曲酸生产菌的诱变选育

Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ ２３３６两次紫外诱变后筛选出突变苗株ＵＶ２１０１２－１。该菌株曲酸产量比出发菌提高了１．６８倍;遗传性状稳定,传代５次曲酸产量基本不下降,而且发酵周期也比出发菌株明显缩短。     

曲酸生产菌的复合诱变选育*

以黄曲霉(Aspergillus flavus.)为出发菌株,经3次紫外线、1次^60Co、3次亚硝基胍多重复合诱变处理,选育获得曲酸生产菌UCN7—17,配以最佳培养条件,发酵7d,曲酸产量由原来的0．926％,提高到6．3％。实验证明采用多因子复合诱变,能有效改变菌株对诱变因素敏感性,提高变异率,逐步提高突变株的产酸水平。     

曲酸发酵的研究I．紫外线照射对黄曲霉产生曲酸的影响

用曲酸生产菌株黄曲霉 Aspergtllus flavus Link AS 3.2789为出发菌株进行紫外线诱变,从73个突变株中选出UI 1202,产曲酸达34.7毫克／毫升,比原始菌株提高50.8％。再以UI 1202进行第二次紫外线照射,从183个突变株中选出UII 1223,产曲酸达46．5毫克／毫升,比原始菌株提高78．8％。说明以紫外线为诱变剂,可以提高曲酸产量,并有积累诱变效果。将UII 1223在5000升发酵罐进行工业水平生产[实际装置4000升,搅拌速度160转／分,通风量每分钟1：0.5(体积：体积),温度31--33℃,发酵120小时左右],说明经二次紫外线诱变后的突变株性能比原始菌株有不少优越性,不仅提高了曲酸产量,而且性能稳定,不产毒素,降低了原料消耗,节约生产时间,已在生产中正式使用。     

Aspergillus flavus F52菌株鉴定及不同碳源对曲酸产量的影响

【目的】探明豇豆内生真菌F52的分类地位及不同碳源对曲酸产量的影响。【方法】采用形态观察及ITS序列分析对豇豆内生真菌F52进行分类鉴定;通过重结晶获得曲酸高纯度产物,采用核磁共振波谱、高分辨质谱及红外光谱对其进行结构鉴定;采用高效液相色谱检测不同碳源对曲酸产量的影响。【结果】该曲酸产生菌为黄曲霉Aspergillus flavus F52;葡萄糖与蔗糖组成的复合碳源曲酸产量最高,乳糖的存在不利于曲酸的生成;该菌株发酵液中曲酸含量可达24.44 g/L。【结论】Aspergillus flavus F52是一株具有产业化开发价值的曲酸高产菌株。     

米曲霉Aspergillus oryzae发酵生产曲梭的研究

分离到Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ１３个菌株,其曲酸产量变化幅度１６．６－４８．６ｍｇ／ｍｌ,从中选出４个高产菌株。在１％酵母提取物和１５％蔗糖培养液中３０℃发酵培养,８￣１０天菌体生长量和曲酸产量达到最大值,随后曲酸产量迅速下降。蔗糖浓度对菌体生长和曲酸产量影响甚大,最适蔗糖浓度为１５％。天冬氨酸、甘氨酸、赖氨酸、谷氨酸、吡哆醇、叶酸和抗坏血酸有利于菌体生长并显著提高曲酸产量。将在ＹＥＳ     

复合诱变对米曲霉产曲酸的影响

发酵法生产曲酸还未实现大规模工业化生产的原因之一是曲酸菌种产酸率较低,本文以平展米曲霉（Aspergillus oryzae effusus)AS32为出现菌株,经UV和^60Co诱变处理,筛选获得一株高产曲酸变异株AUR163,以葡萄糖为碳源,酵母膏为氮源,32℃摇瓶和30L罐发酵培养4天,产酸达6．8g/100mL。平均生产效率为17．0g/L.d最高可达30．5g/L.d比出发菌AS32提高190％以上,这表明UV和^60Co作诱剂,可以大幅度提高米曲霉的曲酸生产效率。     

