双低菜粕高水平替代饲料鱼粉对大黄鱼潜在风险的评估:生长、健康和营养价值

研究从生长、健康和营养价值方面评估了高水平的双低菜粕替代饲料鱼粉对大黄鱼潜在的危害。在鱼粉含量60%的基础饲料（FM）上按照质量分数用双低菜粕分别替代15%（CM15）、30%（CM30）、60%（CM60）和100%（CM100）的鱼粉，配制成5种实验饲料。每种饲料投喂5个网箱的大黄鱼[初重（135.38±1.02）g]，即每个处理5个重复，进行12周的养殖实验。结果表明，当双低菜粕替代水平在15%和30%时，大黄鱼的生长及饲料系数并没有受到显著性的影响。然而，当替代水平高于30%时，大黄鱼的末重和特定生长率均显著降低，而饲料系数显著升高（P < 0.05）。当替代水平达到100%时，大黄鱼摄食率达到最高值而肥满度达到最低值（P < 0.05）。在组织形态方面，大黄鱼摄食双低菜粕替代的饲料后肠道绒毛的弯曲程度减少并且排列更加不规则，而肝细胞则呈现出圆形空泡状并伴随着细胞核的偏移。对大黄鱼骨骼进行X-射线扫描发现，摄食双低菜粕的大黄鱼椎体和头部出现了畸形。在营养价值方面，双低菜粕替代鱼粉并未显著影响大黄鱼背肌的脂肪含量、蛋白含量和氨基酸组成，然而脂肪酸组成受到了显著影响，即N-6系列脂肪酸含量显著升高，而DHA与EPA含量显著降低（P < 0.05）。根据欧洲食品安全局（EFSA）的相关标准，这些营养价值的变化并没有影响大黄鱼作为健康食品的功能。由此可见，高水平（60%和100%）的双低菜粕替代鱼粉对大黄鱼的负面影响主要表现为降低大黄鱼的生长性能、改变肠道和肝脏组织形态，以及影响大黄鱼的骨骼健康。然而，双低菜粕替代鱼粉养殖大黄鱼的肌肉仍然符合人类的膳食要求。因此，双低菜粕替代鱼粉并没有影响大黄鱼作为食用鱼的营养价值。     

饲料中添加外源酶对大黄鱼和鲈氮磷排泄的影响

本研究以大黄鱼和鲈为实验对象,探讨饲料中添加植酸酶(PY)和非淀粉性多糖酶(WX和VP)对其氨氮和可溶性磷(PO3-4-P)排泄的影响.以含植物蛋白的饲料为基础饲料,分别向每千克饲料中添加200mg植酸酶(酶的活性为2500IU/g)、 800mg WX(主要包括葡聚糖酶、戊聚糖酶和纤维素酶,各种酶的活性皆为50IU/g)、 400mg VP(主要为木聚糖酶,酶的活性为1000IU/g)以及800mg WX 400mg VP配制出5种实验饲料.实验鱼在海水网箱中经过8周的摄食驯养后,转入室内水族箱中进行氮磷排泄测定实验.在水族箱中经2天的适应后,测定饥饿状态下氨氮及可溶性磷的排泄率.然后饱食投喂,并连续测定摄食后48h内鱼体氨氮和可溶性磷的排泄率.实验期间水温为26.5-32.5℃,盐度为32.5‰-36‰,溶氧在7 mg/L以上.实验结果表明,饥饿状态下实验鱼的氨氮和可溶性磷排泄不受实验饲料影响(p>0.05).而在饱食条件下,实验饲料中添加非淀粉性多糖酶(WX、VP及WX VP)显著降低了实验鱼的氨氮排泄率(p<0.05),而添加植酸酶组实验鱼的氨氮排泄率与对照组差异不显著.饲料处理对实验鱼可溶性磷的排泄率的影响不显著(p>0.05),但添加植酸酶组实验鱼的可溶性磷排泄率有增加的趋势.     

