高赖氨酸蛋白基因在大肠埃希菌中的表达

从四棱豆中克隆高赖氨酸蛋白基因wblys,通过PCR扩增wblys片段,转入原核表达载体pGEX-4T-1,构建pGEX-4T-1/wblys大肠埃希菌工程菌,表达重组蛋白,IPTG诱导后,发现细菌全蛋白在44 ku(含GST标签)处多出1条明显条带。HPLC检测赖氨酸含量。诱导后菌体总赖氨酸含量比正常菌体提高15.84 mg/g。在大肠埃希菌中高效表达植物源高赖氨酸蛋白基因,为该基因在益生菌中表达提供研究工作基础。     

对马耳蕨光合作用对生境光强增加的响应

以林下阴生蕨类植物对马耳蕨为材料,采用盆栽试验比较了全光照和阴棚生境下对马耳蕨对强光的光合响应特征,以探讨其光适应机制.结果显示:(1)与荫棚条件下相比,全光照下对马耳蕨叶片叶绿素a(Chl a)、叶绿素b(Chl b)及叶绿素(a+b)[Chl(a+b)]含量分别显著下降了48.3%、28.2%、40.0%,而其类胡萝卜素(Car)和总黄酮含量分别显著增加了158.3%、93.9%;(2) 全光照下对马耳蕨叶片PSⅡ最大光能转化效率(Fv/Fm)、初始荧光(F0)、PSⅡ潜在活性(Fv/F0)、PSⅡ光能捕获效率(Fv′/Fm′)、光化学淬灭系数(qP)分别比荫棚的下降了3.7%、23.4%、9.5%、2.5%、3.2%;(3)随着光照强度的增加,全光照下对马耳蕨表观电子传递速率(rETR)及热耗散(qN)上升幅度较荫棚显著提高.研究发现,经过一定时期的光适应,通过减少对光能的捕获、降低PSⅡ反应中心活性及光能转化效率、提高光合能力、增强热耗散能力以及增强活性氧的清除能力,阴生植物对马耳蕨的光合作用可适应高光生境;在无水分胁迫条件下,全阳光照不会导致阴生植物对马耳蕨的光合作用发生光损害.     

Dkk-1在肿瘤中的研究进展

DKK-1是一种分泌型糖蛋白,通过结合细胞表面受体LRP5/6、Kremen1/2在Wnt通路中起负调控作用。Dkk-1的表达受p53、MYCN、β-catenin等基因调控。Dkk-1在细胞内的异位表达能抑制多种肿瘤细胞的增殖,但有时能在促凋亡因子存在时诱发凋亡。Dkk-1在一些肿瘤中低表达,而在另一些肿瘤中高表达。Dkk-1在不同肿瘤的发生、发展以及转移这几个阶段中的表达和功能表现出复杂多重的差异。该文就Dkk-1在肿瘤中表达和功能的研究进展作一综述。     

Ontogenetic variations in the venom proteome of the Amazonian snake Bothrops atrox

Background  

Bothrops atrox is responsible for the majority of snakebite accidents in the Brazilian Amazon region. Previous studies have demonstrated that the biological and pharmacological activities of B. atrox venom alter with the age of the animal. Here, we present a comparative proteome analysis of B. atrox venom collected from specimens of three different stages of maturation: juveniles, sub-adults and adults.     

米碎花的酚苷类化合物及其鼻咽癌细胞毒活性

为了解米碎花(Eurya chinensis)的化学成分及其生物活性,运用多种色谱技术从其乙醇提取物分离得到11个化合物,并对化合物进行体外抗鼻咽癌细胞增殖活性评价。经波谱数据分析,分别为异落新妇苷(1)、3,5,7-三羟基色原酮-3-O-α-L-鼠李糖苷(2)、1-O-反式-桂皮酰基-β-D-葡萄糖(3)、1-O-(4-羟基苯乙基)-6-O-反式-桂皮酰基-β-D-葡萄糖(4)、eutigoside D (5)、1-O-(3,4-二羟基苯乙基)-6-O-反式-香豆酰基-β-D-葡萄糖(6)、eutigoside A (7)、1-O-(4-羟基苯乙基)-6-O-反式-咖啡酰基-β-D-葡萄糖(8)、grayanoside A (9)、1-O-(4-羟基苯乙基)-6-O-(4-羟基苯甲酰基)-β-D-葡萄糖(10)、3-O-β-D-葡萄糖基-4-羟基-苄基苯甲酸酯(11)。其中,化合物4为首次从天然来源获得,化合物2～4和8～11均为首次从该属植物中分离得到。MTT法表明,化合物10具有中等抑制5-8F细胞增殖活性。     

