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| 人组氨酸磷酸酶PHP14的原核表达及其体外互作蛋白的研究 | |
| 引用本文： | 徐安健,蒋单懿,黄凌云,谷俊朝,肖雪媛,何大澄.人组氨酸磷酸酶PHP14的原核表达及其体外互作蛋白的研究[J].中国生物工程杂志,2010,30(7). |
| 作者姓名： | 徐安健 蒋单懿 黄凌云 谷俊朝 肖雪媛 何大澄 |
| 作者单位： | 1. 北京师范大学细胞增殖及调控生物学教育部重点实验室,北京,100875;首都医科大学附属北京友谊医院,北京热带医学研究所,北京,100050 2. 北京师范大学细胞增殖及调控生物学教育部重点实验室,北京,100875 3. 首都医科大学附属北京友谊医院,北京热带医学研究所,北京,100050 |
| 基金项目： | 国家"973"计划，北京市自然科学基金，北京市科学技术委员会基金 |
| 摘 要： | 目的:表达和纯化人组氨酸磷酸酶PHP14蛋白,并寻找与其存在体外相互作用的蛋白。方法:PCR扩增PHP14的全长cDNA,并将其克隆至pGEX4T原核表达载体,构建重组表达质粒。用重组表达质粒转化大肠杆菌BL21菌株,经IPTG诱导后,使用Glutathione Sepharose 4B凝胶颗粒进行亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳确定融合蛋白的表达。进行GST-Pulldown实验,寻找体外与PHP14相互作用的蛋白,并进行质谱鉴定。结果:在大肠杆菌BL21中成功了表达出了PHP14的可溶性融合蛋白;经Glutathione Sepharose4B凝胶颗粒纯化后,获得了纯化的GST-PHP14融合蛋白,GST-Pulldown实验和质谱鉴定结果发现PHP14与HSP90在体外存在相互作用。结论:实现了PHP14的原核表达和纯化,发现PHP14与HSP90在体外可能存在相互作用。 |
| 关 键 词： | 原核表达和纯化 体外相互作用 |
Prokaryotic Expression, Purification of Human 14-kDa Phosphohistidine Phosphatase and its Interacting Protein Study in Vitro |
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| XU An-jian,JIANG Shan-yi,HUANG Ling-yun,GU Jun-chao,XIAO Xue-yuan,HE Da-cheng.Prokaryotic Expression, Purification of Human 14-kDa Phosphohistidine Phosphatase and its Interacting Protein Study in Vitro[J].China Biotechnology,2010,30(7). | |
| Authors: | XU An-jian JIANG Shan-yi HUANG Ling-yun GU Jun-chao XIAO Xue-yuan HE Da-cheng |
| Abstract: | |
| Keywords: | PHP14 HSP90 |
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