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1.
采用阴离子交换和凝胶过滤色谱法纯化大肠杆菌高密度培养所表达的重组葡激酶-水蛭素融合蛋白(rSFH),经SDS-PAGE和RP-HPLC分析纯度达到98%以上,每升发酵液得率约0.7g。同时利用疏水色谱、MALDI-TOF对纯化过程中出现的rSFH同源二聚体的分析和表面疏水面积的计算及利用高效排阻色谱(HPSEC)分析NaCl、温度对rSFH的可逆二聚化行为的影响,认为疏水作用在rSFH的可逆二聚化行为中发挥着重要作用。  相似文献   
2.
比色法测定复合氨基酸注射液中的N-乙酰-L-半胱氨酸   总被引:1,自引:0,他引:1  
根据N-乙酰-L-半胱氨酸与氯化钯(PdCl2)反应,生成一种稳定的黄色化合物,我们建立了比色测定复合结晶氨基酸注射液中的NAC的方法。测定波长为375nm,检测结果重现性好,变异系数是3.9%,回收率范围在93.1%~100.2%之间,检测下限为0.163μg/ml。该方法比经典的电量滴定法灵敏度高、精确性好,较高压液相色谱法操作简便、费用低。  相似文献   
3.
目的:研究肝细胞生长因子(HGF)基因修饰的人脐带间充质干细胞(MSC)对Wistar大鼠慢性肝损伤的治疗作用。方法:利用携带人HGF基因的重组腺病毒(Ad~HGF)对MSC进行基因修饰;通过皮下注射CCl4-橄榄油溶液建立大鼠肝损伤模型;56只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、MSC组、HGF组和HGF/MSC组,分别尾静脉注射生理盐水、MSC、Ad-HGF或HGF/MSC,通过血清肝功能检测及肝组织的生化指标、病理切片等评价治疗效果。结果:利用腺病毒将HGF基因转入MSC并确定了最佳感染条件。CCl4-橄榄油诱导4周后,动物肝脏外观出现明显的脂肪变性和血清转氨酶明显升高,表明成功诱导了大鼠慢性肝损伤模型。经过4周治疗,治疗组动物的体重明显升高、肝指数明显降低,动物存活率高于模型组(模型组:50%;MSC组:70%;Ad-HGF组:70%;HGF/MSC组:90%)。肝功能指标测定结果显示,与模型组比较,HGF/MSC组动物的天门冬氨酸氨基转移酶(406.75±35.98 vs.513.75±12.71U/L,P〈0.01)、丙氨酸氨基转移酶(124.6±10.6 vs.169.67+15.38 U/L,P〈0.05)和总胆红素(14.6±2.08 vs.19.25±1.38g/dL,P〈0.01)均明显降低,白蛋白含量(29.1±1.3vs.22.05±2.61g/L,P〈0.05)明显升高;Ad-HGF组只有天门冬氨酸氨基转移酶(436.0±18.40vs.513.75±12.71U/L,P〈0.05)明显降低;而单纯MSC治疗对肝功能改善不明显。丙二醛测定结果显示,治疗后动物肝组织中的过氧化反应均较模型组显著减弱。HGF/MSC组和MSC组动物肝组织中的羟脯氨酸含量与模型组比较明显降低(69.27±14.58,63.23±13.23 vs.96.59±15.05mg/mL,P〈0.01)。上述实验结果提示3种治疗方式对CCl4-橄榄油引起的大鼠肝损伤均有一定的治疗效果,可减轻CCl。导致的肝损伤程度,增加动物体重,降低肝脏指数,减轻肝组织的过氧化反应,提高动物的存活率,其中HGF/MSC治疗效果最为明显,而且细胞注射没有引起动物的不良反应。结论:3种治疗方式均可改善CCl。导致的肝损伤,其中以HGF/MSC对肝损伤的治疗效果最好。本实验为HGF/MSC的临床研究提供了新的实验数据,为治疗肝损伤提供了新的治疗措施。  相似文献   
4.
EH蛋白是一种水蛭素衍生物,它是在水蛭素的N端引入了一小段寡肽,该寡肽可被凝血因子XIa(factor XIa,FXIa)和Xa(factor Xa,FXa)裂解释放水蛭素的抗凝血酶活性.比较在不同条件下FXa裂解EH蛋白的效果,包括裂解时间(2h,4h,6h,8h,10h,20h)、裂解温度(25℃,37℃,40℃)...  相似文献   
5.
谷氨酰胺二肽在肠外营养中的应用   总被引:6,自引:0,他引:6  
虽然谷氨酰胺(Gln)具有许多重要的生理功能,但是由于它不稳定性及低溶解度,使其应用受到限制。Gln二肽克服了它的缺点,并可被机体有效分解为氨基酸而被利用且没有任何毒副作用和不良反应。本文综述了Gln二肽的代射及其在肠外营养中的应用,Gln的许多生理作用在Gln二肽也逐步得以证实。  相似文献   
6.
