酵母菌过氧化氢酶的含量与辐射损伤的关系

酵母菌Saccharomyces cerevisiae菌株2.23对于有氧适应比较敏感,有氧菌和欠氧菌的过氧化氢酶活力比值较大,而菌株2.559在有氧适应前后酶活的比值较小,经受X射线照射后,这两个菌株的有氧菌和欠氧菌存活率比值相接近,与酶活的比值并无相应的比例关系。用羟胺抑制菌株2.23或2.559的有氧菌和欠氧菌的过氧化氢酶活力80—90%后,进行照射,和不加抑制剂的比较,存活率并无变动。从以上结果看来酵母菌的耐辐射能力与其过氧化氢酶含量似并无直接关系。     

胰蛋白酶在尿素溶液中失活与复活的动力学

胰蛋白酶的尿素差示光谱在292、286和236mμ有三个负的差吸收峯,和在260mμ范围有一较为平坦的正峯。在变性过程和恢复过程中伴随着活力的丧失和恢复都有差吸收的变化。变性过程差吸收的变化略快于活力的变化,而恢复过程活力的变化又快于差吸收的变化。变性过程可以分解为两个一级反应,仅其中较慢的反应与活力的变化一致,另一反应则与活力无关。底物对甲苯磺酰精氨酸甲酯,对变性过程差吸收和活力变化都有保护作用。由以上结果看来,胰蛋白酶表现其活力并不要求整个酶分子具有完整的空间构型并且它们的活性中心部分的空间构型是较为稳定的。此外本文还研究和计算了变性与恢复过程的热力学常数,并且对它们进行了讨论。     

蛋白质功能基团的改变与其生物活力的关系 Ⅱ.胰蛋白酶的必需硫硫键数目

在防止硫硫鍵交換的条件下,用亚硫酸鈉作用于胰蛋白酶的硫硫鍵,于测定硫硫鍵破坏数目的同时,以血紅蛋白、苯甲酰精氨酰胺,对甲苯磺酰精氨酰甲酯測定剩余酶活力的結果用前文提出的判断方法作图表明胰蛋白酶六个硫硫鍵中的三个是必需的。     

木瓜蛋白酶的研究 Ⅵ.白氨酰胺的聚合作用

木瓜蛋白酶于pH7在半胱氨酸存在下能催化白氨酰胺生成聚白氨酸,聚合物分子量約为1,200,过程中只有聚合作用并无白氨酰胺的水解。当反应系統中同时有苯丙氨酸甲酯存在时則生成白氨酸与苯丙氨酸之比为1∶1的,分子量約为1,400的共聚物。虽然从酶制剂的均一性,离子交換柱层析时活力的平行分布以及溴代乙酸的抑制看来,轉酰基反应和水解反应一样都是由木瓜蛋白酶所催化的,但根据白氨酰胺与苯甲酰精氨酰胺同时存在时的总反应速度为二者在相同条件下分別作用速度之和,催化白氨酰胺聚合的pK_b为5.3与苯甲酰精氨酰胺水解的pK_b值(3.3)显著不同,以及N-溴代琥珀酰亚胺对水解和聚合作用的影响也不相同等看来,木瓜蛋白酶催化水解与聚合作用的活性中心很可能不完全相同。     

从胰岛素A及B链重合成胰岛素

(1)用亚硫酸盐及四硫硫酸盐将胰岛素的硫-硫键拆成S-磺酸基后,再经过离子交换或板型电泳分离,可以得到纯的A及B链。(2)用小白鼠惊厥法检查,S-磺酸型A及B链都不具有生物活力。用过量巯基乙酸将纯的A或B链的S-磺酸基还原为巯基,然后分别将还原型的A或B链溶液(pH 8.5)单独在空气中氧化也不产生活力。但将还原型A及B链混合,在同样条件下氧化时,可以获得有活力的产物。活力一般恢复到原活力的5-10%左右。(3)用还原型的A或B链分别与S-磺酸型的B或A链共同保温都可以得到有活力的产物。(4)将恢复活力的重氧化产物进行提纯的结果得到比活力为每毫克18.4国际单位的结晶。这样所获得的晶体其结晶形状、降血糖性质、电泳性质以及在三种溶剂系统中的比移都和结晶胰岛素相同。(5)以上晶体和结晶胰岛素的胃蛋白酶酶解图谱也基本上相同。     

血红素对一些黄酶的抑制作用

血红素对一些黄酶都具有强烈的抑制作用,并且血红素过老化以后对一些黄酶活力的抑制程度因受体不同而有显著差别。在相同的抑制剂浓度下,心肌制剂琥珀酸及NADH氧化酶系中以氧气、细胞色素c和PMS为受体时的活力没有影响,但对以正铁氰化钾、DGPIP和细胞色素b为受体时的活力则有明显抑制。对水溶性琥珀酸脱氢酶、黄递酶和NADH-细胞色素c还原酶以不同受体进行反应时的抑制情况也与上述结果相似,说明抑制作用点直接与琥珀酸脱氢酶及NADH脱氢酶有关。老化血红素对黄嘌呤氧化酶的抑制作用不同,它不影响DCPIP为受体时的活力而却抑制细胞色素c的还原。老化血红素对胆硷氧化酶系及α-甘油磷酸氧化酶系的抑制行为与NADH及琥珀酸氧化酶系相似,看来胆硷和α-甘油磷酸脱氢酶可能也都是黄酶。老化血红素对以上黄酶的抑制都是可逆的,并且从检查6个酶系的结果知道这些抑制皆属竞争性类型。     

蛋白质功能基团的改变与其生物活力之间的定量关系

蛋白质(包括酶)分子结构与功能的关系一直是分子生物学的核心问题之一.用各种方法改变蛋白质分子中侧链基团的性质观察对其生物活力的影响是研究这一问题的主要方法.蛋白质化学修饰的研究,迄今已有约60年的历史.自20年代末到60年代初的30余年内,这一研究一直停留在定性描述阶段,大量的实验结果不能进行定量的数据处理.因为在蛋白质分子中某类侧链基团在功能上虽有必需与非必需之分,但是在与某试剂起反应上往往是相同的,即它们都能与某一试剂起反应.所以,虽然从实验上可以测得随侧链基团的被修饰导致其生物活力下降的关系,但是在所测得的被修饰的基团中,既有必需的,也有非必需的.由于长期以来人们没有找到生物活力与必需基团之间的定量关系,也就无     

酵母羧甲基化及光照甘油醛-3-磷酸脱氢酶在碘化钾溶液中荧光发色团的形成

CM-GAPDH在碘化钾溶液中,NAD~+的存在下,形成发射波长为383nm的荧光物。对照的NAD~+与碘化钾溶液混合不产生荧光物。全位及半位修饰光照酶的内源荧光在碘化钾溶液中的变化与天然酶的有明显不同。两者在碘化钾中都形成383nm的荧光,但全位修饰光照酶形成383nm荧光的最适碘化钾浓度为1.0M;半位修饰的为0.8M。以上结果暗示:383nm荧光物的形成需要GAPDH和NAD~+同时存在,并且与活性部位巯基修饰的多少有关,该荧光物可能位于GAPDH的活性部位。