皱纹盘鲍脓疱病的组织学和超微结构研究

１９９３年９月以来,大连地区许多养鲍厂的皱纹盘鲍都发生了严重的脓疱病。通过病理组织切片研究证明,脓疱病的病灶是从鲍足下表面开始逐渐扩展向足的深部,由于该病的唯一病原菌－河流弧菌Ⅱ的大量繁殖瞳的结缔组织、肌纤维坏死瓦解或破碎,病灶中只剩下鲍的血淋巴细胞、弧菌及细胞碎片。     

杂色鲍足的显微与超微结构

杂色鲍（Haliotis diversicolor）隶属软体动物门、腹足纲、前鳃亚纲、原始腹足目、鲍科、鲍属。鲍的足是柔韧性很好的器官,它具有运动、支持、感觉与辅助捕获功能,是鲍生活中匍匐和吸附岩石等固着物的重要部位,因其首先接触环境而成为脓疱病、裂壳病、弧菌病等病病原体的主要侵袭部位,这些病可造成十分严重的鲍死亡现象。国内学者对鲍足的研究文献较少,仅有关于皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai Ino）足的组织学（崔龙波等,1997）及皱纹盘鲍足的粘液细胞的片断研究（王宜艳等,2004）报道。     

对二甲苯对皱纹盘鲍肝胰腺细胞DNA的损伤

为研究对二甲苯对皱纹盘鲍肝胰腺的毒性作用,设置4个浓度(0.5、1.0、1.5和2.0 mg·L^-1)和对照组,开展为期21 d的对二甲苯对皱纹盘鲍的亚慢性毒性试验,采用彗星试验技术进行皱纹盘鲍肝胰腺细胞DNA损伤分析,采用CASP分析软件对拖尾率、彗星尾长、彗尾DNA相对含量、Olive矩等损伤指标进行统计。结果表明: 与对照组相比,各染毒组皱纹盘鲍肝胰腺细胞DNA均受到损伤,且损伤程度存在显著性差异。随着染毒浓度的增加,肝胰腺细胞DNA受损程度加重,高浓度甚至可以引发细胞凋亡,呈现一定的剂量-损伤效应。中浓度对二甲苯短时间暴露即可对皱纹盘鲍肝胰腺细胞造成DNA损伤,随着暴露时间延长,细胞DNA受损程度加重,呈现一定的时间-损伤效应。但长时间暴露细胞DNA各损伤指标有所减小,这可能与细胞自身的DNA修复机制和生物体解毒系统的代谢机制有关。研究表明,对二甲苯可对皱纹盘鲍肝胰腺细胞产生氧化损伤,导致DNA断裂,高浓度的对二甲苯长时间暴露可导致其细胞凋亡。     

大连近海河流弧菌Ⅱ噬菌体的分离与研究

1996年、 1 997年两个夏季 (5～ 8月 )、从大连市水产养殖公司所属的不同的皱纹盘鲍养殖区采集海水及海底淤积物样品共 76个。以河流弧菌Ⅱ (Vibriofluvialis)为指示菌 ,从这些样品中分离到 1 9株噬菌体。对它们进行了电子显微镜的观察 ,结果发现它们均属于BradleyA型。进一步的血清型分析表明 ,这 1 9株噬菌体分别属于 4个血清型 ,并对这 4个血清型的代表株VP1 ,VP2 ,VP4及VP8进行了寄主范围、一次生长曲线测定及其他生物学特性的初步分析。     

皱纹盘鲍脓疱病病原菌－河流弧菌Ⅱ（Vibro fluvialis－Ⅱ）的生物学性状研究

本文对皱纹盘鲍“脓疱病”的病原菌形态和生物学特性研究结果作了报道。这种病原菌细胞呈革兰氏阴性杆状（有时为短杆）,大小为０．６－０．７×１．２－１．５μｍ以单根极生鞭毛运动,氧化酶阳性,接触酶阳性,对０／１２９（２,４－二氰－６,７－二异丙基喋啶）（１５０μｇ）敏感,又根据对葡萄糖的Ｏ／Ｆ测定为发酵型产酸产气,能还原硝酸盐到亚硝酸盐,Ｖ－Ｐ反应阴性,精氦酸双水解酶阳性,不液化明胶,不水解淀粉,可在１％－７％ＮａＣｌ的肉汁培养基中生长,生长温度范围在１５－４２℃,对低浓度０／１２９（１０ｍｇ）不敏感,阿拉伯糖阳性,木糖、肌醇阴性等鉴别特征,可确定其为河流弧菌Ⅱ（Ｖｉｂｒｏｆｌｕｖｉａｌｉｓ－Ⅱ）。     

