基于CRISPR转录激活系统构建内源性着丝粒蛋白F稳定过表达的肝细胞癌细胞模型

临床研究表明着丝粒蛋白F(centromere protein F,CENPF)与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生相关。由于CENPF蛋白的分子量高达358 kDa,目前有关CENPF致癌机制研究使用的体内外模型主要基于CENPF表达敲低,尚缺乏将CENPF过表达以探究其与癌变因果关系的研究,CENPF过表达改变到底是“因”还是“果”仍不清楚。本研究旨在利用包括lentiMPHv2和lentiSAMv2两个载体的CRISPR/dCas9转录激活协同激活介体(synergistic activation mediator,SAM)系统构建内源性CENPF稳定过表达的细胞模型,为阐明CENPF过表达与HCC发生发展的因果关系提供有效工具。首先设计并合成能够特异性识别CENPF基因转录起始位点的单向导核糖核酸(single guide RNAs,sgRNA),并将其插入lentiSAMv2质粒中。利用慢病毒载体将lentiMPHv2质粒导入Huh-7和HCCLM3细胞株中,用潮霉素B筛选后再用慢病毒载体将连接好的携带sgRNA序列的lentiSAMv2质粒导入细胞中,并用杀稻瘟菌素S继续筛选。对2种抗生素筛选获得的Huh-7和HCCLM3细胞株样品进行CENPF mRNA和蛋白表达水平的检测,结果显示sgRNA1和sgRNA4序列均能够激活内源CENPF的表达,其中sgRNA4诱导转录效果更加明显。本研究利用CRISPR/dCas9系统成功构建内源性CENPF稳定过表达的HCC细胞模型,为研究CENPF过表达与肿瘤发生的因果关系奠定基础,并为构建大分子量蛋白过表达的细胞模型提供参考方案。     

小片断DNA电泳分离、转移和分子杂交的一个简单有效的方法

Southern DNA转移技术已广泛地应用于分子生物学研究。主要实验步骤如下:藉琼脂糖电泳将不同分子量的DNA片断分开,再将这些DNA片断从琼脂糖胶上原位转移到硝基纤维素滤膜上。在DNA混合物中,特定的     

基于稳定同位素技术的洈水水库鱼类群落营养结构

为调查山谷型水库的鱼类群落营养结构及其食物资源利用情况,基于碳(δ³C)、氮(δ¹⁵N)稳定同位素技术研究了湖北省洈水水库2020年夏季与秋季鱼类群落结构特征,并运用贝叶斯混合模型评价4种潜在碳源(颗粒有机物、陆生植物、周丛藻类和有机碎屑)对不同食性鱼类的贡献。结果表明:洈水水库鱼类群落的营养结构存在季节差异,鱼类群落的营养层次(NR)、基础食物来源(CR)、生态位总空间(TA)、群落的整体密度(NND)、聚集均匀程度(SDNND)和核心生态位空间(SEAc)等参数为夏季高于秋季,表明夏季食物源多样性高、营养冗余程度低、食物网结构更加复杂而稳定。洈水水库夏季和秋季鱼类均依赖外源性碳源,但两个季节的利用方式存在显著差异(P<0.05)。整体上,陆生植物在两个季节对洈水水库鱼类的碳源贡献最大,但夏季周丛藻类为次重要碳源,秋季有机碎屑为次重要碳源,颗粒有机物(POM)在两个季节均不重要。夏季和秋季对外源碳的依赖程度最高的鱼类均为黄尾鲴(碎屑食性鱼类),对外源碳的依赖程度最低的鱼类为鳙(滤食性鱼类)和团头鲂(植食性鱼类)。在夏季和秋季共有的9种...     

不同繁育器材对褐带卷蛾茧蜂繁育效果比较

为提高以大蜡螟为替代寄主繁育棕榈害虫红脉穗螟幼虫寄生蜂——褐带卷蛾茧蜂的增殖效果,比较了100目管、60目管、透明网盒、顶透瓶和透气离心管5种繁育器材对褐带卷蛾茧蜂的室内繁育效果。研究结果表明,供试的器材均可进行褐带卷蛾茧蜂的繁育,但繁育效果存在差异,其中60目管寄生效果较佳,表现在寄主被成功寄生率相对较高,平均达到80%,单头雌蜂产蜂数最高,平均为24.13头,被成功寄生的寄主单头出蜂率亦最高,为30.11头,其次为100目管、透明网盒、顶透瓶,而透气离心管饲养效果较差。     

