甲型H1N1流感病毒核酸荧光定量RT-PCR检测技术

目的:建立基于TaqMan荧光探针技术的甲型H1N1流感病毒实时定量RT-PCR方法。方法:分析H1N1流感病毒基因特性,根据新发甲型H1N1流感病毒突变基因片段设计检测引物和TaqMan荧光探针,建立荧光定量RT-PCR检测体系,体外转录制备RNA标准品,进行特异性、敏感性、重复性及盲样检测评价实验。结果:可特异性有效检测新发甲型H1N1流感病毒核酸,与H1～H16流感病毒基因无交叉反应;对RNA标准品的检测敏感性达103拷贝/μL;重复性实验中,阳性标准品Ct值变异系数(CV)10%,阴性标准品检测结果均呈阴性;12份盲样检测结果特异性好。结论:该荧光定量RT-PCR方法可作为甲型H1N1流感防控的病原快速诊断技术。     

电场中的蛋白质结晶

人们一直致力于寻求提高蛋白质晶体质量的方法,利用电场诱导蛋白质结晶即是诸多方法中的一种。已有文献报道显示,电场对蛋白质结晶的影响是积极的。我们从直流电场、交流电场、内置电场、外置电场对蛋白质结晶的影响及相关结晶设备,电场中生长的蛋白质晶体质量的评估,电场中蛋白质结晶的原理及影响因素等方面,对已报道的电场中的蛋白质结晶研究工作进行了总结。     

血红素加氧酶-1重组载体的构建及在胃癌细胞中的初步研究

目的构建人血红素加氧酶-1（hemeoxygenase-1,HO-1）及其突变体的真核表达载体,观察其在胃腺癌细胞中HO-1表达和活性变化,研究HO-1活性变化的胃腺癌细胞对顺铂抗药能力的变化,为进一步研究HO-1对肿瘤细胞影响机制奠定基础。方法根据GenBank中HO-1cDNA序列设计引物,调取基因并克隆入pcDNA3．1（＋）质粒中,构建表达人野生型HO-1与突变型HO-1（HO-1G143H）的重组质粒。脂质体介导重组质粒转染胃腺癌细胞BGC823,用RT—PCR和Western印迹法分别检测细胞中HO-1mRNA的表达和蛋白表达水平,体外测定HO—1活性变化,应用顺铂进行体外抗药性实验。结果酶切鉴定和测序证实,HO-1真核表达载体构建成功;转染质粒后的BGC823,HO-1的mRNA和蛋白的表达水平明显上升;转入野生型质粒的细胞HO-1活性上升,转入突变型质粒的细胞HO-1活性下降;HO-1活性下降BGC823细胞抗顺铂杀伤能力增强。结论构建了HO-1野生型与突变型真核表达载体;将其转入胃腺癌细胞,引起了HO-1的mRNA和蛋白表达的增加和活性变化;体外实验表明,HO-1活性下降的BGC823细胞抗顺铂能力增强。     

三种苦瓜多糖的体外发酵特性比较研究

采用体外发酵技术评价分段醇沉提取的3种苦瓜多糖(MCP1、MCP2和MCP3,乙醇终浓度分别为45%、60%和75%)对三元猪盲肠食糜的发酵特性和发酵产物的影响。于不同发酵时间点记录产气量,48 h后检测发酵液pH值、NH3和短链脂肪酸(SCFA)含量。结果表明,MCP1和MCP2发酵动力学参数最优,显著优于葡萄糖和空白对照组(P0.05);MCP2和葡萄糖组pH值最低,MCP1和葡萄糖组的NH3含量最低;葡萄糖组的丙酸、异丁酸和SCFA总量显著高于其它各组(P0.05);MCP2的乙酸、异丁酸和SCFA总量显著高于其它多糖组(P0.05)。结果提示,MCP1和MCP2是2种理想的可被盲肠微生物利用的碳源,并可改变微生物发酵产生的SCFA含量与组成。     

菊粉和刺五加提取物对早期断奶仔猪生长性能、血液指标和肠道形态的影响

试验选用120头21日龄5.64kg左右的三元杂交断奶仔猪,分别饲喂基础日粮(对照组)、基础日粮+抗生素(抗生素组)和基础日粮+5%菊粉+0.1%刺五加提取物(实验组),试验期为14d,观察日粮中复合添加菊粉和刺五加(AS)提取物对早期断奶仔猪生长性能、血液生化指标和肠道形态的影响。试验结果表明,实验组与对照组相比,仔猪日增重(ADG)显著提高(P0.05),而料肉比(F/G)则显著降低(P0.05),但平均日采食量(ADFI)差异不显著(P0.05);实验组仔猪血清中血糖(GLU)、低密度脂蛋白(LDL)、乳酸脱氢酶(LDH)和尿素氮(BUN)与对照组差异不显著(P0.05),但试验第14d,碱性磷酸酶(ALP)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)浓度均显著高于对照组(P0.05);实验组仔猪十二指肠和回肠的隐窝深度显著高于对照组(P0.05),空肠和回肠的绒毛高度显著高于对照组(P0.05)。试验显示,日粮中添加菊粉和刺五加提取物对提高早期断奶仔猪的生长性能、改善小肠消化和吸收功能有重要作用。     

