染料木黄酮对成骨细胞增殖分化的影响

目的：研究染料木黄酮对体外培养乳鼠颅盖骨成骨细胞增殖分化的影响。方法：取乳鼠颅盖骨,采用胶原-胰蛋白酶消化法,进行颅骨成骨细胞培养,取第二代成骨细胞,添加10^-5～10^-7mol／L染料木黄酮,在CO2孵箱中培养48h和72h后MTT比色法测定细胞增殖,培养72h采用^3H-TdR和^H-Pro掺入实验测定DNA和胶原合成。用试剂盒检测细胞裂解液碱性磷酸酶(ALP)活性。结果：染料木黄酮明显增加成骨细胞MTT的吸光度值、^3H-TdR和^3H-Pro的掺入,增加成骨细胞碱性磷酸酶活性。结论：染料木黄酮促进体外培养的乳鼠颅盖骨成骨细胞DNA和胶原的合成,促进增殖和分化。     

染料木素4′-O-β-D-吡喃木糖苷的合成与表征

以染料木素为原料,采用相转移催化法与乙酰溴代木糖反应,首次选择性地合成了染料木素4′-O-β-D-吡喃木糖苷.采用聚酰胺柱层析、制备高效液相色谱进行分离纯化得到产物并对其进行了IR、1H、13C NMR和MS结构表征.     

染料木素的乳糖糖苷化修饰及其产物的结构表征

为了改善染料木素在机体内作用的靶向性,本文研究了用具有与肿瘤细胞表面受体定向结合的乳糖来修饰染料木素。采用相转移催化法,首次合成了两种新的化合物:染料木素7-O-β-D-吡喃乳糖苷(4)和染料木素7,4′-二-O-β-D-吡喃乳糖苷(5),并对其进行了IR、MS、1HNMR和13C NMR结构表征。     

表皮生长因子受体酪氨酸激酶结构域与其抑制剂染料木素的模拟对接

染料木素是表皮生长因子受体酪氨酸激酶结构域(EGFR-TK)高度特异的非竞争性抑制剂.本研究采用AUTODOCK3.05分子对接软件包对EGFR-TK与染料木素进行了模拟对接研究,探究了二者的相互作用机制,为染料木素的抗肿瘤机制提供理论依据.对接结果表明,染料木素结合在EGFR-TK的活性腔中,与EGFR-TK发生了强烈的相互作用,结合自由能△G为-31.2 kJ/mol;染料木素通过干扰TK催化活性结构中Lys721/Glu738离子对的形成而抑制了EGFR-TK的活性,属于非竞争性结合和抑制作用;在结合中,疏水力和氢键发挥了重要作用.     

基于文献计量的染料木素最新研究现状分析

目的:通过分析SCIE中染料木素领域相关论文,了解目前染料木素研究的现状与发展趋势。方法:利用Web of Science,从载文量、作者、地区与机构、关键词等角度统计分析;结果:共检索出9,446篇相关文献,涉及26222位作者及18个国家(地区)与4015个科研机构;染料木素专题学科发展趋于成熟,拥有一支实力雄厚、造诣较深的影响力较大的核心作者群。美国、日本、德国、中国、韩国、英格兰、加拿大、意大利、法国、台湾成为染料木素研究的中心国家和地区。染料木素生理学功能、提取分离方法、分析方法、药理作用、结构修饰等方面的研究为目前染料木素专题研究的主要内容。结论:染料木素该学科需要在临床实践中进一步发展成熟,生物利用度需得到进一步的提高。     

