| 基于CRISPR转录激活系统构建内源性着丝粒蛋白F稳定过表达的肝细胞癌细胞模型 |
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| 引用本文： | 齐赛平,李潇瑾,周冬虎,黄坚.基于CRISPR转录激活系统构建内源性着丝粒蛋白F稳定过表达的肝细胞癌细胞模型[J].生物工程学报,2023,39(9):3738-3746. |
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| 作者姓名： | 齐赛平 李潇瑾 周冬虎 黄坚 |
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| 作者单位： | 首都医科大学附属北京友谊医院 北京市临床医学研究所, 北京 100050 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81602032，81071973)；国家科技重大专项课题(2017ZX10201201007002) |
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| 摘 要： | 临床研究表明着丝粒蛋白F(centromere protein F,CENPF)与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生相关。由于CENPF蛋白的分子量高达358 kDa,目前有关CENPF致癌机制研究使用的体内外模型主要基于CENPF表达敲低,尚缺乏将CENPF过表达以探究其与癌变因果关系的研究,CENPF过表达改变到底是“因”还是“果”仍不清楚。本研究旨在利用包括lentiMPHv2和lentiSAMv2两个载体的CRISPR/dCas9转录激活协同激活介体(synergistic activation mediator,SAM)系统构建内源性CENPF稳定过表达的细胞模型,为阐明CENPF过表达与HCC发生发展的因果关系提供有效工具。首先设计并合成能够特异性识别CENPF基因转录起始位点的单向导核糖核酸(single guide RNAs,sgRNA),并将其插入lentiSAMv2质粒中。利用慢病毒载体将lentiMPHv2质粒导入Huh-7和HCCLM3细胞株中,用潮霉素B筛选后再用慢病毒载体将连接好的携带sgRNA序列的lentiSAMv2质粒导入细胞中,并用杀稻瘟菌素S继续筛选。对2种抗生素筛选获得的Huh-7和HCCLM3细胞株样品进行CENPF mRNA和蛋白表达水平的检测,结果显示sgRNA1和sgRNA4序列均能够激活内源CENPF的表达,其中sgRNA4诱导转录效果更加明显。本研究利用CRISPR/dCas9系统成功构建内源性CENPF稳定过表达的HCC细胞模型,为研究CENPF过表达与肿瘤发生的因果关系奠定基础,并为构建大分子量蛋白过表达的细胞模型提供参考方案。
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| 关 键 词： | CRISPR/dCas9系统 稳定过表达 内源性着丝粒蛋白F 肝细胞癌 |
| 收稿时间： | 2022/8/18 0:00:00 |
Construction of a stable centromere protein F overexpression cell model of hepatocellular carcinoma using CRISPR activation system |
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| QI Saiping,LI Xiaojin,ZHOU Donghu,HUANG Jian.Construction of a stable centromere protein F overexpression cell model of hepatocellular carcinoma using CRISPR activation system[J].Chinese Journal of Biotechnology,2023,39(9):3738-3746. |
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| Authors: | QI Saiping LI Xiaojin ZHOU Donghu HUANG Jian |
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| Institution: | Beijing Institute of Clinical Medicine, Beijing Friendship Hospital, Capital Medical University, Beijing 100050, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | CRISPR/dCas9 system stable overexpression endogenous centromere protein F hepatocellular carcinoma |
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