溶菌酶——幽门螺旋菌生长的重要因子

对１２株幽门螺旋菌分离株生长特性研究发现,１２株幽门螺旋菌分离株的生长繁殖呈溶菌酶依赖性,这一依赖性在幽门螺旋菌最初几代传代时极为明显。同时发现,外源溶菌酶有利于幽门螺旋菌维持其独特的菌体形态。因此,溶菌酶是幽门螺旋菌生长的重要因子。     

幽门螺旋菌感染与冠心病

幽门螺旋菌感染与冠心病最近研究表明,幽门螺旋菌慢性感染与冠心病发病有关,Ｍｅｎｄａｌ等在一组病例的对照研究中发现幽门螺旋菌感染血清阳性的病人,其冠心病危险性增加一倍,像高同型半胱氨酸血症一样,幽门螺旋菌感染与冠心病的关系是与其它常见危险因子,如吸烟、...     

幽门螺旋菌致小鼠胃溃疡的动物模型

幽门螺旋菌致小鼠胃溃疡的动物模型胃溃疡和细菌感染的联系,在幽门螺旋菌（ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）被发现十几年以后,已被广泛确认。胃炎、胃溃疡,以致胃癌的发生确与细菌感染密切相关。胃溃疡的治疗手段也从传统的抗胃酸转向消灭感染。为了研究细菌致...     

45株幽门螺旋菌的生物性状研究*

本文对胃镜活检标本分离的45株幽门螺旋菌进行涂片染色、细菌培养、生化反应、药敏试验等方面的研究。表明用TTC—WCG培养基作Hp的微需氧35℃培养可加快细菌的生长;触酶(cata-lase)、氧化酶(Oxidase)、脲酶(Urease)和水解胆汁七叶苷(Bile-aescu|in)四联检在筛选Hp上有重要意义,配合染色特性,培养条件等可作为初步鉴定Hp常规使用。报告时间由原来的7—10天缩短为96小时。药敏琼脂作Hp的药敏试验效果良好。     

幽门螺旋菌保存方法的初步研究

幽门螺旋菌(HP)过去称它为幽门弯曲菌(CP)是近年来从人体胃组织中发现的一种细菌,自1982年首次培养成功以来,已做了大量的研究工作,它与胃炎和消化性溃疡的发生有密切关系.幽门螺旋菌营养要求和培养条件都比较高,而且生物学特性,经多次传代比较容易产生变异,特别是菌种保存方面还存在不少问题,该菌的长期贮存很困难,而长期贮存对该菌的药敏,生物学特性的研究,动物模型的建立都是非常重要的。为了开展对幽门螺旋菌与慢性胃炎和消化性溃疡关系的基础研究,我们对临床胃及十二指肠患者粘膜分离出的幽门螺旋菌进行传代培养,在10％兔全血的布氏肉汤琼脂培养基上,在混合气体(10％CO_2,5％O_2,85％N_2条件下),4℃冰箱中保存于不同时间检查了存活情况,生物学特性的比较。实验表明,用这种方法保存细菌存活率,菌体形态生物学特性保存较好,取得了较满意的结果.     

幽门螺旋菌的分子生物学研究现状

幽门螺旋菌的分子生物学研究现状王正祥（扬州大学医学院微生物学教研室,江苏扬州２２５００１）自从Ｗａｒｒｅｎ和Ｍａｒｓｈａｌｌ［１］于１９８２年成功分离出幽门螺旋菌（ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒＰｙｌｏｒｉ）以来,国内外大量的研究结果［２,４］已确定Ｈ．ｐ...     