染料木素体外抑制人低密度脂蛋白氧化修饰作用

为探讨染料木素对人低密度脂蛋白(LDL)氧化修饰的影响,采用铜离子(10 umol/L)体外氧化LDL的方法,观察大豆异黄酮主要成分染料木素(genistein)对LDL氧化过程中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量和维生素E(VitE)水平的影响。结果:10 umol/LCuSO4与100 mg/L LDL共同孵育18 h,MDA含量明显升高,VitE含量明显降低,染料木素(0.25、1.25、2.5、12.5、25、50、125、250 umol/L)能显著降低MDA含量,升高VitE含量(P<0.01,P<0.05,P<0.02),且呈剂量依赖性。提示一定浓度范围的染料木素体外有抗LDL氧化修饰作用。     

染料木素对MRSA外排蛋白表达的影响

[目的] 研究染料木素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）外排蛋白的影响。[方法] 通过联合药敏实验检测染料木素影响MRSA对环丙沙星的敏感性;利用等重同位素多标签相对定量蛋白质组学（iTRAQ）技术,检测染料木素作用MRSA41577后菌体蛋白表达量的变化;通过生物信息学方法对差异显著的蛋白进行系统分析;通过qPCR和尼罗红外排实验,探讨耐药相关的蛋白介导细菌耐药的作用机制。[结果] 联合药敏实验结果显示,染料木素能增强MRSA对环丙沙星的敏感性;通过iTRAQ技术检测到差异显著蛋白共有129个,包括60个表达上调的蛋白和69个表达下调的蛋白;生物信息学分析结果显示,与细菌耐药相关的蛋白约有14个,其中,通过主动外排系统介导细菌耐药的蛋白主要有PstB、PstS等;qPCR结果显示,与对照组相比,PstB、PstS的基因表达量分别下降了51.6%和78.6%;尼罗红外排实验结果显示,染料木素与尼罗红之间存在竞争关系,为MRSA41577的竞争性抑制剂。[结论] 染料木素可通过降低MRSA41577外排基因pstB和pstS的mRNA表达量,进而影响PstB、PstS外排蛋白的表达来逆转细菌耐药;此外,染料木素还是MRSA41577的竞争性外排抑制剂,可通过与底物竞争外排的方式,使抗菌药物留在菌体内发挥抗菌作用。     

染料木素、槲皮素及其化学修饰物清除自由基能力研究

分别采用Fenton反应.邻菲罗啉显色法、邻苯三酚自氧化法和紫外可见分光光度法,考察染料木素、槲皮素及其化学修饰物清除·OH、·O2-和DPPH自由基能力.结果显示,槲皮素铬配合物清除·OH、·O2-和DPPH自由基能力大大高于其母体槲皮素,同时,其稳定性和抗自氧化的能力亦得到提高;染料木素铬配合物清除·OH和·O2-自由基的能力高于其母体染料木素,其清除·OH自由基的能力提高最为显著;染料木素糖苷修饰物清除三种自由基能力与其母体相比无显著提高.因此,染料木素铬和槲皮素铬配合物是一类高活性、高稳定性自由基清除剂或与自由基相关疾病新药的候选物,值得进一步研究.     

染料木素对铅诱导的PC12 细胞毒性的抑制效应研究

目的:探讨染料木素对铅诱导的细胞毒性的影响。方法:PC12细胞分为对照组、染铅组、染料木素组以及铅加染料木素组;MTT实验检测细胞活力的改变,流式细胞仪检测细胞凋亡水平的变化,荧光探针检测线粒体形态的改变,Western blot方法检测线粒体融合分裂相关蛋白表达水平的变化。结果:铅可诱导PC12细胞活力的下降以及细胞凋亡率的显著增高,染料木素可抑制铅的这些毒性效应。与此同时,铅可诱导线粒体形态的损伤性改变,线粒体融合减少,分裂增多;而加入染料木素之后,线粒体损伤程度显著下降,线粒体分裂减少,融合增多。此外,线粒体融合相关蛋白Mfn2的水平在铅暴露后显著下降,而线粒体分裂相关蛋白Drp1的水平在铅暴露后显著升高,染料木素干预后均有所恢复。结论:染料木素可抑制铅诱导的PC12细胞毒性,其作用可能与其对线粒体融合分裂过程的干预有关。     

