人组氨酸磷酸酶PHP14的原核表达及其体外互作蛋白的研究

目的:表达和纯化人组氨酸磷酸酶PHP14蛋白,并寻找与其存在体外相互作用的蛋白。方法:PCR扩增PHP14的全长cDNA,并将其克隆至pGEX4T原核表达载体,构建重组表达质粒。用重组表达质粒转化大肠杆菌BL21菌株,经IPTG诱导后,使用Glutathione Sepharose 4B凝胶颗粒进行亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳确定融合蛋白的表达。进行GST-Pulldown实验,寻找体外与PHP14相互作用的蛋白,并进行质谱鉴定。结果:在大肠杆菌BL21中成功了表达出了PHP14的可溶性融合蛋白;经Glutathione Sepharose4B凝胶颗粒纯化后,获得了纯化的GST-PHP14融合蛋白,GST-Pulldown实验和质谱鉴定结果发现PHP14与HSP90在体外存在相互作用。结论:实现了PHP14的原核表达和纯化,发现PHP14与HSP90在体外可能存在相互作用。     

Proteomic approaches to biomarker discovery in lung cancers by SELDI technology

The purpose of the present work is to identify protein profiles that could be used to discover specific biomarkers in serum and discriminate lung cancer. Thirty serum samples from patients with lung cancer (15 cases of primary brochogenic carcinoma, 9 cases of metastasis lung cancer and 6 cases of lung cancer after chemotherapy) and twelve from healthy individuals were analyzed by SELDI (Surfaced Enhanced Laser Desorption/Ionization) technology. Anion-exchange columns were used to fractionate the sera with 6 designated pH washing solutions. Two types of protein chip arrays, IMAC-Cu and WCX2, were employed. Protein chips were examined in PBSII ProteinChip Reader (Ciphergen Biosystems Inc.) and the resulting profiles between cancer and normal were analyzed with Biomarker Wizard System. In total, 15 potential lung cancer biomarkers, of which 6 were up-regulated and 9 were down-regulated, were discovered in the serum samples from patients with lung cancer. 5 of 15 these biomarkers were able to be detected on both WCX2 and IMAC-Cu protein chips. The sensitivities provided by the individual markers range from 44.8% to 93.1% and the specificities were 85.0%–94.4%. Our results suggest that serum is a capable resource for detection of lung cancer with specific biomarkers. Moreover, protein chip array system was shown to be a useful tool for identification, as well as detection of disease biomarkers in sera.     

增强p53、p21及抑制c—myc表达对MCF-7细胞增殖的协同抑制作用

为了探讨增强p53、p21基因表达水平和降低c—myc基因表达水平对乳腺癌细胞MCF-7．增殖的协同抑制作用,以及这些基因对细胞产生效应时的相互关系,本研究中首先构建了正义的p53、p21和反义的c—myc 3种真核细胞表达载体,并根据析因实验设计三种载体不同剂量组合。按照组合用质粒转染细胞,然后对转染细胞的增殖抑制率进行检测,并采用金正均Q值法、单因素方差分析中的LSD法、聚类分析法等统计学方法对结果进行统计分析。结果显示,不同量的p53、p21反义c—myc对MCF-7细胞的增殖均有抑制作用,抑制的程度各基因间存在差异。在各基因组合中,p21与反义c—myc,p53与反义c—myc联用具有协同作用,对MCF-7细胞的增殖产生更强的抑制,而p53与p21之间未显示出协同作用。对三基因协同结果进行聚类分析后,发现第一类组合协同作用最明显,第九类组合的抑制率最高。由此推测,作为抑癌基因的p53或CDK抑制基因p21高表达,同时原癌基因c—myc表达受到抑制,可相互协同显著增强对MCF-7细胞增殖的抑制作用。     

ARF——一种新的抑癌因子的研究进展

INK4a/ARF基因位于人染色体9p21,是人类肿瘤中最常见的基因失活位点之一.INK4a/ARF基因有两套各自独立的启动子,通过可变阅读框,能够编码两种蛋白质：p16^INK4a和p14^ARF（ARF在鼠细胞中为p19^ARF）.p16作为CDK4/6的抑制因子,能够阻断pRb磷酸化,将细胞周期阻断在G1期;而ARF可结合原癌蛋白MDM2,稳定p53,将细胞周期阻断在G1期和G2/M转换期,或诱导细胞凋亡.因此ARF蛋白和p16一样也是一种肿瘤抑制因子.     