实用饲料中添加结晶蛋氨酸对罗非鱼生长、体组成的影响

以奥尼罗非鱼（Oreochromis niloticus&#215;O.aureus）为实验材料,在室内循环玻璃水族箱内分别饲喂含蛋氨酸为0.45%、0.50%、0.55%、0.60%和0.65%的等能等氮的实用饲料（胱氨酸为0.52%）,日投喂率为体重的4%—8%,每日人工投饲三次,探讨实用饲料中添加结晶D-蛋氨酸（0.00%、0.05%、0.10%、0.15%和0.20%）对奥尼罗非鱼生长以及体组成的影响。结果表明：实用饲料中补充结晶D-蛋氨酸,罗非鱼的瞬间生长率（SGR）、饲料系数（FCR）、蛋白沉积率（APR）和肝脂含量均得到明显改善（p〈0.05）。蛋氨酸0.50%水平显著提高了血清蛋氨酸的含量（p〈0.05）,但是对体蛋白含量和鱼体氨基酸含量均无显著影响（p〉0.05）。结晶蛋氨酸能够被罗非鱼有效利用,是补充饲料蛋白质的一种有效途径。     

大豆低聚糖对牙鲆营养效应的研究：I摄食、生长和代谢酶活性

本试验比较研究了不同蛋白源（鱼粉,FM;大豆分离蛋白,SPI）基础饲料中添加大豆低聚糖（SBOS）对牙鲆（Paralichthysolivaceus）摄食率、生长性能和代谢酶活性的影响。分别以FM、SPI作为主要蛋白源,配制了4种等氮等能饲料。其中,饲料FM、SP1分别以FM、SPI作为主要蛋白源;饲料FMO、SPIO分别在饲料FM、SPI基础上添加10％SBOS（水苏糖：2．61％;棉籽糖：0．61％）。试验表明：①饲料中添加SBOS对牙鲆前两周摄食丰无显著影响（P〉0．05）;而显著降低了整个养殖周期FMO组牙鲆总摄食率,提高了SPIO组牙鲆总摄食牢（P〈0．05）;②FM基础饲料中添加SBOS对牙鲆特定生长率（SGR）、饲料效率（FER）和蛋白质效率（PER）均无显著影响（P〉0．05）,但均呈明显下降趋势;SPI基础饲料中添加SBOS对FER和PER无显著影响,却显著提高了SGR（P〈0．05）;③FM基础饲料中添加SBOS提高了牙鲆血浆谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（AKP）、乳酸脱氢酶（LDH）和γ-L-谷氨酰转肽酶（γ-GT）的活性,但仅AST差异显著（P〈0．05）,而对肝脏AST、ALT、AKP、LDH和1．GT活性无显著影响（P〉0．05）;SPI基础饲料中添加SBOS显著提高了血浆ALT和LDH活性,而对AST、AKP和γ-GT活性无显著影响;同时,SPI基础饲料中添加SBOS显著提高了肝脏AST和ALT活性,而对AKP、LDH和γ-GT活性无显著影响;④饲料巾添加SBOS对牙鲆血浆中尿素氮和游离氨基酸浓度均无显著影响。试验结果表明,不同蛋白源基础饲料中添加SBOS表现出不同的生长效应;其中,FM基础饲料中添加SBOS表现出一定的抑制生长效应,而SPI基础饲料中添加SBOS却表现出促生长效应。     

大豆低聚糖对牙鲆营养效应的研究：II消化率和消化生理

本试验比较研究了不同蛋白源（鱼粉,FM;大豆分离蛋白,SPI）基础饲料中添加大豆低聚糖（SBOS）对牙鲆（Paralichthys olivaceus）消化道（胃、幽门盲囊、前肠、中肠和后肠）和肝脏消化酶活性、饲料表观消化率和消化道（胃、小肠）组织结构的影响。分别以FM、SPI作为主要蛋白源,配制了4种等氮等能饲料。其中,饲料FM、SP1分别以FM、SPI作为主要蛋白源;饲料FMO、SPIO分别在饲料FM、SPI基础上添加10％SBOS（水苏糖：2．61％;棉籽糖：0．61％）。试验表明：①饲料中添加SBOS普遍降低了牙鲆消化道和肝脏蛋白酶活性,但差异均不显著（P〉O．05）。FM基础饲料中添加SBOS显著降低了肝脏脂肪酶活性（P〈0．05）,而对消化道脂肪酶活性无显著影响;SPI基础饲料中添加SBOS显著提高了前肠脂肪酶活性,降低了胃和中肠脂肪酶的活性,而对幽门盲囊、后肠和肝脏脂肪酶活性均无显著影响。FM基础饲料中添加SBOS显著降低了中肠淀粉酶活性,提高了胃淀粉酶活性（P〈0．05）,而对幽门盲囊、前肠、后肠和肝脏淀粉酶活性无显著影响;SPI基础饲料中添加SBOS显著提高了胃和前肠淀粉酶活性,降低了中肠脂肪酶活性（P〈0．05）,而对幽门盲囊、后肠和肝脏淀粉酶活性无显著影响;②FM基础饲料中添加SBOS显著降低了饲料干物质表观消化率（P〈0．05）,而对粗蛋白、粗脂肪和能量表观消化率均无显著影响（P〉0．05）。SPI基础饲料中添加SBOS对干物质、粗蛋白、粗脂肪和能量表观消化率均无显著影响;③饲料中添加SBOS对牙鲆胃和小肠组织结构均无明显负面影响。试验结果表明,饲料中添加SBOS对牙鲆消化道和肝脏消化酶活性、饲料表观消化率和消化道组织结构均没有表现出明显的负面效应;大豆蛋白源中含有的SBOS不是影响牙鲆对其利用率差的主要因素。     