染料木素对铅诱导的PC12细胞毒性的抑制效应研究

目的：探讨染料木素对铅诱导的细胞毒性的影响。方法：PC12细胞分为对照组、染铅组、染料木素组以及铅加染料木素组;MTT实验检测细胞活力的改变,流式细胞仪检测细胞凋亡水平的变化,荧光探针检测线粒体形态的改变,Western blot方法检测线粒体融合分裂相关蛋白表达水平的变化。结果：铅可诱导PC12细胞活力的下降以及细胞凋亡率的显著增高,染料木素可抑制铅的这些毒性效应。与此同时,铅可诱导线粒体形态的损伤性改变,线粒体融合减少,分裂增多;而加入染料木素之后,线粒体损伤程度显著下降,线粒体分裂减少,融合增多。此外,线粒体融合相关蛋白Mfn2的水平在铅暴露后显著下降,而线粒体分裂相关蛋白Drp1的水平在铅暴露后显著升高,染料木素干预后均有所恢复。结论：染料木素可抑制铅诱导的PC12细胞毒性,其作用可能与其对线粒体融合分裂过程的干预有关。     

染料木素抑制人胰腺癌细胞株PANC-1细胞增殖机制的研究

目的探讨不同浓度染料木素对胰腺癌细胞作用及其抑癌基因表达的研究。方法本实验共分实验组(80,120,160,200μmol/L)的染料木素、空白对照组(PBS)和标准对照(吉西他滨)。各组培养基处理细胞12,24,36,48,60 h后,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测人胰腺癌细胞株PANC-1在染料木素作用下的增殖活性;流式细胞术检测人胰腺癌细胞株PANC-1在染料木素木素作用下的凋亡细胞百分率;用逆转录-聚合酶连反应(RTPCR)方法测定P53及P21抑癌基因的表达;Western-blot法检测抑癌基因P53和P21的蛋白表达水平。细胞凋亡与细胞基因mRNA采用的是LSD法,细胞增殖数据采用的是配对t检验。结果流式细胞术显示,人胰腺癌细胞株PANC-1处理后60 h时在不同浓度(80,120,160,200μmol/L)的染料木素作用下细胞凋亡率分别为(3.72±1.58)﹪、(35.98±3.76)﹪、(51.36±4.32)﹪和(64.10±2.09)﹪。吉西他滨(gemcitabine,GEM)组为(43.45±5.28)﹪,不同浓度染料木素组与标准对照组间比较差异有统计学意义(均P<0.01);细胞增殖效果:160μmol/L与200μmol/L、120μmol/L与200μmol/L、200μmol/L与吉西他滨组之间比较,均有统计学意义(P<0.01),而160μmol/L与吉西他滨组比较无统计学意义(P>0.05);Western-blot检测蛋白水平显示160μmol/L和200μmol/L染料木素相对于空白对照能够明显的增强抑癌基因P21和P53的蛋白水平的表达,相对于标准组没有明显的差异。结论染料木素可以抑制人胰腺癌细胞株PANC-1增殖,并且初步探索了这种抑制作用表现出浓度及时间依赖性。     

