野生白刺人工栽培技术及开发利用

白刺是渤海湾泥岸沿海的一种重要的野生经济植物资源,文章提出了野生白刺的人工栽培技术,并对其生态利用价值和经济利用价值进行了探讨,为科学利用白刺资源,实现泥岸沿海重盐碱地绿化,提供了科技支撑.     

重组低出血抗凝蛋白在毕赤酵母中的中试发酵工艺研究及其纯化与鉴定

目的:通过对毕赤酵母中试发酵工艺的改进,建立一种简便可行的重组低出血抗凝蛋白(EH)的中试发酵工艺,为EH蛋白的放大生产研究奠定基础。方法:首先通过摇瓶培养绘测毕赤酵母工程菌的生长曲线,然后根据生长曲线,将对数生长期的菌种经过两级摇瓶培养放大后,直接接种到500 L的发酵罐中放大培养,通过发酵液的D600nm值、溶氧值(DO2)及菌体湿重动态监测细菌的生长状态,并用流加甲醇的方法诱导表达目的蛋白;表达上清经超滤、两步离子交换层析纯化获得目的蛋白;用非还原型SDS-PAGE和HPLC检测目的蛋白的纯度;用SDS-PAGE和质谱方法分析目的蛋白的相对分子质量;用Western印迹验证目的蛋白;用凝块法检测目的蛋白的抗凝活性。结果:发酵结束时,上清中蛋白含量达1.41 g/L,经后期分离纯化,得到约21 g EH蛋白,SDS-PAGE分析可见EH蛋白在还原状态下表观相对分子质量约为13.2×103±0.2×103,质谱分析相对分子质量约为7.3×103±0.73×103;Western印迹表明检测条带为目的蛋白,能被抗水蛭素抗体特异性结合;非还原型SDS-PAGE和HPLC测得EH蛋白的纯度均高于95%;凝块法检测EH蛋白的抗凝比活性为512~1024 ATU/mg。结论:建立了一条简便可行的EH蛋白的中试放大发酵生产工艺。     

邻近多位点基因突变的组合大引物PCR策略(英文)

报道了一种新的组合多位点突变策略,通过单管中三阶段聚合酶链式反应(PCR)得以实现。在第一阶段,PCR扩增出多位点突变大引物,然后在第二阶段延伸大引物,在第三阶段获得全长突变基因序列。基于退火温度与热循环参数的组合大引物反应的优化,三个阶段中退火温度差异小(低于10°C),成功扩增出多位点突变基因序列和比邻突变序列。是一种简单、高效的多位点突变方法。     

Orexins在雌性大鼠条件性蔗糖摄取中的作用研究

目的:探讨Orexins在雌性大鼠的摄取蔗糖的操作反应行为的作用,以及在线索诱导下恢复寻找蔗糖行为中的作用。方法:将雌性SD大鼠分为限制进食组和自由进食组,以固定比率和累进比率训练大鼠自己摄取蔗糖颗粒。通过Ox R1受体拮抗剂SB-334867预处理,观察SB-334867对大鼠按固定比率摄取蔗糖行为和在线索诱导下恢复寻找蔗糖行为的影响。结果:限制进食的大鼠表现出按压有效杠杆次数和获取蔗糖颗粒数显著增多(P0.05),按压无效杠杆次数稍微增多。SB-334867可显著减少限制进食大鼠按压有效杠杆次数(P0.05)。与对照组相比,SB-334867在消退期间可显著增加按压有效杠杆的次数(P0.05);在恢复期间,限制进食大鼠按压有效杠杆的次数显著增多(P0.05)。结论:Orexins系统在大鼠条件刺激诱导摄取蔗糖中可能存在性别差异。