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51.
五种黄精属植物的蛋白水解酶谱研究 总被引:3,自引:0,他引:3
用蛋白水解酶复性电泳方法 (G- PAGE)分析了 5种黄精属植物根状茎和叶的蛋白水解酶的种类和活性。结果表明 :(1)它们的根状茎均含有 85k D和 55k D的蛋白水解酶 ;叶均含有 82 k D的蛋白水解酶 ;(2 )根状茎和叶的蛋白水解酶种类和活性有很大差异 ,叶的蛋白水解酶活性为根状茎的 10倍 ,它们的活性均受 p H影响 ,其最适 p H为 7;(3)每种植物都含有自己特有蛋白水解酶 ;(4 )蛋白水解酶在植物鉴定中有参考价值 相似文献
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53.
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Hofmeister效应反映了溶质小分子通过与水分子的相互作用, 对蛋白质等生物大分子造成的结构上的影响.通过对此效应的深入研究, 可以从理论上解释许多常见的生理生化现象.蛋白质的变性、复性问题是与Hofmeister效应密切相关的生化基础课题. 目前重组蛋白生产过程中包含体的变性和复性问题为上述理论研究提供了广泛的应用空间. 相似文献
55.
重组GM—CSF/IL—3融合蛋白的纯化 总被引:4,自引:0,他引:4
重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素3(GM-CSF/IL-3)融合蛋白是一种很有发展潜力与应用前景的重组药物,它在大肠杆菌中是以饱含体形式表达的,针对这一重组蛋白饱含体的洗涤、变性、复性以及最终的纯化过程,进行了深入地研究,重点分析和比较了不同条件及因素对于重组蛋白包含体变性及复性过程听影响。实验结果表明,8mol/L尿素及10mmol/L的DTT可以使包含体充分溶解。在复性过程中,采用 相似文献
56.
蛋白质的排阻色谱复性的新进展 总被引:3,自引:0,他引:3
外源蛋白在大肠杆菌中高效表达时 ,常常形成不溶的、无活性的包涵体 ,包涵体蛋白的复性是重组蛋白生产过程中的一个技术难题。排阻色谱 (sizeexclusionchromatography ,SEC)用于蛋白复性是一种较新的、适用于任何一种蛋白的方法 ,与常用的稀释复性法相比 ,它能在高的起始蛋白浓度下对蛋白进行复性 ,活性回收率较高 ,同时又能使目标蛋白得到一定程度的纯化。对使用SEC复性的进展进行了评述 ,其内容包括SEC复性的原理及其复性过程中的影响因素 ,并对其未来发展进行了展望。 相似文献
57.
58.
抗血红素多二硫键ScFv在大肠杆菌中绝大多数表达产物为包涵体,为了获得可溶性的具有生物活性的ScFv,摸索了不同的复性条件,包括透析法、稀释和层析相结合的方法。研究发现,先对溶解的变性ScFv溶液稀释,进行初步的蛋白质复性,再利用Sephadex G-25凝胶层析进一步复性、降低变性剂浓度和纯化,至少可以得到95%纯度,产率为150mg/L的目标蛋白,通过一次凝胶过滤层析,达到了去除变性剂、复性及纯化ScFv蛋白三种目的,为多二硫键ScFv在大肠杆菌中的表达和纯化提供了一种经济可行的方法。 相似文献
59.
甲胎蛋白的原核表达及复性优化 总被引:1,自引:0,他引:1
构建甲胎蛋白的原核表达载体p ET32a-AFP,对包涵体形式表达的甲胎蛋白进行复性优化。将构建的重组质粒p ET32a-AFP转化入E.coli,IPTG诱导表达后,经亲和层析纯化获得AFP包涵体,通过对复性过程、p H、添加剂等的研究摸索,获得最佳复性条件。当采用添加0.5 mol/L L-精氨酸的一步法透析复性方法,且透析液p H值为8.5,重组人AFP包涵体蛋白起始浓度为1.0 mg/m L时,复性效率最高。该复性方法获得蛋白质具有较高的回收率且操作简便。 相似文献
60.
以粘质沙雷氏菌PL-06基因组为模板扩增得到磷脂酶A1基因plaA和含有辅助蛋白的磷脂酶A1基因plaB.plaA和plaB基因与pET-28a(+)连接后转入大肠杆菌BL21(DE3)表达,得到基因工程菌AP28和BP28.AP28最佳的诱导表达条件为诱导初始OD600值0.5,IPTG浓度为0.2mmol/L,诱导温度为37℃,诱导时间为4h,优化后磷脂酶A1蛋白表达水平从32%上升至46%,包涵体复性的磷脂酶A1酶活从10.8U/ml上升到12U/ml,相对于BP28工程菌,目的蛋白的表达对宿主细胞毒性小,而且得到的蛋白容易纯化.因此通过优化磷脂酶A1基因plaA的诱导条件,使磷脂酶A1以大量的包涵体形式表达,从而得到较高活性的磷脂酶A1并避免其对宿主细胞的毒性是可行的,而且可以得到大量纯化的磷脂酶A1蛋白,方便下一步的研究. 相似文献