从基因组学到蛋白质组学

介绍了蛋白质的概念,产生背景,发展过程;比较了蛋白质组学与基因组学研究之间的差异;对结构蛋白质组学和功能蛋白质组学研究的内容以及相应的主要研究手段与技术加以简单评述,阐述了蛋白质组学研究的理论意义,应用前景及对国计民生的影响。     

哺乳动物睾丸长形精子细胞及精子中泛素化蛋白的研究

哺乳动物睾丸长形精子细胞及精子中泛素化蛋白的研究@费江枫$北京师范大学生命科学院!　中国 北京100875 @肖雪媛$北京师范大学生命科学院!　中国 北京100875 @于晖$北京师范大学生命科学院!　中国 北京100875 @何大澄$北京师范大学生命科学院!　中国 北京100875 @王永潮$北京师范大学生命科学院!　中国 北京100875 @陈晖$中国医学科学院药物研究所!　中国 北京100050 @费仁仁$中国医学科学院药物研究所!　中国 北京100050…     

HR6B cDNA克隆、基因表达及其与精子生育力相关的研究

HR6B cDNA克隆、基因表达及其与精子生育力相关的研究@费江枫$北京师范大学生命科学院!　中国北京100875 @梁前进$北京师范大学生命科学院!　中国北京100875 @彭安$北京师范大学生命科学院!　中国北京100875 @何大澄$北京师范大学生命科学院!　中国北京100875 @王永潮$北京师范大学生命科学院!　中国北京100875 @陈宇$中国医学科学院药物研究所!　中国北京100050 @吴小芳$中国医学科学院药物研究所!　中国北京100050 @费仁仁$中国医学科学院药物研究所!　中国北京100050…     

MAPK和其他因素对单环刺螠卵母细胞减数分裂的影响

MAPK和其他因素对单环刺螠卵母细胞减数分裂的影响@谭信$北京师范大学生命科学学院!　中国北京100875中国科学院动物学研究所计划生育国家重点实验室　中国北京100080 @彭安$北京师范大学生命科学学院!　中国北京100875 @唐永政$北京师范大学生命科学学院!　中国北京100875 @王永潮$北京师范大学生命科学学院!　中国北京100875 @王谦$北京师范大学生命科学学院!　中国北京100875 @陈大元$中国科学院动物学研究所计划生育国家重点实验室!　中国北京100080 @孙青原$中国科学院动物学研究所计划生育国家重点实验室!　中国…     

体外细胞去核过程的扫描电镜观察

使用5—10微克/毫升浓度的CB处理生长在特制的玻片上的HeLa、IB-RS-2、BHK-21细胞,然后离心去核。去核过程的不同阶段中的细胞经临界点干燥,用SEM观察。用CB处理后,细胞表面出现大量泡状物,偶尔也发生自发排核。离心时,包着细胞核的胞质突起物从细胞表面升起,逐渐拉长至念珠状,最后断裂。同时也可看到核从胞质突起中剥出。所获得胞质体形状随离心力与细胞生长面的角度不同而异。含有CB和秋水仙素的营养液处理细胞冲刷去核的过程,也使用SEM进行了观察,突出的核可被冲掉,留下胞质体。这种情况下泡状物失去很多,因而可能失去较多的膜物质和核糖体。     

PROL4提高肺癌细胞LTEP-a-2对化疗药物顺铂的敏感性

PROL4(proline-rich protein 4)是我们筛选发现的一个在肺癌细胞中表达缺失的基因．为了深入研究其在肺癌中的生物学功能,构建了PROL4表达质粒,转染肺腺癌LTEP-a-2细胞,获得了稳定表达PROL4的单克隆细胞株．与空载对照细胞相比,过表达PROL4的LTEP-a-2细胞其生长的血清依赖性明显提高,软琼脂集落形成能力降低,裸鼠皮下荷瘤生长受到明显抑制．进一步研究发现,过表达PROL4可明显提高多种肺癌细胞对顺铂的敏感性,而且这种敏感性的提高与PROL4协同顺铂促进细胞凋亡密切相关．该研究结果为临床上如何提高肺癌的化疗效果提供了重要的实验依据．