醇母PHO81基因的克隆和表达

从酵母染色体ＤＮＡ中获得１个约３．０ｋｂ的ＢａｍＨＩ的克隆片段和１个约５．０ｋｂ的ＰｓｔＩ片段,前者包含１７４５ｂｐ的ＰＨＯ８１基因编码序列及１２４４ｂｐ的上游序列,后者包含２２３６ｂｐ的编码序列及约２．８ｋｂ的下游序列,经拼接得到完整的ＰＨＯ８１基因。以ＵＲＡ３基因取代部分ＰＨＯ８１的编码序列,通过体内同源重组,获得ＰＨＯ８１基因缺陷的酵母细胞株。构建ＰＨＯ８１－ＬａｃＺ融合基因,以β－半乳糖苷酶的活力表示ＰＨＯ８１基因的表达水平,研究了它的表达作用。ＰＨＯ８１基因为阻遏型表达,受无机磷浓度的控制,高磷使基因表达阻遏,低磷去阻遏。ＰＨＯ８１对其自身的表达有正调控作用,它与ＰＨＯ５和ＰＨＯ１１基因的调控模式相似,但ＰＨＯ８１上游调控序列和ＰＨＯ５及ＰＨＯ１１的同源性很低。     

The significance of controlled conditions in lentiviral vector titration and in the use of multiplicity of infection (MOI) for predicting gene transfer events

BACKGROUND: Although lentiviral vectors have been widely used for in vitro and in vivo gene therapy researches, there have been few studies systematically examining various conditions that may affect the determination of the number of viable vector particles in a vector preparation and the use of Multiplicity of Infection (MOI) as a parameter for the prediction of gene transfer events. METHODS: Lentiviral vectors encoding a marker gene were packaged and supernatants concentrated. The number of viable vector particles was determined by in vitro transduction and fluorescent microscopy and FACs analyses. Various factors that may affect the transduction process, such as vector inoculum volume, target cell number and type, vector decay, variable vector - target cell contact and adsorption periods were studied. MOI between 0-32 was assessed on commonly used cell lines as well as a new cell line. RESULTS: We demonstrated that the resulting values of lentiviral vector titre varied with changes of conditions in the transduction process, including inoculum volume of the vector, the type and number of target cells, vector stability and the length of period of the vector adsorption to target cells. Vector inoculum and the number of target cells determine the frequencies of gene transfer event, although not proportionally. Vector exposure time to target cells also influenced transduction results. Varying these parameters resulted in a greater than 50-fold differences in the vector titre from the same vector stock. Commonly used cell lines in vector titration were less sensitive to lentiviral vector-mediated gene transfer than a new cell line, FRL 19. Within 0-32 of MOI used transducing four different cell lines, the higher the MOI applied, the higher the efficiency of gene transfer obtained. CONCLUSION: Several variables in the transduction process affected in in vitro vector titration and resulted in vastly different values from the same vector stock, thus complicating the use of MOI for predicting gene transfer events. Commonly used target cell lines underestimated vector titre. However, within a certain range of MOI, it is possible that, if strictly controlled conditions are observed in the vector titration process, including the use of a sensitive cell line, such as FRL 19 for vector titration, lentivector-mediated gene transfer events could be predicted.     

武陵山地区种子植物区系特征与性质研究

武陵山地区位于湘鄂渝黔交界处,面积约10万km²。本文从科、属、种水平对武陵山地区种子植物区系特征和性质进行了统计分析,结果表明:(1)本区自产种子植物201科、1005属、4119种,其中裸子植物6科、19属、36种,双子叶植物166科781属、3447种,单子叶植物29科、205属、636种,含单种和少种的科和属及木本植物比较丰富;(2)本区含世界广布科40科,热带分布科91科,温带分布科70科。含种数较多的科为广布科和热带分布科,而主要特征科则是一些主产东亚(包括中国特有)的亚热带和温带分布科;(3)本区的属含我国15种分布区类型中的14种,其中以北温带分布、泛热带分布和东亚分布三类成分比较集中。中国特有属64属(占6.83%),其中不少可能就起源于本区(或)及其周围。温带分布属多于热带分布属;(4)种的地理成分有15种类型,其中绝大多数属东亚和中国特有,它们具有明显的亚热带-温带性质。中国特有种共计2682种,其中126种为本区所特有,675种为华中区特有,其他1881种则广泛分布于我国各地并大体上可分为10个亚型。种的地理成分决定了本区现代植物区系的基本特征和性质,即在旧的热带区系的基础上蜕化演变而成的温带性亚热带植物区系或亚热带山地植物区系。本区东亚成分众多,不仅是其分布中心的一部分,而且正处于东亚成分扩散和迁移的重要通道--武陵山走廊上,因此可视为东亚植物区系的一个关键地区。     

BOLD钉治疗桡骨小头骨折的临床疗效分析

目的:报告BOLD钉治疗Mason II型、未累及桡骨颈的Mason III型桡骨小头骨折的临床疗效。方法:自2009年3月至2012年2月对25例Mason II型,12例Mason III型桡骨小头骨折均采用切开复位BOLD钉内固定。结果:所有患者术后均获得随访12-24个月,平均随访14个月,肘关节功能评分:Mason II型平均分94分(88-98分),其中,优20例,良3例,可2例,差0例,优良率92%;Mason III型平均分91分(80-95分)其中,优9例,良1例,可2例,差0例,优良率83.3%。结论:BOLD钉治疗Mason II型及未累及桡骨颈的Mason III型桡骨小头有手术操作简单,固定稳定,允许早期活动等优点,可以作为这类骨折治疗的新选择。