寡核苷酸DNA Microarray用于HLA DRB1基因分型的研究

对寡核苷酸DNA Microarray用于HLA DRB1基因分型的技术进行研究。常规的酚/氯仿法提取标准血样基因组DNA,在DRB1的exon2区域设计一对引物,经PCR扩增基因组相应区段并用Cy5-dCTP进行标记。设计寡核苷酸分型探针,将探针固定在APS-PDC法制作的DNA Microarray上,用标记的PCR产物与之杂交,扫描仪对杂交效果进行扫描,Imagene软件对杂交图像进行分析。共检测了33例标准血样的HLA DRB1基因型。检测结果证明研制的DNA Microarray准确、灵敏。DNA Microarray技术可以有效地检测DRB1等位基因,对比常规的PCR-SSP和PCR-SSO方法、分型基因芯片方法更为直观,并有集成化优势。     

一个耐热碱性磷酸酯酶突变型的研究

为了进一步揭示蛋白质的耐热机制,对含有耐热碱性磷酸酯酶（ＦＤ－ＴＡＰ）的表达质粒ｐＴＡＰ５０３Ｆ进行了随机诱变,用菌落原位显色法从约５０００个转化子中筛选到４个耐热性下降的突变型克隆,并对其中１克隆（ＴＡＰＭ３）进行了部分酶学性质、ＤＮＡ和氨基酸序列的研究。酶学性质研究表明,与野生型相比,该突变型酶的耐热性有较大幅度的下降,而热激活性无明显改变。ＤＮＡ序列分析表明在１２３９位ＴＡＰＭ３发生Ｇ→Ａ转     

用基因表达谱芯片研究人正常肝和肝细胞癌中差异表达的基因

以基因表达谱芯片对人正常肝及肝癌组织基因表达的差异性进行了研究比较。奖４０９６条人ｃＤＮＡ用点样仪点在特制玻片上制备成表达谱芯片;利用肝和肝癌组织的ｍＲＮＡ通过逆转录方法,将Ｃｙ３和Ｃｙ５２种荧光分别标记到两种组织的ｃＤＮＡ上,制备成ｃＤＮＡ探针,并与表达谱芯片进行杂交及扫描,重复４次实验,通过计算机数据处理判定基因是否在上述２种组织中有表达差异,筛选出差异表达的基因共９０３条。基因芯片技术可同时     

人胎儿脑的一个cDNA编码序列及其蛋白质预测

用 m RNA差异显示 PCR技术 ,从人 1 8周、2 2周胎儿脑和肝肾组织的 m RNA逆转录产物得到一些特异性显示的片段 .其中一个随机片段 GC1 0 2作为探针 ,从本实验室构建的 1 8周胎儿脑c DNA基因文库进行杂交筛选 ,得到一个阳性克隆λ gt1 0 /GC1 0 2 .该克隆内插入的 c DNA片段长2 .9kb,经过 DNA测序 ,显示具有一个开放阅读框架 ,编码 1 37个氨基酸的肽链 .用蛋白质结构的建模软件预测了该肽链的立体结构初步模型 .     

用差异显示法从人胎脑基因文库分离一个编码序列

人１８周、２２周胎儿脑、肝肾组织总ｍ ＲＮＡ 用ＤＤＲＴ－ＰＣＲ显示出差异的条带,回收胎脑和肝肾特异性表达的４８７条电泳条带．其中某些条带用３种组织的ｃＤＮＡ 探针作点杂交,筛选只对胎儿脑总呈阳性的ＤＮＡ 片段．以其中某一条带ＤＮＡ 为探针,从胎儿脑ｃＤＮＡ 文库筛选阳性克隆,得到ＧＣ５８．经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交和ＤＮＡ 测序,表明它是人脑表达的序列,与数据库中ＫＩＡＡ０５１５有同源性,并编码一个有２７４个氨基酸的蛋白质,该蛋白质序列尚未见报道．探讨了ＤＤＲＴ－ＰＣＲ的条件和假阳性问题．