产酸丙酸杆菌耐酸菌株的选育及其应用

为了解除微生物发酵生产丙酸过程中代谢产物(丙酸)对菌体生长的抑制作用,以实验室保藏的产酸丙酸杆菌(耐30g/L丙酸)为出发菌株P-0,通过丙酸压力筛选获得了一株耐10g/L丙酸的产酸性能良好的菌株P-10,降低了发酵过程中丙酸对菌体生长的抑制作用。菌株P-10做摇瓶发酵,发酵周期168h,丙酸浓度为49.66g/L,产酸速率为0.30g/(L·h),较出发菌株P-0提高了53.04%;7L发酵罐实验表明,菌株P-10发酵周期168h,丙酸浓度为55.63g/L,产酸速率0.33g/(L·h)。同时对菌株P-10做二次接种实验,结果表明,84h为二次接种最适时间段,且84h进行二次接种时,丙酸浓度提高了17.77%,二次接种实验不但有利于有机酸的积累,而且可以提高菌株的产酸能力和耐酸能力;经过选育的菌株P-10具有优良的产酸稳定性,有利于菌种的工业化生产和应用,同时对后续的发酵分离耦合具有重要意义。     

产酸丙酸杆菌耐酸菌株的选育及其应用

为了解除微生物发酵生产丙酸过程中代谢产物(丙酸)对菌体生长的抑制作用,以实验室保藏的产酸丙酸杆菌(耐30g/L丙酸)为出发菌株P-0,通过丙酸压力筛选获得了一株耐10g/L丙酸的产酸性能良好的菌株P-10,降低了发酵过程中丙酸对菌体生长的抑制作用。菌株P-10做摇瓶发酵,发酵周期168h,丙酸浓度为49.66g/L,产酸速率为0.30g/(L·h),较出发菌株P-0提高了53.04%;7L发酵罐实验表明,菌株P-10发酵周期168h,丙酸浓度为55.63g/L,产酸速率0.33g/(L·h)。同时对菌株P-10做二次接种实验,结果表明,84h为二次接种最适时间段,且84h进行二次接种时,丙酸浓度提高了17.77%,二次接种实验不但有利于有机酸的积累,而且可以提高菌株的产酸能力和耐酸能力;经过选育的菌株P-10具有优良的产酸稳定性,有利于菌种的工业化生产和应用,同时对后续的发酵分离耦合具有重要意义。     

米曲霉Aspergilus oryzae发酵生产曲酸的研究

分离到Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｏｒｙｚａｅ１３个菌株,其曲酸产量变化幅度１６６—４８６ｍｇ／ｍｌ,从中选出４个高产菌株。在１％酵母提取物和１５％蔗糖培养液中３０℃发酵培养,８—１０天菌体生长量和曲酸产量达到最大值,随后曲酸产量迅速下降。蔗糖浓度对菌体生长和曲酸产量影响甚大,最适蔗糖浓度为１５％。天冬氨酸、甘氨酸、赖氨酸、谷氨酸、吡哆醇、叶酸和抗坏血酸有利于菌体生长并显著提高曲酸产量。将在ＹＥＳ培养液中培养１０天的菌体重新悬浮于含１５％蔗糖的ＹＥＳ培养液或０２Ｍ磷酸缓冲液（ｐＨ６５）中８—１０天曲酸产量仍可达到４５ｍｇ／ｍｌ以上。低温条件下制备的培养８—１０天的Ａｏｒｙｚａｅ菌体匀浆反应系统仅有痕量曲酸形成。     

乳酸菌低温菌株的复合诱变选育

【目的】采用复合诱导的方法,选育出能在低温条件下性状稳定、生长良好且具有工业生产价值的低温乳酸菌菌株。【方法】使用紫外照射和亚硝基胍处理的方法对分离的Q1菌株进行诱变处理,将选育得到的低温菌株Q1-4-6与出发菌株Q1在15°C、20°C、37°C下,比较其生长速率、产酸量和糖降解量。【结果】从玛曲牧民自制酸奶中分离得到一株乳酸菌Q1,根据其形态学特征、生理生化特性,同时结合16SrDNA序列分析结果,将其鉴定为肠球菌属棉籽糖肠球菌(Enterococcus raffinosus)。经过多轮诱变选育出一株能在低温下良好生长、遗传性状稳定的菌株Q1-4-6,将出发菌株与诱变菌株在15°C、20°C比较其生长、产酸和糖降解量发现,诱变菌株均好于出发菌株。在37°C的自然条件下,诱变菌株和出发菌株的生长速率差异不大,但均略高于出发菌株。在15°C培养发现,诱变菌株生长速率、产酸量均高于购买菌株干酪乳杆菌(CL04)和嗜热链球菌(CL05)。【结论】通过UV+NTG复合诱变,最终选育出一株在低温下生长良好、遗传性状稳定的菌株Q1-4-6。     

