登革病毒包膜蛋白的原核表达及免疫原性研究

登革病毒感染引起的登革热和登革出血热/登革休克综合征是目前流行最为广泛的虫媒病毒病,但其发病机制不明,也无疫苗和特异性抗病毒药物用于防治。登革病毒包膜蛋白(E蛋白)在病毒致病和免疫过程中发挥重要作用。本研究构建了登革病毒2型E蛋白基因的重组质粒E/pGEX-6P-1,并优化表达条件,获得登革病毒E蛋白的高效可溶性表达;用谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B亲和层析柱纯化,获得纯度较高的蛋白。该蛋白具有较好的免疫原性,免疫小鼠后可获得高效价抗体。本研究为进一步了解登革病毒E蛋白的功能及其在相关疾病中的应用奠定了基础。     

血清同型半胱氨酸及尿酸水平检测对冠心病的临床价值研究

目的:探讨血清同型半胱氨酸(Hcy)和尿酸(UA)水平检测对冠心病的临床价值。方法:选择经冠状动脉造影确诊为冠心病的182例患者,分为以下3组,稳定型心绞痛(SAP)组78例,不稳定型心绞痛(UAP)组56例,急性心肌梗死(AMI)组48例。另外,随机选择单纯性高血压患者60例作为对照组,比较各组血清Hcy和UA水平并分析二者与各临床类型冠心病之间的关系。结果:⑴冠心病组的血清Hcy和UA水平明显高于单纯性高血压组(P0.05);⑵AMI组的血清Hcy和UA水平均明显高于UAP组和SAP组(P0.05);⑶Spearman相关分析显示:在AMl组中血清Hcy和UA水平呈高度正相关(P0.01);⑷Logistic风险回归显示:血清Hcy和血清UA升高是冠心病的危险因素(P0.05),而血清Hcy升高是急性心肌梗死的独立危险因素(P0.05)。结论:高Hcy与高UA血症是冠心病发病的重要危险因素,联合监测二者对预防冠心病尤其是急性心肌梗死具有重要的临床意义。     

尿培养中病原菌分布及耐药性分析

目的研究大连市中心医院2007年1月至2012年9月尿培养中常见病原菌（真菌除外）的分布及其耐药性,为临床治疗尿路感染提供诊断及用药依据。方法采用MicroScan—Walkaway40全自动微生物鉴定药敏分析仪和ATBExpression自动细菌鉴定仪及K—B纸片法药敏试验,应用WHONET5．4软件对结果进行回顾性统计分析。结果五年间尿培养中共分离出病原菌1012株（真菌除外）,其中革兰阴性菌802株（79．2％）,主要是大肠埃希菌538株（53．2％）、肺炎克雷伯菌95株（9．5％）、铜绿假单胞菌51株（5．1％）、奇异变形杆菌30株（2．9％）、鲍曼不动杆菌26株（2．6％）。革兰阳性菌210株（20．8％）,主要是粪肠球菌86株（8．6％）,屎肠球菌83株（8．2％）,凝固酶阴性葡萄球菌21株（2．1％）,金黄色葡萄球菌13株（1．3％）。抗生素敏感试验中碳青霉烯类（亚胺培南及美洛培南）对肠杆菌科细菌大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及奇异变形杆菌抗菌活性最强,无耐药菌株,对非发酵菌中铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌耐药率为30％～40％,革兰阳性菌对糖肽类（万古霉素、替考拉宁）和利奈唑胺等抗菌药物高度敏感。结论应当根据主要易感菌种类及其抗生素敏感试验结果指导临床合理使用抗生素。     

CRISPR/Cas9技术编辑MPK7和MPK14基因创制抗穗发芽水稻新种质

穗发芽对籼稻生产危害严重.编辑休眠调控基因,创制高休眠性新种质,进而提高穗发芽抗性,是探索改良穗发芽抗性的新途径.泰丰B(TB)是籼型优质杂交稻保持系,主要缺点是种子休眠性偏低,易受穗发芽危害.MPK7/14具有抑制粳稻种子休眠作用,尚不清楚是否适用于籼稻品种.本研究利用CRISPR/Cas9技术编辑泰丰B(TB)的M...     

水稻淹水萌发对低氧胁迫的适应及其机制研究进展

水稻是我国最重要的粮食作物之一,水稻生产是国家粮食安全的重要保障。传统移栽种植模式对我国的水稻增产、农民增收、农业发展起到了重要作用。但随着社会经济发展和产业要素变革,农村劳动力大幅减少,迫切需求轻简化的生产方式。水稻淹水直播能节省劳力、节约资源、有效降低杂草危害,是一种高效、经济和节约型的轻简栽培模式,在当前有较高的推广价值。淹水萌发时低氧胁迫造成的出苗率低是阻碍水稻淹水直播的首要因素,丰富的水稻种质资源中存在耐淹水萌发优异资源和基因,挖掘和利用这些优异资源和基因并培育适宜淹水直播的水稻新品种,是突破目前直播稻推广和应用瓶颈的关键。本文围绕水稻淹水萌发的生理特点、鉴定评价方法、优异种质鉴定、遗传规律、响应机制研究以及功能基因的育种应用等方面的研究进展进行综述,以期为水稻耐淹水萌发的机制研究和萌发耐淹品种的选育提供参考。     

