互补引物/模板评价毕加酵母表达的丙型肝炎病毒RNA依赖的RNA聚合酶

构建含有感染性克隆HCV非结构基因5b区序列的酵母表达质粒,转化毕加酵母,获得持续、可溶性HCV RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)的表达,纯化蛋白在SDS-PAGE及Western blot中显示出特异性的64.2kD HCV RdRp蛋白带,同聚引物/模板测定显示RdRp的活性极低,延长反应时间,RNA聚合活性仅轻度升高.采用合成的杂聚互补引物/模板,未发现核苷酸在毕加酵母表达的RdRp作用下掺入模板,随时间延长,杂聚互补引物/模板降解.     

应用ABI PRISMTM310测序仪进行快速且经济的DNA测序

目的 使DNA测序更快速且经济。方法 根据测序模板的不同采取相应的测序方法。视具体情况调整测序反应条件,改进仪器的操作方法,减少测序反应体系及合理使用试剂,结果 对测序模板,测序条件和仪器操作的优化,可缩短测序时间,充分利用试剂,可降低测序成本。结论 在保证测序质量的前提下,不仅快速而且经济。     

非洲菊基因组DNA提取及ISSR-PCR扩增模板浓度优化

以改良的CTAB法为基础,对非洲菊基因组DNA提取进行了下述优化：在第二次用氯仿,异戊醇抽提时,加入“PCN”溶液(0.0675g PVP,45μl 10％ CTAB 4％NaCl),可明显去除多糖;在材料研磨时加入化学物质M(0.1000g Na2SO3,0.0500g Vc)及N(0.0200gVE,0.1000gNa2B4O7,0.0200gPVP,200μlB-巯基乙醇),都可去除酚类物质,明显提高DNA及ISSR-PCR扩增的质量,但N的效果稍优于M;同时加入M、N及“PCN”,具有明显的优化效果,所提5个样品DNA,平均A260/A280、A260/A230分别为1.81、2.02,浓度为0.649μg/μl,片段大小约为49kb,ISSR扩增带多且清晰、明亮、稳定性及多态性高,表明DNA纯度很高。对扩增反应的最佳模板浓度进行研究表明,所提DNA模板必须稀释30倍(浓度为15～30μg/μl时),才能扩增出清晰的谱带。     

一种基于预测搜索的基因芯片优化方法

掩模板在高密度基因芯片的探针合成过程中起着重要的作用 ,由于其制造工艺复杂、造价较高 ,因此在不改变探针合成结果的条件下 ,需要尽可能的减少基因芯片探针合成过程中所用的掩模板数量。提出了一种新的预测搜索算法 ,对掩模板进行了优化设计 ,对设计结果的测试显示 ,其减少的掩模板数量超过了传统方法的 2 0 % ,表明了该算法的有效性     

从马钱子中选择分离马钱子碱新方法的研究

本文采用分子模板聚合物技术对中草药马钱子(Strychnos nux-uomica L.)粗提物中有效成分马钱子碱(brucine)、士的宁(strychnine)进行了选择性分离。用丙烯酸为单体,TMPTA为交联剂,合成对马钱子碱有特异选择性的模板聚合物(MIP)。选择性分离出粗提物中的马钱子碱,纯度可达99．7％,同时得到士的宁为主的生物碱,纯度为94．6％。     

两栖动物酒精标本DNA模板的快速提取

本文以中国角蟾属4个种的蝌蚪酒精固定标本为材料,取尾部肌肉组织0．1g,滤纸吸干组织块表面的酒精,在研钵中用剪刀剪碎,液氮研磨成粉(必要时可加少量石英砂),转入1．5ml离心管,加入1．0ml提取缓冲液(0．5％SDS,10mmol/L Tris-HCl,100mmol/L EDTA,pH8.0),37℃温浴h,5000r/min离心10min,取上清转入另一1.5ml离心管,氯仿/异戊醇(24：1)抽提两次,上清液加2倍体积预冷(-20℃)的无水乙醇沉淀DNA,12000r/min离心3min,无菌条件下风干后,50μl TE溶解,4℃保存备用。以通用引物PCR扩增12S rRNA和16S rRNA基因部分片段并测序。本文不采用蛋白酶K提取酒精保存标本的DNA模板,全部流程只需3个小时,可同时提取数十个乃至数百个标本,并且所提取的DNA模板适合短片段PCR扩增。     

