生长特性差别的胃癌MGC803细胞亚系间细胞骨架、细胞通讯与癌基因表达的比较研究

肿瘤细胞表型差异是临床药物敏感性、抗原性、转移性、潜伏性和进展速度等差异的主要原因。为了弄清恶性表型差别的表现、相关性及调节机理、我们从胃癌MGC 803系分离了单细胞亚系,各亚系按克隆过程的时间差别归纳分组,选快组M 17、中组M 6和慢组M 3进行比较。软琼脂生长实验表明三者的恶性程度有显著差别;M17恶性度最高,M3最低,M6居中。与其它表型联系比较,证明细胞生长速度、细胞微丝、微管骨架破坏及细胞通讯功能抑制都与锚着不依赖性生长的恶性特征有平行相关性。同时,M 17和M 3原癌基因表达有明显差别。     

小鼠胃粘膜细胞和人胃癌细胞间隙连接的超微结构研究与促癌变剂的影响

应用冷冻蚀刻电镜技术,我们观察到小鼠正常胃粘膜上皮细胞膜的间隙连接和紧密连接。人胃癌MGC-803细胞膜上未见到间隙连接和紧密连接,表明胃癌细胞间隙连接结构的消失是细胞连接通讯抑制的主要原因。促癌变剂TPA和黄芫花分别处理胃粘膜导致膜上皮细胞的间隙连接消失或明显减少。本结果支持关于细胞连接通讯抑制是胃癌癌变机理之一,可能与癌变的促进有关的分析。本文对细胞间隙连接数目变化快的现象及可能的调节机理进行讨论。     

骨骼肌肌丝分化与横纹肌肉瘤分化异常的研究

本工作观察了鸡胚胸肌原代培养物内完成末次分裂的有丝分裂后肌母细胞在初生0时—22小时内形态分化与肌专一蛋白表达的时、空间特征。肌母细胞的肌分化程序是(1)退出细胞周期,(2)开始合成和集累结蛋白与肌丝蛋白,(3)细胞伸长,肌丝肌节的装配,(4)细胞融合形成多核肌管。横纹肌肉瘤的细胞周期与肌终末分化关系异常,肌丝分化阻断。少数瘤细胞形成正常肌丝肌节,表明瘤细胞内仍存在正常肌分化所需的全部遗传信息。肌分化程序的某些特定基因功能性表达异常可能是增殖与分化紊乱的主要原因。     

间隙连接蛋白Cx43在人胚肺和肺癌细胞表达的研究

细胞与细胞之间通过细胞膜上的间隙连接通道交换小分子和离子进行细胞间通讯,对细胞增殖分化调控和机体内环境稳定有重要作用。用间隙连接蛋白Ｃｘ４３ｃＤＮＡ探针Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交,Ｃｘ４３抗体免疫荧光染色和罗氏黄荧光染料传输方法检查,正常人胚肺细胞的Ｃｘ４３在ｍＲＮＡ和蛋白水平有高表达,Ｃｘ４３蛋白免疫荧光分布在间隙连接的部位,细胞间隙连接通讯功能明显。与正常相反,人肺癌ＰＧ系细胞Ｃｋ４３无论在ｍＲＮＡ或蛋白质水平都无表达,细胞通讯功能缺陷。结果表明Ｃｘ４３在培养的人胚肺细胞有功能性表达。人肺癌ＰＧ细胞通讯功能缺陷与Ｃｘ４３基因转录抑制有关。对Ｃｘ基因的抑癌基因性质进行讨论。     

食管鳞癌MLH1基因改变及其与微卫星不稳定的关系

MLH1是位于3p21．3上的一个DNA错配修复基因,其异常与多种肿瘤相关。为探索食管鳞癌中MLH1基因改变及其与微卫星不稳定(MSI)的关联情况,采用微卫星分析和RT—PCR方法检测了14个微卫星标志在食管癌中的状况及MLH1转录水平的表达,发现35％的食管癌出现至少一个微卫星的不稳定,66．7％的肿瘤在MLH1基因内标志D3S1611位点表现为杂合性丢失,但是MLH1没有明显的mRNA表达下调。MSI与食管癌分期、分级、淋巴结转移、患者年龄和性别等参数及MLH1基因杂合性丢失(LOH)之间无统计学意义的相关性。这些结果表明：食管癌中MLH1存在较高频率的等位基因丢失,但其mRNA表达水平并无明显异常;所测微卫星标志的不稳定是食管癌的频发事件,与MLH1基因LOH不存在必然联系。     