西沙群岛海域海洋放线菌的分离及其抗菌活性

分离西沙群岛海域放线菌并研究其抗菌活性。采用干燥、辐射、冷冻及加热处理等11种样品预处理方式和10种培养基对海洋放线菌进行分离,对代表性菌株进行鉴定,并考察分离放线菌生长的海水依赖性。进一步以金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、啤酒酵母和扩展青霉为指示菌考察分离放线菌的抗菌活性。从西沙群岛海域样品中分离获得放线菌383株,其中专性海洋放线菌23株。选定93株代表菌株进行鉴定,93株菌隶属于9个科,11个属。不同培养基对分离放线菌菌株的数量及种类影响显著。6株放线菌对4种指示菌均有抑菌活性,其中4株为专性海洋放线菌,表明海洋环境具有丰富的放线菌资源,这些放线菌特别是专性海洋放线菌有望为新型抗菌物质的发现与开发提供菌种来源。     

柞蚕蛹溶菌酶的分离和纯化

本文报道热空气,大肠杆菌Ｋ１２Ｄ３１诱导柞蛹血淋巴,提高溶菌酶活力的方法。应用选择性热变性,等电点沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素离子交换层析,ＣＣ－纤维素亲和层析等分离技术从柞蚕蛹血淋巴中提取溶菌酶,溶菌酶比活力达３６７００ｕ／ｍｇ蛋白,提高了１５０倍,活力回收达４８．６％。     

转溶菌酶基因山羊乳腺上皮细胞的原代培养及特性分析

采用组织块法、胰酶差速消化法分离了人溶菌酶(hLYZ)转基因山羊的乳腺上皮细胞,建立了转基因羊乳腺上皮细胞(TGMEC)的体外培养体系,并对其生长与体外分泌特性进行了分析.研究显示其体外生长曲线符合典型的S型,传代期间二倍体染色体数正常;通过免疫荧光染色、RT-PCR发现该细胞能表达上皮细胞所特有的角蛋白18,并能表达内源性乳蛋白(酪蛋白与乳球蛋白);进一步通过酶联免疫试验发现该乳腺上皮细胞在体外培养中可持续稳定地分泌重组人溶菌酶.由此获得的人溶菌酶转基因羊乳腺上皮细胞系为乳腺生物反应器研究提供了一个重要细胞膜型.     

球形与螺旋形幽门螺杆菌基因表达差异的研究

目的：从基因转录水平了解球形幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)基因表达的变化。方法：幽门螺杆菌标准株NCTC ll637和2株临床分离株,经抗生素—灭滴灵诱导球变。提取等菌量螺旋形和球形Hp的RNA,RT—PCR扩增Hp25种基因,这些基因包括毒力基因(kat、aphA、rdxA、frxA、cysS、ureB glmM、cagA、vacA、fldA、iceAl、hpaA、fliD、napA、oipA、alpAB、babB、hopZ);看家基因(scoB、atpD、g1nA、recA)和功能不明的外膜蛋白基因(hopW、hopX)。扩增产物经分子定量成像系统进行扫描定量。结果和结论：等菌量的球形HpRNA量比螺旋形Hp减少。NCTC ll637、F44和F49菌株的螺旋菌分别有25、20、19个基因RT—PCR阳性,对应的球形菌相应的基因RT—PCR也为阳性。定量分析结果表明：被检测的基因在球形菌中的表达均比螺旋菌降低。提示球形菌致病性的降低与基因的低表达有关。3株球形菌不同基因表达的变化并不完全一致,表达量变化较小且各菌间较一致的是g1mM、oipA、g1nA;表达量变化较大且菌问较一致的基因是：napA、sodB、recA、fliD。     

适冷溶菌酶产生菌的分子鉴定及其酶学性质的研究

采用比浊法对本试验室保存的126株南极微生物产适冷溶菌酶进行测定,发现7株菌产溶菌酶.并对其中的菌株NJ147进行ITS-5.8 S rDNA基因序列的同源性和系统发育分析,结果表明:菌株NJ147属于Debaryomyces hansenii属.该菌株所分泌溶菌酶的最适作用温度为30 ℃,在0 ℃时酶活性是最高活性的...     