皱纹盘鲍南移的初步研究

皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)的个体大、繁殖力强,是我国鲍属中优良的养殖种类。为了扩大皱纹盘鲍的养殖范围,并在我国南方海域增加的的养殖种类,我们于1973年9月至11月间,进行了皱纹盘鲍的南移试验。在辽宁、福建两省各有关单位的大力支持和配合下,采取水陆联运方法,自辽宁省海洋岛运出皱纹盘鲍一千余只,途中经历     

用微卫星标记分析皱纹盘鲍群体的遗传变异

利用微卫星标记技术, 对皱纹盘鲍山东长岛和辽宁獐子岛的两个野生群体以及山东崆峒岛一个养殖群体的遗传变异进行了分析。对6个微卫星基因座的多态性进行了评估, 各基因座的多态信息含量(PIC)值均大于0.5, 适合对鲍群体遗传结构的分析。结果表明, 这6个基因座在3个皱纹盘鲍群体中共获得57个等位基因, 等位基因数(A)平均为9.50, 有效等位基因数(N_e)平均为5.8572, 平均杂合度观测值(H_o)和期望值(^H_e)分别为0.6925和0.7966; 两个野生群体的杂合度观测值(H_o)和期望值(H_e)均高于养殖群体。上述结果为保护和利用皱纹盘鲍的遗传多样性提供了依据。     

皱纹盘鲍的个体能量收支

对皱纹盘鲍的呼吸、摄食、生长及能量收支等实验研究表明, 鲍的耗氧率与壳长、体重、温度及昼夜变化有关, 耗氧率与壳长、体重均呈幂函数关系, 一天中16~4时(夜间)耗氧率高于4~16时(白天)且在18~20时达峰值.同温度下鲍日摄食率与体重呈幂指数关系, 日(相对)摄食率随温度升高而增加, 而日相对摄食率、日相对生长率均随壳长、体重增加呈下降趋势.鲍在14~20℃内对海带的总转化效率为53%.鲍软体部、海带及鲍粪便干品的比能值分别为19.2、8.57和7.23kJ·g^-1.14~20℃皱纹盘鲍摄入能量的34.6~48.6%为粪能, 22.0~38.2%的能量用于自身代谢, 5.6~28.2%用于贝体软体部的生长.     

皱纹盘鲍的个体能量收支

对皱纹盘鲍的呼吸、摄食、生长及能量收支等实验研究表明, 鲍的耗氧率与壳长、体重、温度及昼夜变化有关, 耗氧率与壳长、体重均呈幂函数关系, 一天中16~4时(夜间)耗氧率高于4~16时(白天)且在18~20时达峰值.同温度下鲍日摄食率与体重呈幂指数关系, 日(相对)摄食率随温度升高而增加, 而日相对摄食率、日相对生长率均随壳长、体重增加呈下降趋势.鲍在14~20℃内对海带的总转化效率为53%.鲍软体部、海带及鲍粪便干品的比能值分别为19.2、8.57和7.23kJ·g^-1.14~20℃皱纹盘鲍摄入能量的34.6~48.6%为粪能, 22.0~38.2%的能量用于自身代谢, 5.6~28.2%用于贝体软体部的生长.     

皱纹盘鲍稚鲍剥离后大量死亡的原因和防治方法初探

本文报告了对大连地区皱纹盘鲍（Ｈ．ｄｉｓｃｕｓ）人工育苗过程中,稚鲍剥离后大量死亡现象的初步研究工作。实验表明,稚鲍赖以生存的波纹板上饵料残渣的积累和腐败,微生物的大量繁殖,粘液状物质的形成与稚鲍的死亡密切相关。实验中从病鲍个体及粘液状中分离出了十株优势菌,筛选出了四种有效的杀菌药物,并测出了每种药物的ＭＩＣ值,实验结果在生产实际中应用取得了良好的效果。     

皱纹盘鲍的染色体研究

本文报道皱纹盘鲍的染色体制备方法及核型分析结果。皱纹盘鲍的2n=36,可配为18对,中央着丝点(M)的11对,即1,3,6,7,9,11,12,13,14,16,17号染色体。亚中央着丝粒(Sm)的7对,即2,4,5 8,15,18号染色体,NF=72。染色体的长度呈连续递变。其中相对长度最长的1号染色体为7.09,最短的18号染色体4.11,单倍体总长687.05。     