植物异黄酮合酶研究进展

植物异黄酮是一类具有增强植物抗病、诱导根瘤形成以及预防激素相关肿瘤发生、缓解女性更年期综合症的活性次生代谢产物,其合成关键酶是异黄酮合酶(IFS)。介绍了IFS的催化机理、基因克隆与表达调控的研究进展,讨论了开展IFS代谢工程研究对提高植物抗病虫害能力和改善农作物营养保健功效的意义。     

低氧对CD34~ 造血干/祖细胞增殖分化及其对细胞因子依赖性的影响

采用免疫磁珠法分离脐血CD34 造血干 /祖细胞 ,进行低氧和常氧条件下单个核细胞 (MNC)及CD34 细胞的半固体及液体培养 ,计细胞总数和集落产率 ,并通过流式细胞仪检测细胞表型和细胞周期 ,以探讨造血干/祖细胞在低氧环境下增殖分化性能的改变及其对细胞因子反应性的变化。结果显示 :CD34 细胞在低氧条件下生成的BFU E集落数 ( 32 4 8± 41 4/10 4 细胞 )明显增多 (对照为 191 2± 34 5 /10 4 细胞 ,P <0 0 1) ;在无细胞因子存在的液体培养体系中 ,低氧组的BFU E产率 ( 15 2 4± 2 2 6 /10 4 细胞 )明显高于常氧组 ( 74 2± 9 3/10 4 细胞 ,P <0 0 1) ;低氧培养细胞中CD34 细胞的比例高于对照 2 5± 1 2倍 (P <0 0 5 )。但MNC生成的BFU E在常氧和低氧条件下无显著差异。这些结果表明 :体外低氧环境能显著增加CD34 造血干 /祖细胞形成红系祖细胞的产率 ,且使其对细胞因子的依赖性降低 ,并对早期红系祖细胞的维持有增强作用 ,但对粒系祖细胞的增殖则有抑制作用     

重组人FLT3配体的克隆、表达及功能鉴定

通过克隆人FLT3配体(rhFL)基因,建立其原核高效表达系统,为大规模获得rhFL产品,促进干细胞体外扩增移植等新技术在临床的应用创造条件。分离人外周血单个核细胞,提取总RNA,采用RT-巢式PCR扩增可溶型FL基因,以双脱氧终止法进行DNA序列分析;将目的基因与pProEXHT载体连接,重组体引入大肠杆菌并在IPTG诱导下表达;亲和层析纯化表达产物,观察其刺激CD34⁺细胞增殖的情况。从人外周血单核细胞中克隆得到长481bp的rhFL基因,测序结果与已知人FL基因序列一致;rhFL的表达量约占菌体蛋白总量的15%,经亲和纯化纯度达90%以上;rhFL⁺G-CSF⁺EPO刺激CD34^＋细胞增殖约400倍。获得了rhFL基因及其在大肠杆菌中的高效表达,初步建立了产物纯化途径,纯化后的rhFL具有较强的刺激造血干/祖细胞增殖的能力。     

乳酸菌素治疗HBV感染与肠源性内毒素血症的临床观察

目的 研究慢性肝病的内毒素血症发生率以及乳酸菌素治疗的效果。方法 用鲎试验（ＬＬＴ）检测。结果 检测１１７例临床各类型慢性肝病的肠源性内毒素血症阳性率,结果为４０％～８０％,以重症肝炎最高。内毒素与肿瘤坏死因子互为因果对肝病发生发展产生重要影响。检测结果显示慢性肝病ＬＬＴ阳性病人ＴＮＦ－α较ＬＬＴ阴性及正常人明显提高,差别有显著性（Ｐ〈０．０５）,应用乳酸菌素治疗肝病肠源性内毒血症３０例,鲎试验转阴率为７０．６％,显著高于对照组的６．６％,Ｐ〈０．０１。结论 乳酸菌素可作为肝病的辅助治疗的有效药物之一。     

腺相关病毒与人多药耐药基因重组载体的构建及在NIH3T3细胞中的表达

腺相关病毒 (adeno- associated virus,AAV)属细小病毒科 ,是一种最小的动物病毒 .具有其他病毒载体所没有的优点 ,在基因治疗中日益受到瞩目 .以 AAV的一种多克隆载体为基础 ,构建了携带 MDR1基因的重组腺相关病毒载体 (r AAV- MDR1 ) ,经 2 93细胞包装成重组病毒 .将重组质粒、重组病毒分别转染和感染 NIH3T3细胞 ,用 PCR和 MTT法检测了人 MDR1基因的转导及表达 .为 MDR1基因用于临床和腺相关病毒载体在基因治疗中的应用提供了依据