全文获取类型
收费全文 | 3410篇 |
免费 | 301篇 |
国内免费 | 963篇 |
出版年
2024年 | 23篇 |
2023年 | 56篇 |
2022年 | 67篇 |
2021年 | 78篇 |
2020年 | 75篇 |
2019年 | 101篇 |
2018年 | 86篇 |
2017年 | 90篇 |
2016年 | 98篇 |
2015年 | 119篇 |
2014年 | 217篇 |
2013年 | 152篇 |
2012年 | 150篇 |
2011年 | 219篇 |
2010年 | 152篇 |
2009年 | 193篇 |
2008年 | 221篇 |
2007年 | 158篇 |
2006年 | 165篇 |
2005年 | 172篇 |
2004年 | 213篇 |
2003年 | 175篇 |
2002年 | 192篇 |
2001年 | 187篇 |
2000年 | 127篇 |
1999年 | 151篇 |
1998年 | 129篇 |
1997年 | 110篇 |
1996年 | 111篇 |
1995年 | 117篇 |
1994年 | 90篇 |
1993年 | 70篇 |
1992年 | 82篇 |
1991年 | 79篇 |
1990年 | 54篇 |
1989年 | 64篇 |
1988年 | 26篇 |
1987年 | 20篇 |
1986年 | 12篇 |
1985年 | 34篇 |
1984年 | 15篇 |
1983年 | 8篇 |
1982年 | 4篇 |
1981年 | 10篇 |
1979年 | 1篇 |
1963年 | 1篇 |
排序方式: 共有4674条查询结果,搜索用时 46 毫秒
91.
生长特性差别的胃癌MGC803细胞亚系间细胞骨架、细胞通讯与癌基因表达的比较研究 总被引:1,自引:0,他引:1
肿瘤细胞表型差异是临床药物敏感性、抗原性、转移性、潜伏性和进展速度等差异的主要原因。为了弄清恶性表型差别的表现、相关性及调节机理、我们从胃癌MGC 803系分离了单细胞亚系,各亚系按克隆过程的时间差别归纳分组,选快组M 17、中组M 6和慢组M 3进行比较。软琼脂生长实验表明三者的恶性程度有显著差别;M17恶性度最高,M3最低,M6居中。与其它表型联系比较,证明细胞生长速度、细胞微丝、微管骨架破坏及细胞通讯功能抑制都与锚着不依赖性生长的恶性特征有平行相关性。同时,M 17和M 3原癌基因表达有明显差别。 相似文献
92.
抗人肺腺癌单克隆抗体重,轻链可变区基因的分离克隆和序列测定 总被引:6,自引:1,他引:5
根据鼠免疫球蛋白重。轻链可变区基因FR1和FR4的序列保守性,化学合成了适于体外扩增Ig重、轻链可变区基因(V_H和V_L)的数对引物。以分泌抗人肺腺癌单抗的杂交瘤细胞株WLA-2C4的基因组DNA为模板,PCR扩增V_H和V_L基因,分别克隆人pUC19载体。转化子经蓝、白斑筛选,酶切鉴定,双脱氧测序证实确为鼠单抗可变区基因,其中V_H基因全长为348bp,编码116aa,属重链ⅡB亚类;V_L基因全长318bp,编码106aa,属K轻链Ⅵ亚类。 相似文献
93.
采用人结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis TB)染色体DNA为模板,选择位于插入片段IS6110中884~865和568~588碱基对处的两个片段为引物,扩增出317bp的特异性片段.将其克隆进pUCl9载体。酶切图谱分析和DNA序列测定证实为目的片段。该片段经DIG标记,分别与11种分枝杆菌DNA进行Southern杂交,结果证明只与人型复合分枝杆菌发生杂交反应。利用该对引物建立的PcR检测拄术对74份结核病痰液标本进行检测,并与临床细菌快速培养结果相比较,发现48份临床阳性均为PcR阳性,在26份临床阴性标本中亦发现11份PCR检测阳性。将标本PCR产物与克隆探针进行杂交,显示两者结果完全一致。说明PCR检测体系结果可靠,其灵敏度明显高于目前临床所采用的方法,可作为一种常规技术用于结核病的临床检测。 相似文献
94.