不同糖源及糖水平对大菱鲆糖代谢酶活性的影响

采用3×4双因素实验设计,以初始质量为(8.06士0.08)g的大菱鲆幼鱼(Scophthalmus maximus L.)为对象,研究在饲料中添加3种糖源(葡萄糖、蔗糖和糊精)及4个水平(0、5％、15％、28％)对大菱鲆肝脏糖酵解关键酶己糖激酶(HK)、葡萄糖激酶(GK)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸激酶(PK)和糖异生关键酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、l,6-二磷酸果糖酶(FBPase)活性的影响.结果表明:饲料糖添加量从0升高到15％时,大菱鲆的糖酵解酶GK和PK活性随饲料葡萄糖或糊精含量的增加而增加;当饲料中葡萄糖或糊精含量为28％时,GK和PK活性有下降的趋势.3种糖源的4个添加水平对HK和PFK活性均无显著影响(P＞0.05).添加不同水平的葡萄糖对大菱鲆糖异生途径的PEPCK活性无显著影响(P＞0.05),但在饲料中葡萄糖添加量为5％时显著促进了FBPase活性(P＜0.05),当葡萄糖添加量升高为15％或28％时,FBPase活性与对照组无显著差异(P＞0.05).糊精作为饲料糖源时抑制了大菱鲆肝脏FBPase和PEPCK的活性,而添加不同水平的蔗糖对FBPase和PEPCK活性的影响均不显著(P＞0.05).总的来说,从大菱鲆幼鱼肝脏糖代谢角度而言,在饲料中添加15％的葡萄糖或糊精时,可以有效促进大菱鲆肝脏糖酵解能力;较添加葡萄糖,糊精在促进大菱鲆肝脏糖酵解的同时对糖异生存在一定程度的抑制.蔗糖作为饲料糖源时,仅在添加量为28％时显著促进糖酵解酶GK活性,糖酵解其他酶活性以及糖异生酶活性均不受蔗糖水平的显著影响.     

大黄鱼头肾巨噬细胞体外模型的构建

通过优化Percoll密度梯度离心技术,从大黄鱼(Larmichthys crocea)头肾组织中分离纯化巨噬细胞,并优化细胞培养条件。对所分离细胞进行形态学分析、普通光镜和电镜超微结构观察以及细胞功能验证实验。实验结果表明：细胞单层置于22℃无 CO2恒温培养箱中,于 L15培养基中培养5d 后仍保持较高的活力。普通光镜和电镜观察到大黄鱼头肾巨噬细胞具有伪足发生和较强的吞噬能力、胞浆中富含线粒体以及吞噬小泡。巨噬细胞与不同浓度(0、0.1、1、20μg/mL)的脂多糖(LPS,Escherichia coli 055：B5)分别孵育3h和24h。施加LPS刺激后,细胞呼吸暴发活性随LPS浓度以及孵育时间变化而变化。孵育3h后,0.1μg/mL LPS协同PMA可显著诱导巨噬细胞活性氧中间体(ROI)的产生。孵育24h后,所有处理组LPS协同PMA显著抑制细胞ROI的生成(P <0.05)。未添加PMA时,经1μg/mL LPS孵育3h和24h后的巨噬细胞细胞ROI的生成量显著降低(P<0.05),其他LPS处理组间细胞ROI的生成量无显著差异。     