L-异亮氨酸产生菌黄色短杆菌的选育

以黄色短杆菌BF420为出发菌株,经过紫外线和亚硝基胍(NTG)复合诱变处理后,获得一株甲硫氨酸缺陷(Met-)及抗α-氨基丁酸(α-AB)的L-异亮氨酸产生菌BM2610,该菌株在未进行优化的发酵条件下能够积累L-异亮氨酸的量为7.12g.L-1,比出发菌株BF420提高了122.5%。     

UV+MW复合诱变结合抗性突变筛选替考拉宁高产菌株

采用微波照射(MW)、紫外照射(UV)和MW+UV处理技术,对替考拉宁产生菌AT-92的孢子进行诱变,诱变处理的孢子悬液涂布在含替考拉宁致死浓度的培养基平板上培养,获得替考拉宁抗性突变株,通过摇瓶发酵对替考拉宁抗性基因突变株进行筛选,获得一株遗传性状稳定的替考拉宁高产菌AT 92-52-37菌株,其产替考拉宁能力比出发菌株的提高5倍。     

柱晶白霉素产生菌的选育：耐磷高产突变株的分离

柱晶白霉素产生菌──北里链霉菌（Ｓｔｒｅｐｏｍｙｃｅｓ．Ｋｉｔａｓａｔｏｎｅｓｉｓ）,通过紫外线处理和高浓度磷酸盐平板上选择分离到突变株ＵＤＰ１－２,在正常发酵培养基条件下摇瓶发酵柱晶白霉素超产可达１８．６％。而且变株的菌落形态与亲本菌株差异较大。     

Isolation and characterisation ofCandida sp. mutants enriched in S-adenosylmethionine (SAM)

The ability to accumulate S-adenosylmethionine (SAM) of 572 yeast strains isolated from environmental sources were surveyed. An S-adenosylmethionine enriching strain S42-12, identified asCandida sp., was chose to develop a SAM-accumulating mutant successfully. The final SAM-accumulating mutant strain YQ-5 was isolated by UV radiation or by NTG treatment using ethionine selection and nystatin selection method. The mutant strain YQ-5 accumulated 112.1 mg per gram biomass, was 3.14-fold higher than the original strain S42-12. When cultivated in the optimal medium with a favourable fermentation conditions, SAM content of the mutant strain reached at 1740 mg L^?1. Trend of SAM and ergosterol contents and methionine adenosyltransferase activity of SAM-accumulating mutants during fermentation were analysed. The results suggested that one of the reasons why the mutants accumulated SAM in significantly high amounts may be the lower consumption of SAM for ergosterol biosynthesis, other than improvement of methionine adenosyltransferase activity.     

1株聚乳酸降解细菌的筛选、鉴定及产酶研究

从污泥中筛选出1株对聚乳酸（poly—L—lacticacid,PLA）具有降解活力的细菌DSL09,该菌株对PLA的乳化液、粉末及薄膜都具有降解作用。通过形态学、16SrDNA比对及生理生化特性的分析,鉴定该菌株属于芽胞杆菌属（Bacillus sp．）。为提高该菌株对PLA的降解活力,对其进行了紫外诱变,获得了稳定遗传的突变株DSL09-60b,该突变株的PLA降解活性提高至原始菌株的1．5倍。对该突变株产PLA降解酶的发酵条件进行了优化,经测定DSL09-60b在初始培养基pH为8．0、0．5％酪蛋白为诱导物、接种量6％（体积比）的条件下37℃培养54h时发酵液酶活性最高。     

