血红素与异咯嗪单核苷酸的分子络合物

血红素与FMN反应后的差光谱在500mμ—800mμ范围内有三个差吸收峰,波长分别为525mμ,610mμ及685mμ。用所谓连续变易法作图结果表明反应产物包括:血红素比FMN等于1:1,1:2及1:4等三种络合物,结合紧密程度依次降低。老化血红素与FMN反应只能产生1:1的络合物,表现出一个差吸收峰(585mμ)在过量连二亚硫酸钠存在下差光谱形状略为不同,血红素及FMN皆为全还原型时,络合物络合能力降低一个数量级。在隔绝空气的条件下逐步加入还原剂可以观察到在二者未完全还原前可能尚有其他络合物的生成。无论血红素是否经过老化它与FMN络合生成的产物差光谱皆受溶液离子强度的影响。对血红素与FMN络合的物质进行了讨论,所生成的某些络合物很可能是属于所谓电荷转移形式。这两种生物氧化中重要辅基如生成电荷转移络合物,可能与呼吸链中的电子传递有密切关系。     

胰岛素及其苄基衍生物在钠-氨系统中的还原及活力恢复

(1)应用三种不同的方法制得了胰岛素苄基衍生物。胰岛素如果用钠-氨还原再与氯化苄作用,可以得到不再有完整二硫键存在的充分苄基化的产物。(2)将胰岛素、S-磺酸型A及B链混合物或者胰岛素苄基衍生物,在钠-氨内还原,然后在稀碱溶液中重氧化,都可以使胰岛素活力再生。用胰岛素或S-B磺酸型A及B链混合物时,经过此处理则活力可以恢复5—10%。用胰岛素苄基衍生物时则一般活力恢复1—2%。(3)从充分苄基化了的胰岛素衍生物能恢复活力这一事实说明可以通过人工合成的A和B链最后合成胰岛素。(4)观察了A和B键混合物巯基氧化和活力再生的过程,并进行了讨论。     

鸡肝二氢叶酸还原酶在盐酸胍溶液中构象的序变与激活

用蛋白质内源荧光、疏水荧光探针TNS及蛋白酶K限制性酶解等方法研究了二氢叶酸还原酶在盐酸胍变性过程中的构象变化及动力学,并与活力变化进行了比较.TNS可以监测到与激活同步的构象变化;盐酸胍浓度大于0.75mol/L时,二氢叶酸还原酶被蛋白酶K水解速度增大;当盐酸胍浓度大于1.2mol/L时,才能监测到酶分子整体构象的变化.以上结果表明二氢叶酸还原酶在盐酸胍溶液中的变性并不符合标准的二态模型,而是先经历构象逐步松散的序变过程,然后发生协同的构象伸展.二氢叶酸还原酶在低浓度盐酸胍溶液中的激活是由于酶活性部位构象的微小变化引起的.酶活性部位构象的变化虽然降低了酶与废物的结合能力,但加快了酶促反应限速步骤,即底物解离速度而使酶活力升高.     

兔肌甘油醛-3-磷酸脱氢酶中NAD~ 类似物对碘乙酸修饰作用及酶促乙酰磷酸水解作用的影响

碘乙酸修饰兔肌甘油醛-3-磷酸脱氢酶蛋白过程中,以NAD~ 类似物代替NAD~ 测定它们对酶蛋白失活速度的影响。在被测的五个NAD~ 类似物中CPAD~ ,FPAD~ 对酶有保护作用,降低了酶因修饰而失活的速度。其它三个类似物NGD~ ,APAD~ 和TPAD~ 在不同程度上加速碘乙酸引起的失活。这些类似物在对碘乙酸修饰速度造成影响方面表现的能力与它们作为氢受体能力相一致。以NAD~ 类似物代替NAD~ 测定它们对酶促乙酰磷酸水解作用的影响。与碘乙酸修饰时有些不同,CPAD~ ,TPAD~ 对这一水解过程无促进作用,而FPAD~ ,NGD~ 和APAD~ 有促进作用。各类似物的行为与羧甲基酶光照形成新萤光团过程中各类似物的行为相一致。     

NADP~ 在兔肌甘油醛3-磷酸脱氢酶中作为氢受体的活力

兔肌甘油醛-3-磷酸脱氢酶以NADP~ 作氢受体时,有极轻微的活力,实验表明它不是由于所用NADP~ 试剂中含有NAD~ 或酶制剂中含有磷酸酯酶、转氢酶等造成的干扰。采用高浓度酶对纯化后的NADP~ 测定结果是:NADP~ 作为氢受体的活力仅及NAD~ 的二百分之一。米氏常数K_m为700μm。NADP~ 对NAD~ 的还原无明显抑制作用。不同来源的甘油醛-3-磷酸脱氢酶对辅酶专一性程度有差别,酵母酶的专一性较兔肌酶为高:NADP~ 作为氢受体的活力仅为NAD~ 的千分之一。     

木瓜蛋白酶的研究——Ⅲ.组氨酸及色氨酸残基为木瓜蛋白酶表现催化活性的必需基团

(一)木瓜蛋白酶在甲烯蓝存在时照光数分钟活力即显著下降,光氧化过程中組氨酸及色氨酸的破坏和活力的下降均按一級反应进行。組氨酸和色氨酸破坏的一級反应常数之和恰等于活力下降的一級反应常数。过程中酪氨酸及二硫鍵含量无显著变化。(二)NBS作用于木瓜蛋白酶引起的色氨酸殘基的破坏与活力的下降完全一致。(三)根据光氧化及NBS的作用过程中木瓜蛋白酶活力下降与組氨酸及色氨酸破坏的定量关系,可以认为木瓜蛋白酶的必需基团中包含一个組氨酸及一个色氨酸殘基。     

木瓜蛋白酶的研究 Ⅱ.转酰基作用

本文提供以茚三酮法测受体α-氨基减少的方法以测定转肽反应。木瓜蛋白酶于50%甲醇,pH7.4左右条件下以CbZ-甘-NH_2,Cbz-白-NH_2及Cbz-丝-NH_2为供体,以甘-OEt为受体几乎只进行转肽作用而无供体本身的水解,但在30%丙酮溶液中却以水解反应为主。半胱氨酸、谷胱甘肽、氰化物、亚硫酸盐、[2,3]-二巯基丙醇及巯基乙酸皆可促进木瓜蛋白酶的转肽作用,但高浓度的[2,3]-二巯基丙醇及巯基乙酸与其他还原剂不同对转肽有抑制作用。转肽与水解的专一性不完全相同,如以Cbz-甘-NH_2,Cbz-丝-NH_2及Cbz-白-NH_2做供体时,几乎只进行转肽而无供体水解,但以Bz-精-NH_2及Cbz-谷NH_2-NH_2为供体时都无转肽作用。受体以氨基酸或肽的酯或酰胺为最好,酪氨酸乙酯不能做为转肽反应的受体。以Cbz-甘-NH_2,甘-OEt为供受体时底物浓度对反应速度的影响指出,受体与酶的结合远较供体紧密。甘-OEt的存在使木瓜蛋白酶于250mμ处光吸收有显著降低,并且对木瓜蛋白酶于甲醇溶液中的失活具有保护作用,说明受体与酶系专一性的结合。对本文实验结果的意义进行了讨论。     

蛋白质工程及其展望

一、蛋白质工程的产生及主要内容 人们在研究蛋白质结构与功能关系时,通常通过造成结构上的改变然后观测相应功能的改变,以弄清某一功能的结构基础,从而达到创造具有某些有经济效益的新性质的蛋白质。