幽门弯曲杆菌生物学特性的研究

从90例胃疾患者的胃粘膜上皮组织观察到幽门弯曲杆菌,应用微需氧的技术对这种细菌进行了分离和培养。在活体组织上的幽门弯曲杆菌的菌体多呈3个弯曲的螺旋形。在体外培养基上生长的菌体为稍弯曲的杆状,而在较老的培养物中细菌形态则成为短杆或类球状。显微超薄切片显示出细菌的胞壁具有双层的结构和带鞘的鞭毛。这种菌的菌体表面光滑,具有1—3根极生鞭毛,鞭毛的末端有膨大的类球形物。对分离物中的10株幽门弯曲杆菌的菌株进行了生理生化试验。其主要特征与典型的幽门弯曲杆菌基本相同,只是在25℃生长的性状有差异,并且经数次传代后能在     

动物胃内螺旋菌的分类与鉴定

本文对猪、狗和猫胃内的螺旋样细菌进行了调查,用常规病理学技术发现这些动物胃内主要有三种类型的是螺旋菌：幽门螺杆菌样、人胃螺旋菌样和弯曲菌样微生物,在三只猫胃培养出ＨＰ样细菌,用螺杆菌属细菌特异探针杂交发现ＧＨＬＯｓ帮ＨＰＬＯｓ属于螺杆菌属细菌,而用ＨＰＴ特异物ＰＣＲ扩增发现狸和猫胃内存在ＨＰＤＮＡ,猫胃内ＨＰ样培养菌也扩增阳性,从而提出人胃内ＨＰ和ＧＨ感染可能来自动物传播论断。     

威海地区幽门螺杆菌耐药谱表型及遗传特征分析

目的研究威海地区的幽门螺杆菌对阿莫西林(AMX)、克拉霉素(CLA)、甲硝唑(MTZ)和四环素(TET)的耐药性表型和基因型。方法对172株分离自消化不良患者的幽门螺杆菌进行药敏试验检测,采用PCR法对甲硝唑耐药菌株进行rdx A和frx A基因的扩增。结果共检出耐4株阿莫西林耐药株(2.3%)、16株克拉霉素耐药株(9.3%),以及90株甲硝唑耐药株(52.3%)和6株四环素耐药株(3.5%)。所有甲硝唑耐药菌株中的rdx A基因发生了改变并直接导致Rdx A蛋白的氨基酸序列发生变化。在52株甲硝唑耐药株中发现frx A基因的错义突变,而在14株甲硝唑耐药株中检出了由于移码突变造成的frx A基因表达的提前终止。结论本地区的幽门螺杆菌对甲硝唑有较高的耐药率,与该类细菌染色体中rdx A和frx A基因的突变有关。     

人胃螺旋菌的分离培养研究

我们首次从一慢性活动性胃炎病人胄粘膜活检组织中成功地分离到一株人胃螺旋菌（Ｇａｓｔｒｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍｈｕｍｉｎｉ５,ＧＨ）,并观察到此菌与幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ）混合感染存在。ＧＨ直径０．３μｍ（在扫描电镜下测量）,氧化酶阳性,过氧化氢酶阳性,并有很强的尿素酶活性。此菌为微需氧菌,在含５％Ｏ２、１０％ＣＯ２和８５％Ｎ２的混合气体环境中生长良好。在含６％、１０％脱纤维绵羊血布氏琼脂培养基及含１０％小牛血清布氏肉汤中表现为不同菌体形态,可呈球状、肾形及１～１４个较密螺旋状,菌体长度可达１７Ｆｔｍ。在一７０℃保存３０天后发生球形变,但在连续传代培养后可恢复典型形态。ＧＨ的分离培养成功为进一步研究其生物学特性及致病性打下了基础。     