Citric acid production by a novel Aspergillus niger isolate: I. Mutagenesis and cost reduction studies

Ultraviolet-irradiation (UV), ethyl methane sulfonate (EMS) and acridine orange (AO) were used to induce citric acid overproduction mutations in Aspergillus niger UMIP 2564. Among 15, eight of the mutant derivatives, were improved with respect to citric acid production from sucrose in batch cultures. Maximum product yield (60.25%) was recorded by W5, a stable UV mutant, with approximately 3.2-fold increase when compared to the parental wild type strain. In terms of the kinetic parameters for batch fermentation processes, the mutation doubled the specific substrate uptake rate and achieved 4.5- and 7.5-fold improvements in citric acid productivity and specific productivity, respectively. For reduction of the fermentation medium cost, corn steep liquor and calcium phosphate pre-treated beet molasses were successfully used as substituents of nitrogen and carbon sources in the growth medium, respectively. These medium substitutions resulted in a W5 citric acid fermentation culture with a product yield of 74.56%.     

花生四烯酸高产菌株的选育

本研究以一株能产生花生四烯酸的被孢霉菌为出发菌株,通过紫外线诱变筛选出一株高产花生四烯酸的突变株Ｍ１０,发酵试验结果表明：突变株Ｍ１０的每升培养液中干菌体得率为３１ｇ,油脂含量为８．３ｇ,而原菌株仅为２０．３ｇ和５．４ｇ,气相色谱分析结果Ｍ１０所产花生四烯酸的量占总脂的１０．０６％（０．８３ｇ／Ｌ培养液）。同时对Ｍ１０菌株的生长和发酵特性及发酵过程中菌丝体形态变化作了一定的探讨。     

瑞拉菌素产生菌RL-2的诱变育种

本研究以委内瑞拉链霉菌秦岭变种RL-2(Streptomyces venezuelaevar. qinlingensis RL-2)为出发菌株, 分别采用紫外线、氯化锂及紫外线加氯化锂的复合诱变方式对其孢子悬液进行诱变处理。在复合诱变的紫外线照射时间为45 s和氯化锂浓度为0.4%的情况下, 获得一株瑞拉菌素的高产突变菌株UVL-108且连续传接6代其遗传特性较稳定。采用双向培养及生长速率法对其进行初筛和复筛, 结果表明: UVL-108的拮抗性能较出发菌株提高了77%, 其发酵液对稻瘟病菌的抑菌毒力是出     

利用原生质体紫外诱变技术选育可常温发酵的中国被毛孢新菌株

中国被毛孢(Hirsutella sinensis)是天然冬虫夏草[Cordyceps sinensis(Berk)Sacc.]的真正无性型,其生长温度低(低于20℃),生长缓慢(发酵周期长达20～30d),对人工发酵的技术条件要求很高,因而大大增加了工业化发酵生产的成本和技术难度。为了解决上述问题,实验中从天然冬虫夏草子座中分离到中国被毛孢菌株BS-1,并对其进行了原生质体紫外诱变处理。经过粗筛和精筛,从中选出一株可常温下(25～28℃)发酵、生长迅速(发酵周期4～5 d)、有效成分(甘露醇和腺苷)含量显著高于原始菌株的诱变株BS-5962。通过连续10代PDA斜面继代培养和摇瓶试验,以及连续3批的1t罐的中试试验,检查结果表明所得诱变株性状优异而稳定。可为降低中国被毛孢的液体深层发酵成本和技术难度提供一种有效的解决方案。     

定向选育衣康酸高产菌株的研究

以衣康酸生产菌土曲霉Ａ９００２为出发菌株,经紫外线及亚硝基胍复合诱变后再行定向选育,即在以衣康酸为唯一碳源的培养基中富集不能同化衣康酸的菌种,将将它们涂布在含乌头酸酶抑制剂（单氟醋酸）的高糖、高衣康酸平板培养基上,最后从中而筛选出一支衣康酸氧化酶弱,乌头酸酶活强,并耐自身代谢产物的高产突变株Ａ９００３。此菌株在摇瓶培养７２ｈ后,产酸为９．２％,转化率为５８．１％,在１００ｍ＾３发酵罐生产性试验中,