序编号，按单双号分为对照组（n=52）和研究组（n=52）。对照组进行常规西药治疗，研究组在此基础上进行自拟益气通阳活血方治疗。比较两组临床疗效、治疗前后中医证候积分、日常生活活动能力、认知功能、血清去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）、乙酰胆碱转移酶（ChAT）水平、β淀粉样蛋白前体（APP）、β淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）、丙二醛（MDA)、超氧化物歧化酶（SOD）水平，并比较两组安全性。结果：治疗后，两组中医证候积分均降低，且研究组显著低于对照组（P<0.05）；研究组总有效率为94.23%，明显高于对照组的78.85%（P<0.05）；治疗后，两组简易智能精神状态检查量表（MMSE）评分与蒙特利尔认知评估量表（MoCA）评分研究组均高于对照组（P<0.05）；治疗后，两组barthel指数评分及日常生活能力量表（ADL）评分研究组均显著高于对照组（P<0.05）；治疗后，两组DA、NE、ChAT水平均升高，且研究组明显高于对照组（P<0.05）；治疗后，两组SOD水平升高，APP、Aβ1-42、MDA水平均降低（P<0.05），且与对照组相比研究组各指标变化更显著（P<0.05）；两组治疗期间的不良反应均较轻微，经对症处理后均缓解，不良反应发生率比较无明显差异（P>0.05）。结论：自拟益气通阳活血方治疗阿尔茨海默病疗效显著，可降低中医证候积分，提高认知功能，调节NE、DA、ChAT水平，抑制APP、Aβ1-42水平，提高其日常生活活动能力，且安全性高。     

HDACs, histone deacetylation and gene transcription： from molecular biology to cancer therapeutics

Histone deacetylases （HDACs） and histone acetyl transferases （HATs） are two counteracting enzyme families whose enzymatic activity controls the acetylation state of protein lysine residues, notably those contained in the N-terminal extensions of the core histones. Acetylation of histones affects gene expression through its influence on chromatin conformation. In addition, several non-histone proteins are regulated in their stability or biological function by the acetylation state of specific lysine residues. HDACs intervene in a multitude of biological processes and are part of a multiprotein family in which each member has its specialized functions. In addition, HDAC activity is tightly controlled through targeted recruitment, protein-protein interactions and post-translational modifications. Control of cell cycle progression, cell survival and differentiation are among the most important roles of these enzymes. Since these processes are affected by malignant transformation, HDAC inhibitors were developed as antineoplastic drugs and are showing encouraging efficacy in cancer patients.