饲料中钾对皱纹盘鲍幼鲍生长及其生理指标的影响

在以酪蛋白和明胶为蛋白源的半精制基础饲料中,添加不同浓度梯度的钾(0、2、4、8、16、32 g钾/kg饲料),钾源为KCl,配制成6种实验饲料(实测钾含量分别为:0.10、2.12、4.39、9.79、20.08和27.26 g/kg),探讨皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)幼鲍对饲料中钾的需求量及其在长期适应不同含量钾的过程中的生理反应。幼鲍初始体重为(0.24±0.00)g,初始壳长为(12.24±0.04)mm,实验在流水系统中进行,养殖周期为15周。实验期间水温12—23℃,海水钾含量为(472.94±3.59)mg/L。结果表明,饲料中不同含量的钾对皱纹盘鲍的增重率(WGR,%)、贝壳日增长(DISL,μm/d)及存活率没有显著影响(P>0.05)。皱纹盘鲍软体部的水分、粗脂肪和贝壳的灰分含量受饲料中钾含量的影响不显著(P>0.05)。当饲料中钾含量大于等于4.39 g/kg时,与0.10 g/kg饲料组相比,软体部粗蛋白质含量显著升高(P<0.05)。软体部钾的含量和贝壳中钾、钠的含量受饲料中钾含量的影响不显著(P>0.05)。幼鲍软体部钠含量在饲料钾含量为20.08、27.26 g/kg时显著低于其他各组(P<0.05)。鳃Na+-K+ATP酶活力随着饲料中钾含量的增加逐渐下降,当饲料中钾含量为20.08、27.26g/kg时,与0.10 g/kg组相比显著降低(P<0.05),但与其他组相比差异不显著。因此研究认为:以生长指标为判据,不需要在饲料中补充钾,海水中钾和饲料原料中的钾能够维持皱纹盘鲍幼鲍的正常生长;但以生理指标(软体部粗蛋白质和钠含量,鳃Na+-K+ATP酶活力)评判,饲料中钾的适宜含量为2.12 g/kg。     

光系统Ⅱ捕光复合体飞秒时间分辨荧光特性的研究

采用时间分辨荧光光谱技术研究了菠菜（Spinacia oleracea L.）叶绿体叶捕光色素复合体（LHC Ⅱ）荧光的时间特性和光谱特性。用脉宽为120fs、波长为400nm的倍频钛宝石激光激发LHCⅡ样品;原始荧光信号由Boxcar采集,通过建立多指数模型,用非线性最小二乘法拟合,得到了激发能在LHCⅡ中传递的时间常数分别为：320fs、4.0ps和20.0ps。相对应的各组分荧光占总荧光的非分比分别为：3.4%、50.0%和46.6%。经全局分析,解得荧光强度随波长变化曲线;用高斯3峰解叠得到荧光光谱的峰值波长分别为：652nm、672nm和691nm。通过分析得出了时间常数与LHCⅡ中各色素成分之间的对应关系,并给出了可能的能量传递模型。     

一株弗氏链霉菌噬菌体的分离及其分子特性研究

鉴定一株从泰乐菌素异常发酵液中分离出的烈性噬菌体SF1并研究其分子特性。采用双层平板法分离纯化弗氏链霉菌的噬菌体SF1,通过负染法电镜观察噬菌体SF1的大小和形态;测定噬菌体SF1对氯仿和异丙醇的敏感性分析其包膜结构;通过SDS-PAGE分析噬菌体的结构蛋白;提取噬菌体基因组DNA进行限制性片段长度多样性分析。噬菌体SF1的噬菌斑直径约11-15 mm,边缘整齐透明,为烈性噬菌体;SF1为长尾型,头部为多面体,直径约24-30 nm,尾长约52-64 nm,尾宽约为3-5 nm;对氯仿和异丙醇不敏感,无包膜;基因组为双链DNA,大小约为35 kb;至少含有14种相对分子量为14.8-59.5 k D的结构蛋白。     

皱纹盘鲍受精过程的电镜观察

本文用透射电镜观察了皱纹盘鲍的受精过程。鲍卵子的胶膜使精子活化,并诱发了顶体反应,卵黄膜使顶体反应达到高潮。精子入卵后,卵发生皮层反应并形成受精膜开 减数分裂。此外,还观察到鲍的多精入卵现象。     