人干扰素α-2b生产工艺的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
人干扰素α-2b的简易、高效生产工艺研究,包括高效率、小型化的发酵技术.不用单克隆抗体亲和层析的纯化工序.以及大肠杆菌表达的人干扰索α-2b包涵体蛋白的天然构型复性等问题.从10L基因工程大肠杆菌发酵液所得l000g菌体中得人干扰素α-2b约500mg,效价为l×103u/mg,设备投资少,生产成本低,产品表现了高纯度、高效价。适宜大量生产,为广大人民群众提供廉价高质量药品创造了条件。 相似文献
95.
人白细胞介素-3基因在酿酒酵母中的分泌表达 总被引:4,自引:0,他引:4
利用PCR突变方法,改造了人白细胞介素-3(hIL-3)cDNA,在成熟蛋白编码顺序5'端前突变入了XbaⅠ酶切位点和酵母类胰蛋白酶加工位点Lys-Arg的密码子。改造后的hIL-3cDNA插入大肠杆菌-酵母穿梭质粒pVT102u/α,使其准确融合于α-交配因子前导序列之后,并置于启动子ADH1调控之下。转化入酿酒酵母宿主菌S-78筛选后,30℃培养48h,上清能明显促进hIL-3依赖细胞TF-1生长。上清中分泌表达的hIL-3经ELISA鉴定并定量,其表达量大于1.0mg/L。~3H-TdR掺入法测定上清中hIL-3活性为1.8×10~3u/ml。 相似文献
96.
人红细胞生成素单克隆抗体的制备、鉴定及应用研究 总被引:3,自引:0,他引:3
用rhEPo作为抗原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与x63Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞融合,再碱性PAGE方法进一步分离并纯化的rhEpo,包被Pvc板,对杂交瘤用ELlSA方法进行筛选,获得两株稳定分泌抗hEPO单抗的杂交瘤细胞株。经鉴定分别属于IgG1、IgG2b,轻链均为k链,Kd分别为5.53×10-10mol/L和1.34×1O-10mol/L.用western blot方法证明两者对hEPO具有高度韵专一性.能特异地识别rhEPO和尿源hEPO。所制备单抗可作为亲和层析的配体,用于再生障碍性贫血病人尿中EPO及哺乳类工程细胞所表达的hEPO的分离、纯化,并可用于hEPO的定量检测. 相似文献
97.
98.
人卵泡促性腺激素释放肽(hF-GRP)为一只含14个氨基酸的多肽类激素,我们已经用2D-NMR技术测定了它的溶液构象,本文又用STM技术观察了hF-GRP单层铺展时的分子图象,测得其分子大小约为2.4nm,并用2D-NMR结果较好地解释了所得的图象。 相似文献
99.
构建了同时表达麻疹病毒LA株HA和F基因及人白细胞介素2(IL2)的重组痘苗病毒疫苗株RVJMLHAFKIL2。Westemblot结果显示,HA、F和人IL2基因均在痘苗病毒中稳定有效表达,且产物与天然蛋白相近。HA分子有糖化的79kD和非糖化的田kD两种形式;F分子以60kD的前体F0、43kD的F1和18kD的F2三种形式存在。表达产物的血凝效价为1:8,血溶活性OD540的测定结果是O37。该重组病毒免疫新西兰白兔及C57小鼠,可以产生抗麻诊病毒HA和F蛋白的特异性ELISA(1:644~1600)、血凝抑制(1:256~512)、血溶抑制(1:80~160)和NT(1:640)抗体。接种兔及裸鼠后的毒力反应,明显低于只表达IL2的重组痘苗病毒疫苗株RVJ123,表现为兔皮肤红肿范围小,持续时间短,皮肤无坏死;裸鼠毒力的结果,表现出RVJMLHAFKIL2病毒只存留于接种局部,而且滴度大大降低,未发现该病毒向其它脏器播散和增殖。麻疹重组痘苗病毒疫苗株的构建为该疫苗株的人体免疫观察奠定了基础。 相似文献
100.
人抗E.Coli J5噬菌体抗体制备的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以E.Coli J5株对合人Ig基因的噬菌体抗体库进行淘筛富集,免疫印迹筛选,以及ELISA检测,结果获得4株能与E.Coli J5株结合的阳性克隆,且阳性克隆结合抗原的活性可分别被E.Coli J5株、E.Coli Rc-LPS和抗E.Coli J5株核心糖脂域MAb抑制.PCR检测表明,4株阳性克隆均分别带有约660bp大小的重链和轻链基因片段.SDS-PAGE与蛋白质印迹的结果显示,经IPTG诱导的阳性克隆能表达分子量约为50000大小的蛋白,提示该4株阳性克隆能够表达具有一定抗原结合活性的人源Fab片段. 相似文献