RP-HPLC法测定怀槐中染料木素和芒柄花黄素含量

怀槐(Maackia amurensis Rupr.et Maxim.)广泛分布于中国东北三省及内蒙古等地,尤以黑龙江省为多.怀槐作为民间药,其茎、枝可治疗风湿性关节炎; 叶、枝皮可治疗肿瘤; 内皮可治疗深度伤口及久不愈合的溃疡.另外,怀槐树皮在民间还作为祛风湿、消炎、镇痛、健胃、止血等药广泛应用,疗效甚佳.从怀槐的根、枝、叶、果实和心材中分别分得异黄酮、生物碱、NC442类化合物,据报道,其中的异黄酮类化合物表现出对心血管系统的复合作用和明显的抗肿瘤活性[1].作者在对怀槐进行系统的化学成分研究过程中,分离鉴定了9个异黄酮类化合物[2,3],并进行了抑制肿瘤细胞增殖作用研究[4],其中,染料木素(genistein)对胃腺癌细胞(BGC)增殖有一定程度的抑制作用,芒柄花黄素(formononetin)则对白血病细胞(HL-60)增殖有一定的抑制作用.染料木素和芒柄花黄素作为马鞍树属(Maackia Rupr.)植物中普遍存在的2个异黄酮类化合物,其活性研究日益受到重视.采用HPLC法测定染料木素等异黄酮类化合物含量在大豆等其他植物中曾有文献报道[5].为了尽早开发怀槐资源,同时为其资源的综合利用提供科学依据,本文采用HPLC法对怀槐不同部位的染料木素和芒柄花黄素2个有效成分进行了含量测定.     

染料木素乙酰阿魏酸酯的合成

基于Schotten-Bamann反应原理,以阿魏酸和染料木素为起始原料,首次合成得到两种新化合物:染料木素-7-乙酰阿魏酸酯(即5-羟基-3-(4-羟苯基)-4-羰基-4H-苯并吡喃-7基3-(4-乙酰基-3-甲氧苯基)丙烯酸酯,1)和染料木素-7,4′-二-乙酰阿魏酸酯(即3-{4-[3-(4-乙酰氧基-3-甲氧苯基)丙烯酰氧基]苯基}-5-羟基-4-羰基-4H-苯并吡喃-7基3-(4-乙酰基-3-甲氧苯基)丙烯酸酯,2),对其进行了UV,IR,1H,13C NMR和MS结构表征.     

不溶性着色蔗渣木聚糖检测木聚糖酶活性*

蔗渣木聚糖经1.4-丁二醇二环氧甘油醚与染料气巴蓝3GA交联形成不溶性着色固体。这种着色蔗渣木聚糖在pH4-8范围内表现稳定,用于评价木聚糖酶活性及在平板上检测产酶微生物具有简捷而灵敏的效果。     

微波辅助提取木豆根中染料木素工艺

以木豆根为原料,利用微波辅助提取技术进行提取,在单因素实验的基础上对提取条件进行了考察,根据BBD(Box-Behnken design)实验设计原理,采用3因素3水平的响应面分析法,以木豆根中主要异黄酮染料木素(genistein)为指标,对提取过程进行优化,得到最佳工艺参数为：提取温度为68℃,固液比为32∶1 mL·g^-1,乙醇浓度为78%,提取功率700 W,提取时间15 min。在最佳提取条件下染料木素的提取率可达到0.465±0.032 mg·g^-1。本研究对于微波提取技术的应用及木豆根的开发和利用都具有显著的意义。     

基于生物信息学筛选染料木素抗骨肉瘤靶基因

染料木素是一种天然的小分子物质,在多种肿瘤中显示出抗肿瘤作用,探究染料木素作用于骨肉瘤的靶基因。从DrugBank下载与染料木素有关的靶基因,分别导入string数据库中进行分析,用Cytoscape作出蛋白质相互作用(PPI)网络,同时用插件Cytohubb分析PPI,获得25个关键基因,再用WebGestalt分析25个基因的KEGG通路,选取与骨肉瘤相关通路的靶基因,得到的靶基因用HCMDB数据库验证,最后用miRDB预测靶基因的miRNA并在GSE65071数据库中进行验证。一共筛选出13个与染料木素有关的靶基因,选择其中药理作用不明的11个基因进行后续分析,string数据库中获得284个与11个靶基因有关的基因,使用WebGestalt分析25个关键基因,随后选取NF-kappaB和Rap1信号通路的靶基因在HCMDB数据库中进行验证,最后使用miRDB和GES65071数据库得到hsa-miR-23b-3p,hsa-miR-23a-3p,hsa-miR-141-3p和hsa-miR-200a-3p。研究显示CXCL8,CXCL12,LPAR1和CNR1;hsa-miR-23b-3p,hsa-miR-23a-3p,hsa-miR-141-3p和hsa-miR-200a-3p可能成为骨肉瘤的治疗靶基因。     