鲍鱼酶的制备及其性质

为了开发对海带(Laminaria japanic)具有解壁或破壁作用的工具酶,从皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)的消化腺提取制备了鲍鱼酶干粉。本文报道鲍鱼酶的制备及其主要性质,并与贻贝酶进行了比较。     

咖啡因加热休克诱导皱纹盘鲍多倍体的研究

报道了用咖啡因加热休克抑制受精卵的第一极体的释放诱导皱纹盘鲍（Ｈａｌｉｏｔｉｓ ｄｉｓｃｕｓ ｈａｎｎａｉ Ｉｎｏ）多倍体的研究结果。皱纹盘鲍的卵在２１℃海水中受精,受精后１０分钟开始处理,药物浓度分别为２．５ｍｍｏｌ／Ｌ、５ｍｍｏｌ／Ｌ、１０ｍｍｏｌ／Ｌ,热休克温度分别为２４℃、２６℃、２８℃,处理的持续时间为１０分钟至３０分钟,共分５个时间段。结果表明,药物浓度５ｍｍｏｌ／Ｌ和１０ｍｍｏｌ／Ｌ     

皱纹盘鲍一种球形病毒的感染及其发生

在发病的皱纹盘鲍（HaliotisdiscushannaiIno）幼鲍的足、内脏团、外套膜的血细胞质内,发现一种直径为90～140um的球形病毒粒子,带双层囊膜,无包涵体。负染病毒粒子与超薄切片大小形态相同。用被病毒感染的患病幼鲍感染健康鲍获同样症状,死亡率为50％。并于人工感染死亡鲍鱼体内观察到同样病毒。     

多重耐药肺炎克雷伯菌噬菌体KP002的生物学特性及基因组学研究

以上海某些医院临床分离到的多重耐药肺炎克雷伯菌为宿主菌,从不同环境的污水中分离获得1株肺炎克雷伯菌噬菌体KP002。电子显微镜显示其为有尾噬菌体,头部直径约70nm,尾长约80nm,尾宽约20nm。对其生物学特性进行研究,结果显示此株噬菌体在pH 3~9及4~50℃的环境中具有较高活性;6min吸附率达95%以上;潜伏期为10min,爆发期为50min;裂解量为172pfu/cell。结果表明,该噬菌体对pH值和温度适应范围较宽。对其全基因组进行测序分析,结果显示其基因组为环状双链DNA,全长47 173bp,GC含量为48%。本研究筛选获得1株对pH值和温度适应范围较宽的耐药肺炎克雷伯菌烈性噬菌体KP002,为建立耐药肺炎克雷伯菌的噬菌体库以用于治疗临床多重耐药菌感染提供了新的思路。     

两株副溶血弧菌烈性噬菌体的分离鉴定

研究旨在筛选烈性噬菌体, 为副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus, Vp)病害防控增加新的选择。以副溶血弧菌Vp13为宿主菌, 通过二层琼脂平板法筛选, 分离到了2株烈性噬菌体SX-2和SX-F。对其形态结构进行了透射电镜观察, 利用DNase I、 RNase A、Mung Bean Nuclease和Hind Ш酶进行噬菌体核酸类型鉴定, 并对噬菌体的裂解谱、最佳感染复数、一步生长曲线进行了测定。透射电镜观察结果显示: SX-2核衣壳头部长约110 nm, 宽约50 nm, 尾部长约150 nm, 宽约10 nm, 为典型的复合体制; SX-F核衣壳呈正六边形, 长约为56.86 nm,宽约50.74 nm, 未观察到尾部, 推测为正二十面体对称; 核酸测定结果显示两者均为线性双链DNA。依据国际病毒分类委员会第九次报告, SX-2符合肌尾噬菌体科特征, SX-F符合盖噬菌体科特征。噬菌体SX-2和SX-F对85株弧菌裂解结果显示: 噬菌体SX-2能够裂解23株副溶血弧菌和1株溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus), 噬菌体SX-F能够裂解19株副溶血弧菌和1株溶藻弧菌。SX-2和SX-F的最佳感染复数均为0.0001。一步生长曲线结果显示: SX-F的潜伏期约10min, 裂解期约70min, 裂解量为116.2; 噬菌体SX-2的潜伏期小于10min, 裂解期大约70min, 裂解量为209.3。两株噬菌体生物学特性表明SX-2与SX-F均为烈性噬菌体, 这为进一步探讨噬菌体防治技术奠定了基础。