微波加热时基托树脂收缩量的研究

目的,针对基托树脂固化的特性,探讨微波加热对树脂收缩量的影响。方法:采用四种常用基托树脂,分别采取单纯微波固化和微波加压固化聚合后,测定开盒后一周内树脂的聚合收缩情况。结果:两种固化方法收缩量均较小,适应性强。微波加压固化虽收缩量相对稍大但收缩均匀各树脂间无显著差异。结论:微波加热固化清洁高效,基托树脂结构致密,收缩量小,是今后树脂固化的一个发展方向。     

日本青萍6746的临界夜长及其花的发育过程

日本青萍6746是一种对短日很敏感的植物,为了进一步了解日照长度对它开花的影响,根据W.K.Purves的研究,我们进行了一些不同光周期的试验。并且观察了青萍6746经过短日诱导后花的发育过程。     

基于多色彩空间的YOLOv5松枯死树检测方法

【目的】针对在松枯死树监测实践中,从无人机航拍RGB影像中自动识别松枯死树漏检率高的问题,提出了一种生产应用场景下基于多色彩空间的YOLOv5松枯死树高精度自动识别新方法。【方法】利用无人机采集大面积松材线虫病发生林分的RGB图像,用Pix4Dmapper软件拼接,用LabelImg开源软件建立VOC格式的松枯死树数据集,分别用Faster R-CNN、YOLOv3、YOLOv4、YOLOv5、SSD和EfficientDet等6种基于深度学习的目标检测算法对数据集进行训练和测试,以精确率、召回率、平均准确率以及F₁分数作为评价指标筛选出最优目标检测算法;然后将采集的RGB图像转换成LAB和HSV色彩空间图像,再将这3个色彩空间的图像分别用最优目标检测算法进行训练,得到目标在每个色彩空间的边界框,使用非极大值抑制算法对这些边界框进行处理,得到最优边界框实现松枯死树自动识别。【结果】6种算法均取得良好效果,其中YOLOv5模型为最优算法,其精准率、平均查准率和F₁分数在6种算法中均最高,分别达到97.58%、82.40%和0.85。通过3个色彩空间融合后,反映漏检情况的召回率由74.54%提高到98.99%,平均准确率提升至98.39%。【结论】基于多色彩空间的YOLOv5模型能够显著提高从无人机航拍RGB影像中检测松枯死树的精度,为松枯死树监测提供了有力工具,也有助于松材线虫病的防治。     

红椿近成熟天然次生林直径分布

以红椿近成熟天然次生林林木直径的偏度、峰度为指标, 研究林木直径分布特征; 运用Gamma、Logistic、Normal、Lognormal和Weibull分布概率函数对红椿近成熟天然次生林直径分布进行拟合, χ2检验拟合效果, 筛选最优分布函数, 将林分特征与最优拟合函数参数回归, 获得预测拟合函数参数并建立预测函数。结果表明: (1) 红椿全部林分偏度SK>0, 平均峰度KT<0, 植株在8—16 cm径级阶段损失较大, 林分直径分布主要为左偏山状曲线, 即反“J”型曲线, 且曲线较为平坦; (2) Weibull分布函数和Logistic分布函数为最优直径分布函数, 接受率均为90.0%; (3)方差膨胀因子为6.002相似文献   

暹罗芽胞杆菌FJAT-45551用于农业生物防治的优化培养

以具有防病促长且抑菌谱广的暹罗芽胞杆菌(Bacillus siamensis)FJAT-45551为出发菌株,分别以生物量和发酵液的青枯雷尔氏菌和尖孢镰刀菌抑菌活性为指标,通过单因子和正交试验对其培养基成分和发酵培养条件进行优化,从而提高其抑菌活性。结果表明,优化后的培养基配方为:麸皮20 g/L,蛋白胨25 g/L,MgSO_4·H_2O 0. 2 g/L,CaCl_20. 1 g/L,FeSO_4·7H_2O 0. 1 g/L,NaH_2PO_4·H_2O 0. 5 g/L,K_2HPO_40. 5 g/L;最适发酵培养条件为:接种量1%、摇床转速130 r/min、温度20℃、装液量50 mL(250 mL的摇瓶装液50 mL)、初始pH值为6. 0。在优化的发酵条件下,FJAT-45551发酵液对番茄青枯病菌(Ralstorinia solanacearum)FJAT-91的抑菌圈直径达30. 82 mm,较优化前的抑菌圈直径增加了9. 09 mm,抑菌活性提高了41. 83%。