铬的营养生理功能

三价铬是人和动物必需的微量元素。铬在吸收后主要由转铁蛋白运输。在细胞内,4个三价铬离子与apochromodulin形成有活性的hopochromodulin。hopochromodulin除了可与胰岛素和/或胰岛素受体直接结合起作用外,还可以通过激活AMPK激酶来降低细胞膜胆固醇含量,改善细胞骨架功能,促进GLUT4移位,然后又通过激活p38MAPK激酶增强GLUT4的内在活性,从而促进葡萄糖吸收。铬也可以提高生长激素轴活性,并有降低动物机体脂肪沉积、增加肌内脂肪沉积、提高瘦肉率等作用。     

Prokaryotic Expression and Potential Application of the Truncated PCV-2 Capsid Protein

Three pairs of specific primers were designed to amplify the F2-1, F2-2 and XF2-2 truncated sequences of ORF2 which encodes the capsid protein of porcine circovirus type 2 (PCV-2). The F2-1 sequence had most of the NLS region of ORF2, but the F2-2 and XF2-2 genes had the NLS region deleted. Truncated genes were subcloned into pET-32a(+) vectors to construct recombinant fusion expression vectors. The vectors were then transformed into Rosetta(DE3) E. coli and expressed by induction of IPTG. Expressed protein...     

用于盐碱土壤处理的氧化硫硫杆菌的选育及鉴定

目的:基于氧化硫硫杆菌能够氧化硫产生硫酸的特性,在盐碱土壤治理与改良方面有良好的应用前景.方法:筛选出氧化硫硫杆菌,其代表菌株TT03是细小杆状细菌,依据依据<伯杰氏细菌鉴定手册>第八版中分类,结合16S rDNA序列测定结果.结果:鉴定为嗜酸性氧化硫硫杆菌A.T(Acidithiobacillus thiooxidans).     

落羽杉属种类、栽培变种及杂种的外部形态变异及亲缘关系研究

根据树冠形状、针叶形状、脱落性小枝在侧枝上的排列与着生方式、针叶在脱落性小枝上的排列与着生方式、生长期叶色、秋冬叶色、干色、生长特性和是否结球果等9类定性指标以及脱落性小枝长度和宽度、针叶长度、叶夹角角度和脱落性小枝上每厘米的叶片数等5个定量指标,对27个落羽杉属(Taxodium Rich. )树种(包括种类、栽培变种及杂种)外部形态特征的变异状况进行了观察和比较,在此基础上进行了聚类分析,并根据外部形态特征编制了供试27个树种的检索表.研究结果表明,不同杂种的外部形态特征既综合了亲本的形态特征,也表现出一定程度的变异,其中,9类定性指标中,秋冬叶色和生长特性等指标变异较大,针叶形状及脱落性小枝在侧枝上的排列与着生方式等指标变异较小.27个树种的5个定量指标差异均极显著(P<0.01),脱落性小枝长度为4.68～11.19 cm、宽度为0.59～2.38 cm;针叶长度为0.84～1.84 cm;叶夹角的角度为24.1°～52.9°;脱落性小枝上每厘米的叶片数为6.3～16.0片.通过聚类分析可将27个树种分成5组:落羽杉[T. distichum (L. ) Rich. ]、墨西哥落羽杉(T. mucronatum Tenore)和中山杉9分别各自独立成组,池杉(T. ascendens Brongn. )、池杉栽培变种'Nutans'、中山杉91、中山杉102和中山杉401聚为一组;落羽杉栽培变种'Pendens'和'Fastigiata'、中山杉1、中山杉24、中山杉27、中山杉46、中山杉86、中山杉118、中山杉136、中山杉140、中山杉146、中山杉149、中山杉302、中山杉405、中山杉406、中山杉407、中山杉501、中山杉502以及中山杉503聚为一组.研究结果显示,基于外部形态变异的聚类分析结果能在一定程度上反映落羽杉属种类、栽培变种及杂种间的亲缘关系.     

山羊痘口服疫苗构建及其安全性、稳定性检测

目的:探索山羊痘新型疫苗.方法:将山羊痘病毒P32基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+),转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207(aroA-);重组菌以不同浓度灌暇小鼠进行安全性检测,同时进行稳定性检测.结果:重组减毒沙门氏菌质粒PCR鉴定与预期大小(986bp、1 134bp)一致,完成山羊痘口服疫苗构建;安全性试验结果表明除1010CFU剂量组小鼠呈现轻微反应外,其它组别小鼠均健康存活;体外连续培养10代菌能检测到目的基因,以109CFU剂量灌服小鼠,在第1d、第3d肠内容物和第5d脾脏中分离到重组菌.结论:成功构建了以减毒沙门氏菌为载体的山羊痘口服疫苗,且具有良好的安全性和稳定性,为山羊痘新型疫苗的进一步深入研究奠定了基础.