细胞周期相关蛋白cyclin D1、p53和p21WAF1/Cip1在食管鳞癌中的表达改变及其病理学意义

食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)是我国常见的恶性肿瘤之一, 虽然临床诊治手段正逐步改进, 但中晚期患者5年生存率仍然很低。目前认为细胞周期调控异常与肿瘤发生发展关系密切, 然而相关周期调节蛋白在食管癌患者中的表达改变、临床意义及其应用价值还没有明确结论。文章应用组织微阵列联合免疫组织化学技术(TMA-IHC), 对148例食管鳞癌组织标本中细胞G₁/S期调控蛋白cyclin D1、p53和p21^WAF1/Cip1的表达进行检测, 分析其与临床病理参数之间的相关性。结果显示, cyclin D1与p53蛋白在食管癌细胞中表达升高, p53表达阳性率与区域淋巴结转移显著相关(P = 0.001)。p21^WAF1/Cip1蛋白在肿瘤组织中表达降低, 且p21WAF1/Cip1表达阴性患者的术后生存时间显著短于表达阳性的患者(P = 0.001)。多因素生存分析显示p21WAF1/Cip1是一个独立的预后因素(相对危险度为0.418, P<0.001)。微阵列比较基因组杂交(array-CGH)检测进一步表明45.4%的食管癌患者存在cyclin D1基因扩增。以上结果提示食管鳞癌中存在细胞周期G1/S期调控异常, p21^WAF1/Cip1蛋白可能是一个有应用价值的预后因子。     

黄芫花提取物对V_(79)细胞和WB肝细胞的生物学效应 1.细胞连接通讯与增殖活性的相关性变化

用SLDT技术、细胞生长曲线、~3H-TdR掺入、细胞分裂指数和流式细胞光度术等方法在V_(79)细胞和WB肝细胞中观察到中药促癌物黄芫花提取物刺激细胞增殖的作用与对细胞GJIC抑制的作用有平行相关性。黄芫花提取物抑制V_(79)细胞的GJIC,同时刺激DNA合成,使细胞周期M期时相百分比升高,与TPA的效应相似,对黄芫花提取物促癌作用机理、GJIC抑制与细胞增殖周期的相关性进行分析讨论。     

人食管癌EC9706单克隆的分离培养及其生物学特性的研究

用限制性稀释法对食管癌EC9706细胞系进行单细胞克隆分离,建立了3个亚系,分别命名为EC1、EC2和EC3。细胞遗传学分析显示,EC1仍为混合克隆,EC2和EC3的染色体众数分别为117条和62条。对EC2和EC3的生物学特性进行比较,生长曲线、平皿集落形成能力实验、流式细胞分析和细胞运动能力实验均表明,两者的恶性程度有显著差别,EC2较低,EC3较高。成功分离的2个食管癌单克隆细胞亚系,可为食管癌发生发展的分子机制研究、基因治疗研究、耐药机制研究以及抗肿瘤药物筛选提供实验材料。     

胃癌细胞与正常细胞的间隙连接通讯和促癌剂效应的研究

本文介绍用一种新的快速、简便SLDT’技术研究培养细胞的间隙连接通讯功能。细胞划痕后,标记两种荧光染料——Lucifer’Yellow(LY, MW.457.2)和Rhodamine Dextran(RD,MW.10,000)。RD停留原位,LY小分子传输到邻近细胞,表示间隙连接通讯现象。用SLDT方法观察到人胃腺癌MGC一803细胞无连接通讯功能。钙调素抑制剂T"FP有使胃癌细胞恢复连接通讯的效应。中国地鼠V,。细胞,wB大鼠肝细胞和鸡胚成肌细胞有通讯功能。促癌变剂TPA阻断正常细胞的间隙连接通讯,并阻断由。rFP丐导的胃癌细胞连接通讯。