目的:建立real-time PCR定量检测毕赤酵母基因组DNA残留量的方法,提高重组新蛭素的产品安全性。方法:选择拷贝数高且分布广泛的毕赤酵母5S rRNA基因为靶标基因设计扩增引物,提取酵母基因组DNA,稀释后作为扩增模板。以罗氏荧光定量PCR_LightCycler480平台为基础,建立基于SYBR GreenⅠ荧光染料的real-timePCR的检测方法,并考察用该方法检测重组新蛭素中毕赤酵母基因组残留量的灵敏度、精密度和回收率。结果:该法检测宿主DNA残留量灵敏度高,DNA浓度为0.1~1000 pg/μL范围内呈现良好的线性关系,其标准曲线的误差值小于0.2;用该法对5批注射用重组新蛭素(酵母)产品中宿主基因组DNA残留量进行了测定,结果分别为0.03、2.3、0.2、0.6、0.2 pg/mg。结论:该方法具有操作简便、灵敏度高等优点,可用于重组产品中酵母基因组残留DNA的定量测定。  相似文献   
7.
质粒治疗肢体动脉闭塞性疾病的安全性分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
肢体动脉血管闭塞性病是一种严重危害人类健康的疾病,许多病人最终要截肢,基因治疗为这类患带来了希望。利用肝细胞生长因子促进血管生成的作用,采用质粒作为载体对大鼠和故事片诉下肢动脉闭塞疾病模型进行治疗,效果良好。为探讨基因治疗的安全性问题,用绿色荧光蛋白报告基因研究质粒在体内的分布和表达,方法简便。通过制作冰冻切片观察绿色荧光蛋白在小鼠体内的表达情况发现局部注射质粒不会造成全身性扩散,表明该方法安全。  相似文献   
8.
目的:通过对毕赤酵母中试发酵工艺的改进,建立一种简便可行的重组低出血抗凝蛋白(EH)的中试发酵工艺,为EH蛋白的放大生产研究奠定基础。方法:首先通过摇瓶培养绘测毕赤酵母工程菌的生长曲线,然后根据生长曲线,将对数生长期的菌种经过两级摇瓶培养放大后,直接接种到500 L的发酵罐中放大培养,通过发酵液的D600nm值、溶氧值(DO2)及菌体湿重动态监测细菌的生长状态,并用流加甲醇的方法诱导表达目的蛋白;表达上清经超滤、两步离子交换层析纯化获得目的蛋白;用非还原型SDS-PAGE和HPLC检测目的蛋白的纯度;用SDS-PAGE和质谱方法分析目的蛋白的相对分子质量;用Western印迹验证目的蛋白;用凝块法检测目的蛋白的抗凝活性。结果:发酵结束时,上清中蛋白含量达1.41 g/L,经后期分离纯化,得到约21 g EH蛋白,SDS-PAGE分析可见EH蛋白在还原状态下表观相对分子质量约为13.2×103±0.2×103,质谱分析相对分子质量约为7.3×103±0.73×103;Western印迹表明检测条带为目的蛋白,能被抗水蛭素抗体特异性结合;非还原型SDS-PAGE和HPLC测得EH蛋白的纯度均高于95%;凝块法检测EH蛋白的抗凝比活性为512~1024 ATU/mg。结论:建立了一条简便可行的EH蛋白的中试放大发酵生产工艺。  相似文献   
9.
富含谷氨酰胺和支链氨基酸的肠外制剂对创伤大鼠的效用   总被引:2,自引:1,他引:1  
研究普通氨基酸注射液 (17AA)与富含谷氨酰胺及支链氨基酸注射液 (2 0AA)对创伤大鼠的营养效用。以Wistar大鼠为创伤模型 ,分别输注两种配方的氨基酸注射液 ,以日立L - 85 0 0氨基酸自动分析仪测定动物血浆游离氨基酸 ,并测定创伤处海绵内羟脯氨酸含量。结果显示创伤后大鼠血浆牛磺酸、谷氨酸、谷氨酰胺和支链氨基酸含量较术前下降 ,但 2 0AA组血浆氨基酸恢复优于 17AA组 ,创伤处海绵内羟脯氨酸含量 2 0AA组显著高于 17AA组 (1.2 9± 0 .2 1vs 0 .83± 0 .16mg/块海绵 ,P <0 .0 5 )。提示 ,创伤后给予富含谷氨酰胺和支链氨基酸的营养制剂能提高血浆氨基酸浓度并有利于创伤的恢复  相似文献   
10.
新型水蛭素嵌合抗栓剂的构建表达与功能研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
水蛭素(Hirudin,HV)作为新一代抗凝剂,它是目前已知最强的天然凝血酶抑制剂,并有望在临床上完全取代肝素。虽然水蛭素有许多优点,但出血倾向是其在临床应用上的主要副作用。目前尚没有好的解决办法。针对水蛭素在临床应用中所出现的这个问题,依据血栓形成的生理生化机制,构建出了含FXa识别序列水蛭素嵌合抗栓剂,来降低水蛭素在非血栓部位的活性从而减小出血的危险。小鼠尾部血栓模型实验表明:此新型嵌合抗栓剂能在不减少水蛭素抗凝血活性的同时,又能大幅度地降低出血副作用。具有非常重要的临床意义。  相似文献   
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