杭州虻纤溶酶的纯化及其生物活性分析

经过７５％硫酸铵沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤层析、ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－２５离子交换层析、Ｂ ｅｎｚａｍｉｄｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析,从杭州虻（Ｔａｂａｎｕｓ ｈｏｎｇｃｈｏｗｅｎｓｉｓ）腹部匀浆液中分离纯化出分子量约为３６．５ｋＤ的纤溶酶ＴＨＦＥ。经纤维蛋白平板测定表明,ＴＨＦＥ既具有纤溶酶作用,又具有激活纤溶酶原的作用。ＴＨＦＥ能分解纤溶酶原激活剂的生色底既具有纤     

重组水蛭素Ⅲ分子改建及其构效关系的初步研究

采用一种新的PCR定点诱变技术成功地对野生型水蛭素Ⅲ进行了定点诱变,这种方法快速、简便,有效。通过突变,将野生型水蛭素Ⅲ分子的活性功能非必需区的指状结构顶端第33～36位的氨基酸残基替换为RGDS序列,并进行了高效分泌表达,表达产物分泌到细胞外发酵液中。改构的水蛭素突变体与野生型水蛭素Ⅲ相比,两者的抗凝血酶活性基本一致,但体外抗血小板凝集试验结果表明,前者除原有的抗凝活性外还具有显著的抗ADP诱导的血小板凝集活性,该研究为水蛭素Ⅲ分子的结构功能关系研究以及新型抗凝药物的研制打下了基础。     

水蛭素联合改良三仁活血降脂方治疗肾病综合征湿浊血瘀证

目的:观察水蛭素联合改良三仁活血降脂方治疗肾病综合征湿浊血瘀证患者的临床疗效。方法:选取肾病综合征辨证属湿浊血瘀证患者60例随机分为水蛭素联合中药治疗组和单纯中药对照组,每组各30例。两组患者均予以相同的基础治疗,对照组予改良三仁活血降脂方辨证论治,治疗组在此基础上加用脉血康胶囊,疗程半年。比较两组患者中医临床症候积分,血凝、血脂、血浆白蛋白、尿蛋白及肾功能等指标。结果:治疗后两组患者湿浊血瘀证候均有改善,其中治疗组血瘀证候改善明显优于对照组(P0.05)。治疗后两组患者血浆白蛋白水平均较治疗前明显上升(P0.01);治疗组纤维蛋白原、胆固醇、24 h尿蛋白定量治疗效果优于对照组(P0.01);治疗组治疗后甘油三酯下降,血肌酐下降,差异有统计学意义(P0.05),对照组二者均无明显效果(P0.05)。治疗组与对照组的中医证候总有效率分别为96.67%、90%,西医临床疗效分别为90%、86.67%。结论:水蛭素能有效改善肾综湿浊血瘀证患者的中医临床证候及实验室指标,部分调节肾病综合征的高凝、高脂状态。     

水蛭素联合阿霉素对人卵巢癌细胞株耐药性的实验观察

目的探讨水蛭素联合阿霉素对人卵巢癌细胞生长的影响。方法通过细胞培养后绘制生长曲线,了解联合用药对抑制癌细胞增殖及诱导凋亡的作用。结果水蛭素联合阿霉素具有杀伤人卵巢癌细胞的效果。结论水蛭素有可能作为临床抗癌和抑癌治疗的潜在辅助用药。     