利用微波炉快速制备酵母质粒和基因组DNA PCR模板

制备基因组ＤＮＡＰＣＲ模板一般都比较费工费时 ,研究人员尝试用微波炉提取真核生物基因组ＤＮＡ ,然后做ＰＣＲ扩增取得了较好的效果[1 ,2 ] 。本文描述了一个利用微波炉快速制备酵母质粒和基因组ＤＮＡＰＣＲ模板的程序 ,具有良好的重复性。1　材料与方法1.1　材料酿酒酵母菌种 1ｃ163 6ｄａｒｇ11,ｕｒａ 3为比利时ＯｒｉａｎｅＳｏｅｔｅｎｓ馈赠。酵母载体ｐＹＸ13 3从美国康乃尔大学曹维国处获得 ,并由此构建了粗糙脉孢霉ａｒｇ 13ｃＤＮＡ的酵母表达载体ｐＹＸＡ5。培养基为ＳＤ或ＹＰＤ固体培养基。1.2　酵母质粒提取[3]取 1.5ｍｌ…     

粘虫核型多角体病毒919bp片段的PCR双链直接序列测定

本文发展了ＰＣＲ克隆和亚克隆技术制备ＤＮＡ测序模板。首先,我们用ｐＵＣ／Ｍ１３系列质粒的通用正反向引物ＰＣＲ扩增出质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＫＳＤＮＡ的多克隆位点及其侧翼序列,用ＥｃｏＲＶ和ＸｈｏＩ消化成为左右两个引物多克隆臂,与粘虫核型多角体病毒（ＬｓＮＰＶ）的ＥｃｏＲＶ和ＸｈｏＩ约４００ｂｐ和５００ｂｐ片段分别连接,经ＰＣＲ扩增,得到两端具有上述正反向引物结合位点的测序模板,用ｄｄＮＴＰ链终止法／ＰＣＲ扩增／银染色,从片段两端测定了全部９１９ｂｐ序列,这种ｄｄＮＴＰ／ＰＣＲ／银染测序法简化了操作,大大缩短了测序模板的制备时间,易于实现自动化操作。     

γ-线辐射对大鼠肝脾染色质及转录活性染色质模板活性的影响

 本文从染色质及转录活性染色质的模板效率探讨辐射对核转录活性影响的机制。实验结果表明:(1)肝脾染色质模板功能的变化分别平行与肝脾细胞核转录活性的变化提示,辐射至少部份是通过改变染色质的模板功能而影响细胞核的转录活性;(2)体外照射下,活性染色质模板活性较非活性染色质改变明显,提示射线可能主要是通过影响活性染色质区域的模板功能而改变核合成RNA的能力。     

PCR构建融合基因方法的建立

以聚合酶链式反应为基础的片段拼接技术——融合PCR技术是一种新的基因片段融合技术。以含有马铃薯块茎两种淀粉合成关键酶ssⅡ和ssⅢ基因为模板,利用融合PCR对其进行融合拼接,初步建立以PCR产物(不回收)及一步PCR法融合基因的构建方法,并对融合基因构建时PCR产物(不回收)的使用量及一步PCR法构建融合基因的中间引物浓度等条件进行优化。结果表明,以不回收的PCR产物为模板构建融合基因时PCR产物(不回收)的使用量在10-20 ng范围内为佳;一步PCR法构建融合基因的中间引物浓度在25-1 000 nmol/L为宜。