高效液相色谱法测定大鼠血清染料木素浓度

目的:建立大鼠血清中染料木素浓度的HPLC测定方法.方法:大鼠血清以叔丁基甲醚萃取,萃取物用氮气吹干后,用甲醇溶解用于色谱分析.色谱条件:采用Thermo C18柱(250ram×4.6mm,5μm);以乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾(35:65,pH=4.3)为流动相;流速为1.0mL/min;检测波长为260hm;柱温为40℃;进样量为10μL.结果:染料木素最低检测浓度为0.01mg/L;标准曲线线性范围为0.01～10.00μg/mL(r=0.9998);相对回收率为(101.31±3.47)%;日内RSD与日间RSD均小于10.00%.结论:该方法简便、快速、灵敏度高,重现性及稳定性较好,适用于大鼠血清染料木素浓度测定和药代动力学的研究.     

染料木黄酮对去势大鼠骨骼矿化的影响

目的: 研究染料木黄酮对去势大鼠骨骼矿化的影响.方法: 雌性Wistar大鼠47只随机分为假手术组,去势对照组、去势 雌激素组(己烯雌酚20 μg.kg bw-1.d-1)、去势 染料木黄酮组(剂量分别为25、50、100 mg.kg bw-1.d-1).饲养三个月后处死,测定骨密度、骨矿化相关参数、骨钙、磷、锌、镁、锰、血清甲状旁腺激素、降钙素和雌激素含量.结果: 大鼠去势后,股骨骨密度降低,平均类骨质宽度增大,骨矿化延迟时间和类骨质成熟时间延长,骨中钙、磷、锌、镁和血清雌激素含量降低,与假手术组相比均有显著性差异(P＜0.05);补充染料木黄酮后,股骨骨密度有改善的趋势,平均类骨质宽度变窄,骨矿化延迟时间和类骨质成熟时间缩短,骨中钙、磷、镁含量升高.结论: 染料木黄酮通过促进类骨质矿化,减少骨中钙、磷、镁丢失,预防骨质疏松的发生.     

离子液体微波辅助提取降香檀叶中鹰嘴豆芽素A和染料木素

以降香黄檀可再生资源——叶子为原料,利用离子液体微波辅助提取技术对鹰嘴豆芽素A和染料木素进行提取。通过单因素实验,3因素3水平的BBD(Box Behnken design)实验,对提取条件进行优化,确定了离子液体微波辅助提取降香檀叶中鹰嘴豆芽素A(biochanin A)和染料木素(genistein)的最佳提取工艺条件：1.00 mol·L^-1［C₄MIM］Br,提取温度为56℃,液固比18∶1,提取时间为11 min,提取功率300 W。在最佳提取条件下,鹰嘴豆芽素A和染料木素平均提取率分别可达1.598和0.939 mg·g^-1。     

新型染料木素磺酸酯的前药判定与大鼠体内生物利用度

为寻找染料木素(GE)新的前药,采用建立的生物样品中药物浓度测定的液相色谱法对新型大豆异黄酮染料木素磺酸酯(GB)进行前药判定以及大鼠体内药物动力学研究,以考察前药中染料木素的口服生物利用度是否改善.在大鼠体内药物代谢实验中,灌胃给予GB的大鼠血浆中能检测到明显的GE.在临床前药物动力学实验中,该前体静注给药和以40 mg/kg灌胃药后,GE在大鼠体内的动力学过程均符合一室模型.GB中GE的相对口服生物利用度为原药的110.9％.研究表明,相对于原药GE,前药中GE的相对口服生物利用度达到预期的改善,该前药有进一步研究意义.