重组低出血抗凝蛋白在毕赤酵母中的中试发酵工艺研究及其纯化与鉴定

目的:通过对毕赤酵母中试发酵工艺的改进,建立一种简便可行的重组低出血抗凝蛋白(EH)的中试发酵工艺,为EH蛋白的放大生产研究奠定基础。方法:首先通过摇瓶培养绘测毕赤酵母工程菌的生长曲线,然后根据生长曲线,将对数生长期的菌种经过两级摇瓶培养放大后,直接接种到500 L的发酵罐中放大培养,通过发酵液的D600nm值、溶氧值(DO2)及菌体湿重动态监测细菌的生长状态,并用流加甲醇的方法诱导表达目的蛋白;表达上清经超滤、两步离子交换层析纯化获得目的蛋白;用非还原型SDS-PAGE和HPLC检测目的蛋白的纯度;用SDS-PAGE和质谱方法分析目的蛋白的相对分子质量;用Western印迹验证目的蛋白;用凝块法检测目的蛋白的抗凝活性。结果:发酵结束时,上清中蛋白含量达1.41 g/L,经后期分离纯化,得到约21 g EH蛋白,SDS-PAGE分析可见EH蛋白在还原状态下表观相对分子质量约为13.2×103±0.2×103,质谱分析相对分子质量约为7.3×103±0.73×103;Western印迹表明检测条带为目的蛋白,能被抗水蛭素抗体特异性结合;非还原型SDS-PAGE和HPLC测得EH蛋白的纯度均高于95%;凝块法检测EH蛋白的抗凝比活性为512~1024 ATU/mg。结论:建立了一条简便可行的EH蛋白的中试放大发酵生产工艺。     

洞穴吸血陆蛭一新种在中国云南省西陲的发现

记述了在中国云南省西陲德宏自治州潞两市一个洞穴深处岩壁上发现的以蝙蝠血为食物的陆生蛭类.由于标本的头部有5对眼,完全体节各有5环,体背各环有发达的乳突和背感器,尾吸盘巨大且腹面有辐射肋,因此属于山蜂属Haemadipsa Tennent,1859.又因为头部第5对眼点很小,甚至缺少;体背缺少色素和背部条纹;两牛殖孔仪被2环隔开;末环背中有1非常大的半网球形突起,肛门开口其顶部的横沟上.因此与山蛭属中已知其它种均不相同,故为1新种,定名为洲穴山蛭Haemadipsa cavatuses sp.nov..正模和12个副模标本保仔于中国科学院水生生物研究所.这是世界上首次对洞穴陆蛭的记载.     

美科学家提出惊人理论：昆虫引发瘟疫致恐龙灭绝

长期以来,科学家普遍认为6500万年前的一颗小行星撞击地球造成了恐龙大灭绝,然而日前,美国俄勒冈州立大学古生物教授乔治·波尔纳却在新书《谁在咬恐龙？昆虫病菌和白垩纪之死》中提出惊人理论：虽然小行星撞地球给地球带来了巨大的生态灾难,然而,恐龙事实上却是被带有病菌的吸血昆虫给灭绝的,也就是说,     

新型水蛭素嵌合抗栓剂的构建表达与功能研究

水蛭素（Hirudin,HV）作为新一代抗凝剂,它是目前已知最强的天然凝血酶抑制剂,并有望在临床上完全取代肝素。虽然水蛭素有许多优点,但出血倾向是其在临床应用上的主要副作用。目前尚没有好的解决办法。针对水蛭素在临床应用中所出现的这个问题,依据血栓形成的生理生化机制,构建出了含FXa识别序列水蛭素嵌合抗栓剂,来降低水蛭素在非血栓部位的活性从而减小出血的危险。小鼠尾部血栓模型实验表明：此新型嵌合抗栓剂能在不减少水蛭素抗凝血活性的同时,又能大幅度地降低出血副作用。具有非常重要的临床意义。     

重组水蛭素口服给药的抗凝效应

目的：考察不同剂量重组水蛭素-2（rHV2）口服给药后的抗凝效应。方法：以凝血时间（ClottingTime,CT）和凝血酶时间（ThrombinTime,TT）为指标,测定大鼠口服不同剂量的rHV2的抗凝效应。结果：rHV2口服给药后,凝血时间及凝血酶时间试验均表现出显著的抗凝效果,并且从给药后1h到4h抗凝效应一直延续。当rHV2剂量范围在50mg·kg^-1-100mg·kg^-1之间,抗凝血效应随着剂量的增加而加强,说明抗凝血效应是有剂量依赖性的。结论：rHV2经大鼠口服后能够产生抗凝效应,说明rHV2的口服是可行的。