乳酸乳酸球菌基因表达调控研究进展

乳酸乳酸球菌基因表达调控研究进展还连栋（中国科学院微生物研究所,北京１０００８０）乳酸球菌属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）包括５个种,其中乳酸乳酸球菌（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓ）是最典型的一个种。乳酸乳酸球菌以前被称之为乳酸菌或Ｎ群链球菌（Ｓｔ...     

酵母PH081在酸性磷酸酯酶基因表达调控中的作用

利用酵母ＰＨＯ８１与大肠杆菌产β－半乳糖苷酶的融合基因,系统地研究了ＰＨＯ８１基因在酵母酸性磷酸醋酶的不同调控因子的单缺失株和双缺失株中的表达规律,它与酸性磷酸酯酶基因ＰＨＯ５和ＰＨＯ１１的控制机制相似。构建了ＡＤＨ１启动子控制下ＰＨＯ８１表达质粒。在ＰＨＯ８１在细胞内组成型表达时,酸性磷酸酯酶基因的表达仍受无机磷的控制,揭示ＰＨＯ８１蛋白可能在不同浓度无机磷条件发生变构。ＰＨＯ８１在酸性磷酸酯酶基因表达系统中是一个中介因子。在此基础提出了一个酸性磷酸酯酶基因调控的分子模型。     

重组人GM—CSF基因在昆虫细胞中的表达

利用苜蓿夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）带β－Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ基因标记的非融合蛋白基因转移载体ｐＢｌｕｅＢａｃ将人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ｈＧＭ－ＣＳＦ）基因成功地插入病毒ＡｃＮＰＶ的基因组中．ｈＧＭ－ＣＳＦ基因在感染重组病毒的草地夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）培养细胞Ｓｆ９中得到表达,感染后的Ｓｆ９细胞培养液能刺激人骨髓细胞在体外形成典型的集落,表达水平可达２．７×１０５５ＣＦＵ／ｍｌ。以ｈＧＭ－ＣＳＦ单抗所作的ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ表明,表达的ｈＧＭ－ＣＳＦ对是３种糖基化程度不同的产物,分子量分别约为１５ｋｄ,１８ｋｄ和２０ｋｄ。     

丙型肝炎病毒基因组的翻译及其产物的加工

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是一种单正链ＲＮＡ病毒,其５’非编码区（５’ＮＣＲ）是决定病毒蛋白表达的关键区。基因突变与报道基因表达技术研究表明５’ＮＣＲ有一内部核糖体进入位点（ＩＲＥＳ）。类似于微小ＲＮＡ病毒属。ＨＣＶＲＮＡ翻译成为一条多蛋白分子,对蛋白酶的裂解加工后形成１０余种结构和非结构蛋白。研究ＨＣＶＲＮＡ的翻译及产物加工,对ＨＣＶ及其抗原表达载体有重要意义。     

Ribozyme阻断体内基因表达的研究

利用ｒｉｌｏｚｙｍｅ专一水解ＲＮＡ的特性,设计ｒｉｂｏｚｙｍｅ定点切割基因表达的中间物ｍＲＮＡ以及病毒ＲＮＡ,可以阻断基因表达和抑制病毒复制,从而达到治病和防病的目的。自１９９０年以来,利用ｒｉｂｏｚｙｍｅ技术,已经对爱滋病、肿瘤等疾病进行了大量的研究。本着重介绍ｒｉｂｏｚｙｍｅ体内阻断基因表达的应用和一些规律性问题。     

大鼠酷氨酸羟化酶基因在肌母细胞中稳定表达

用电穿孔法将大鼠酷氨酸羟化酶（Ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ,ＴＨ）基因转染大鼠Ｌ６ＴＧ成肌细胞株,经ＰＣＲ检测、免疫组织化学和荧光组织化学检测证明,ＴＨ基因能在细胞内稳定整合和表达,并在辅因子存在时将酷氨酸转化为多巴,移植于大鼠纹状体后可成活并表达ＴＨ。     

GSTs同工酶基因在乳腺癌中的扩增与基因的表达

采用ＤＮＡ和ＲＮＡ的斑点杂交分析方法,对３２例乳腺癌和相应的癌旁正常组织中ＧＳＴ－π,ＧＳＴ－α和ＧＳＴ－μ基因的ＤＮＡ扩增和ＲＮＡ转录表达情况进行研究,发现ＧＳＴ－π在乳腺癌中存在基因扩增和明显的ｍＲＮＡ表达升高,ＧＳＴ－π基因表达调控主要在转录水平进行了;ＧＳＴ－α和ＧＳＴ－μ在乳腺癌中表达水平较低,但仍可见α和μ类ＧＳＴ同工酶ｍＲＮＡ转录在肿瘤和正常组织中发生了较大的变化。结合乳腺癌中雌激素     

A组轮状病毒SA11VP6基因的克隆和表达

从ＳＡ１１ＶＰ６基因全序列克隆开始,设计一对两端带有酶切位点的引物,逆转录ＰＣＲ扩增出ＶＰ６全基因ＣＤＮＡ。经酶切后插入ＰＵＣ１９,构建了ＶＰ６全基因克隆ＰＲＡ６。再经酶切后插入痘苗病毒载休质凿ＰＪＳＡ１１７５中。利用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ导入ＴＫ１４３细胞,利用ＴＫ基因和Ｌａｃ基因作为重组病毒的筛选标记。表达产物用单克隆抗体ＥＬＩＳＡ法检测,发现细胞培养上清和细胞裂解液都是阳性。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂ     

丙型肝炎病毒基因组部份NS5区蛋白基因在大肠杆菌中的表达

在大肠杆菌中表达了丙型肝炎病毒基因组ＮＳ５区Ａ段和部份Ｂ段蛋白。ＮＳ５Ａ蛋白溶于水,可经过ＧＳＴ亲和层析柱纯化;ＮＳ５Ｂ蛋白不溶于水,经ＰＢＳ－Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００洗涤,尿素溶解后,通过离子交换柱纯化。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ分析,ＮＳ５Ａ蛋白除在５７ｋＤ左右有条带外,还有不同程度的降解产物;ＮＳ５Ｂ蛋白主要在５８ｋＤ左右有条带出现。为查明表达蛋白抗体在病人血清中的分布,取９