胃,十二指肠疾病中幽门螺旋菌的检测及影响因素的探讨

为探讨幽门螺旋菌(Helicobacter Pylori HP)与胃、十二指肠疾病的关系,我们对72例主诉上腹痛的患者在行胃镜检查的同时行HP检查。     

一种来源于酒曲地衣芽孢杆菌溶菌酶基因在毕赤酵母中的诱导表达及活性分析

利用梯度稀释法和划线纯化法对酒曲中的微生物进行分离纯化,将所得微生物进行液体培养并检测其溶菌酶活性。通过分子生物学方法进行菌种鉴定,得到一株具有溶菌酶活性的地衣芽孢杆菌。提取地衣芽孢杆菌全基因组,设计特异性引物,克隆基因序列Lyz并连接至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA中,构建重组表达载体pPICZαA-Lyz。重组载体经电转化整合入甲醇型毕赤酵母菌株X33基因组中进行重组表达。摇瓶发酵结果显示,甲醇诱导72 h后,发酵液中溶菌酶活性为1 360 U/m L。酶学性质分析结果显示,重组地衣芽孢杆菌溶菌酶在pH3.0~9.0范围内可以保持较高的相对活性,具有良好的热稳定性。抑菌试验结果显示地衣芽孢杆菌溶菌酶对革兰氏阴性菌有抑菌作用。     

幽门螺旋菌的长期保藏

常规方法保藏幽门螺旋菌极为困难。将该菌新鲜培养物接入补加小牛血清及甘油的布氏肉汤中,于-70℃保藏,可安全保藏5—13个月。     

48例消化性溃疡患者幽门螺杆菌的耐药性调查

对幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori ,Hp)临床分离株进行药物敏感性试验及耐药性分析 ,为探求幽门螺杆菌感染的根除疗法提供依据。运用微需氧培养方法 ,从胃镜活检标本中分离幽门螺杆菌 ,利用琼脂稀释法测定幽门螺杆菌对抗生素的敏感性试验 ,将 2 1株Hp临床分离株进行 7种抗菌药物的敏感性及耐药性调查。从 4 8例消化性溃疡患者胃镜活检标本中分离出 2 1株幽门螺杆菌。 2 1株幽门螺杆菌对阿莫西林MIC范围 0 .5～ 8mg/L ,无耐药菌株 ;克拉霉素、替硝唑的MIC范围分别为 0 .12 5～ 0 .5mg/L和 4～ 8mg/L ,耐药率均为 4 .76 % ;四环素、利福平的MIC范围分别为 0 .5～ 1mg/L和 1～ 6 4mg/L ,耐药率分别为 4 .76 % ,9.5 2 % ;甲硝唑的MIC为 16～ 12 8mg/L ,红霉素的MIC为 0 .5～ 12 8mg/L ,耐药率较高 ,分别为 2 3.89%和5 7.15 %。此次分离的Hp对阿莫西林、克拉霉素、替硝唑有较高的敏感性 ;而对甲硝唑及红霉素耐药率高 ,应避免应用 ;阿莫西林、克拉霉素可作为本地区治疗Hp感染的主要药物 ;四环素、利福平可用于一线治疗失败后二线治疗 ;替硝唑可替代甲硝唑用于Hp的根除治疗。     

猪链球菌2型国内分离株毒力相关蛋白的分析

提纯猪链球菌 2型江苏分离株HA980 1的毒力相关蛋白溶菌酶释放蛋白 (muramini dase releasedprotein ,MRP)和胞外因子 (extracellularfacter,EF) ,制备其抗体供免疫转印之用。另提取猪源链球菌 1 7株国内分离株、1株德国分离株及 1株猪链球菌 2型人分离株的胞壁和胞外蛋白 ,经SDS PAGE ,与HA980 1株的MRP和EF的抗体作免疫转印。 1 1株MRP阳性 ,1 0株EF及EF 阳性 ,MRP及EF的分布存在 4种表型 :MPR+ EF+ (8 1 9) ,MRP+ EF (1 1 9) ,MRP+ EF- (1 1 9) ,MRP- EF- (1 0 1 9)。