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1.
重组葡激酶和水蛭素融合蛋白的血栓靶向性机制   总被引:1,自引:0,他引:1  
为解释以凝血因子Xa(FXa)的识别序列为连接肽的葡激酶和水蛭素的融合蛋白(命名为SFH)在体内的强溶栓和低出血的特征,研究分析了SFH的两个血栓靶向性作用机理.首先采用ELISA和免疫组化的方法在体外分析了由水蛭素游离的C末端赋予的SFH对血栓的靶向性,结果显示SFH对凝血酶和富含凝血酶的血栓具有更高的亲和力.为阐明SFH抗凝活性在血栓部位的靶向性释放,构建表达了仅在水蛭素N末端连接FXa识别序列的水蛭素衍生物(命名为FH).体外试验结果表明完整的FH无抗凝活性,在体内FH可以发挥抗栓作用,且出血副作用较低,这些结果说明FXa的识别序列可以封闭水蛭素的抗凝活性,在体内FH可以由于FXa的成功裂解而释放其抗凝活性,且其抗凝活性可能仅局限于血栓局部.这就间接说明了SFH的抗凝活性可以在血栓局部进行靶向性释放.以上两个血栓靶向性作用机理是SFH在体内发挥更高溶栓效率和降低出血副作用的重要机制.  相似文献   
2.
In comparison of amino acid sequences of 4 kringles of both macrophage stimulating protein (MSP) and hepatocyte growth factor (HGF), consensus motif sequence was determined. According to this consensus sequence, a pair of universal primers were designed. In combination with specific upstream or downstream primer of MSP or HGF respectively, serial fragments containing variant number of kringle (from 1 to 4) can be obtained by once PCR. By ligating the C terminal and N terminal fragments with different combination, serial deletants and chimeras of MSP and HGF were constructed. Sequence analysis showed that the degeneracy for universal primers and the sequences of those constructed deletants and chimeras are desired. Biological assay of these deletants revealed that wild type MSP can inhibit the growth of some tumor cell lines and that kringle 1 of MSP is essential for function as that of HGF.  相似文献   
3.
确定肝细胞生长因子(HGF)和巨噬细胞刺激蛋白(MSP)各4个Kringle结构的共有序列并设计公用引物,此公用引物配合HGF和MSP上、下游引物,利用DNA聚合酶链式反应(PCR)技术,可在一次PCR反应中扩增出多条片段,以不同的组合方式将这些片段两两连接,得到了缺失不同Kringle的缺失体和两种分子间不同区域的缺失型嵌合体,从而为HGF和MSP结构与功能的研究奠定了基础。此方法可普遍适用于含有两个或两个以上Kringle分子的缺失体与嵌合体的构建。克隆过程中对存在引物酶切位点的cDNA片段的克隆方法的建立,为同类问题的解决提供了可靠的方法。  相似文献   
4.
确定肝细胞生长因子 (HGF)、巨噬细胞刺激蛋白 (MSP)各 4个Kringle结构的共有序列并以此为基础设计公用引物 ,利用此公用引物可扩增出含不同数目Kringle的系列片段 ;以不同的组合方式连接 ,得到了系列缺失体和嵌合体 ;测序结果表明公用引物的简并性及所扩增序列与理论预期一致 .对以此法所构建的HGF/MSPK1缺失体表达后进行活性测定 ,提出MSP的K1是重要的功能决定区 .此外 ,提出了对内部存在引物酶切位点的cDNA片段的克隆策略 .  相似文献   
5.
利用酵母双杂交方法,用肝细胞生成素(HPO)作为诱饵蛋白在人胎肝cDNA文库中筛选到能与HPO相互作用的蛋白:AP-1辅助激活因子JAB1.并用PCR方法从人胎肝cDNA文库中扩出JAB1全长cDNA,进行GST-JAB1原核融合蛋白表达与纯化.蛋白质结合实验表明,JAB1与人重组HPO以及COS7真核表达的HPO在体外有结合作用.  相似文献   
6.
非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)引起猪的烈性传染病。2018年8月我国首次暴发ASF疫情,由于没有有效的商品化疫苗,导致疫情蔓延至我国各省份。随着疫情的发展,准确、快速的诊断技术成为疫情防控的关键。本文梳理总结了我国ASFV诊断检测技术专利现状,包括ELISA、免疫层析技术等免疫学检测方法和PCR、等温扩增技术、基于CRISPR/Cas系统开发的多种分子生物学检测方法,以期为我国ASF疫病防控及诊断产品的研发提供有价值的参考。  相似文献   
7.
构建并表达兼有溶栓和抗凝活性、减少出血副作用的人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)和水蛭素(HV2)的融合蛋白。通过提取总RNA和RT-PCR获得t-PA基因,与HV2基因通过活化凝血因子X(Fxa)识别序列(IEGR)的对应碱基序列连接构成融合蛋白基因,融合蛋白基因经pGEM-T、pIC9克隆至表达载体pIC9K上,电转导入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115。转化子摇瓶内甲醇诱导表达。纤维蛋白平板溶圈法和纤维蛋白凝块法分别检测溶栓和抗凝活性。琼脂糖凝胶电泳结果显示克隆的t-PA基因片段大小为1700bp,序列测定结果表明其35位氨基酸由文献报道的精氨酸突变为色氨酸。限制性酶切和PCR鉴定结果均表明融合蛋白基因已克隆入表达载体和宿主菌。甲醇利用实验、G418抗性筛选获得多拷贝甲醇利用快型克隆。甲醇诱导表达产物具有纤溶活性并可被抗t-PA抗体抑制。完整融合蛋白无抗凝活性,但以Fxa裂解后可释放抗凝活性。同时,融合蛋白以单链和双链两种形式存在。融合蛋白在血栓部位特有的Fxa作用下靶向释放抗凝活性,具有溶栓抗凝双功能,有望降低临床出血副作用。  相似文献   
8.
新型水蛭素嵌合抗栓剂的构建表达与功能研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
水蛭素(Hirudin,HV)作为新一代抗凝剂,它是目前已知最强的天然凝血酶抑制剂,并有望在临床上完全取代肝素。虽然水蛭素有许多优点,但出血倾向是其在临床应用上的主要副作用。目前尚没有好的解决办法。针对水蛭素在临床应用中所出现的这个问题,依据血栓形成的生理生化机制,构建出了含FXa识别序列水蛭素嵌合抗栓剂,来降低水蛭素在非血栓部位的活性从而减小出血的危险。小鼠尾部血栓模型实验表明:此新型嵌合抗栓剂能在不减少水蛭素抗凝血活性的同时,又能大幅度地降低出血副作用。具有非常重要的临床意义。  相似文献   
9.
李鹏宇  张蕾  董春娜  李静  宋芳  肖进 《病毒学报》2023,(6):1677-1681
为建立一种快速、高效、便捷的非洲猪瘟病毒抗体检测方法,本试验采用生物信息学方法筛选得到了性能优异的非洲猪瘟病毒抗原表位多肽P54t,利用P54t多肽作为检测抗体的特异性抗原,建立了一种特异性、敏感性好的胶体金免疫层析抗体检测方法,用于检测待测样品中是否含有非洲猪瘟病毒抗体。结果显示,该方法的敏感性为100%,特异性为100%,最低检测限度可达1:12800,与商品化试剂盒比较,符合率为94.3%。结果表明,该方法敏感性好、特异性强,检测结果准确,可用于非洲猪瘟病毒特异性抗体检测。  相似文献   
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