大黄鱼对几种饲料蛋白原料消化率的研究

以白鱼粉为主要蛋白源制成参考饲料,以0.1%的Cr2O3为外源性指示剂,按参考饲料和实验原料70%∶30%的比例配制成实验饲料,测定了大黄鱼（Pseudosciaena crocea）对白鱼粉、红鱼粉、肉骨粉、豆粕、花生粕、菜籽粕和棉籽粕的表观消化率。实验大黄鱼（平均初始体重15.0±1.6g）养殖于海水浮式网箱（1.5m×1.5m×2.0m）中,分别以各实验饲料投喂实验鱼5周,然后采用挤压法收集粪便。实验结果表明各原料表观干物质消化率在43.6%至70.0%之间,能量消化率在42.9%到82.6%的范围内。实验原料的蛋白质表观消化率在70.7%到92.4%之间,其中白鱼粉和红鱼粉的蛋白消化率最高（分别为92.4%和89.3%）,而棉籽粕则最低（70.7%）。脂肪的表观消化率在61.3%到90.5%之间,其中棉籽粕最低（61.3%）。磷的表观消化率相对较低,仅白鱼粉和红鱼粉在53.2%以上,其余皆低于37.5%。总之,大黄鱼对这几种原料的表观消化率存在较大差异,但蛋白消化率均较高,因此,可作为大黄鱼的饲料蛋白源在实际饲料配制中使用。     

亚麻籽油和豆油替代鱼油对大黄鱼肝脏和肌肉脂肪酸组成及Δ6Fad基因表达的影响

为了研究亚麻籽油(LO)和豆油(SO)完全替代鱼油(FO)对大黄鱼(Larimichthys crocea)肝脏和肌肉脂肪酸组成及Δ6Fad (Δ6 Fatty acid desaturase)基因表达的影响。实验用豆油和亚麻籽油替代鱼油制备了3种等氮等脂的精制饲料, 在海水浮动网箱中进行了为期10周的养殖实验。实验结果表明: (1)鱼油组的增重率、饲料效率和特定生长率均显著高于亚麻籽油组和豆油组(P<0.05), 但对成活率, 肝体指数和脏体指数没有显著影响(P>0.05); (2)亚麻籽油和豆油完全替代鱼油显著改变了鱼体肝脏和肌肉的脂肪酸组成, 降低了肝脏和肌肉LC-PUFA (Long chain-polyunsaturated fatty acid)的相对含量(P<0.05), 在亚麻籽油组(LO)和豆油组(SO)中没有显著差异(P>0.05), 在各处理组中, 肌肉的n-3LC-PUFA的相对含量显著高于肝脏(P<0.05); (3)亚麻籽油和豆油显著上调了肌肉和肝脏中Δ6Fad基因的表达量(P<0.05), 其表达量在肝脏中分别升高了7.6和6.5倍, 在肌肉中分别上升了2.2和2.8倍。结果表明, 在实验条件下亚麻籽油和豆油完全替代鱼油对大黄鱼生长具有不利影响, 亚麻籽油和豆油替代鱼油降低了肝脏和肌肉中LC-PUFA的含量, 提高了Δ6Fad基因的表达量。     

不同添加方式植酸酶处理豆粕对牙鲆生长和饲料利用率的影响

以初始平均体重(2.02±0.02)g的牙鲆(Paralichthys olivaceus)为实验对象,进行为期70d的摄食生长实验,研究不同添加方式的植酸酶对牙鲆生长和饲料利用的影响。在5000.0g豆粕中添加2.5g植酸酶,然后用产朊假丝酵母(Candidautilis)进行发酵预处理,得到植酸酶预处理豆粕。共制作4种等氮等能(粗蛋白49.7%、总能20.9kJ/g)饲料,对照饲料主要以鱼粉为蛋白源;在对照饲料的基础上,用豆粕蛋白替代45%的鱼粉蛋白配制成豆粕组饲料;在每千克豆粕组饲料中添加1000IU植酸酶,配制成植酸酶组饲料;用植酸酶预处理豆粕蛋白替代45%的鱼粉蛋白配制成植酸酶预处理豆粕组饲料。结果表明,与对照组相比较,用豆粕蛋白替代饲料中45%的鱼粉蛋白,若不添加植酸酶则显著降低牙鲆的特定生长率(P0.01)、饲料效率、蛋白质效率和氮贮积率(P0.05);直接添加植酸酶组、植酸酶预处理豆粕组牙鲆的特定生长率、饲料效率、蛋白质效率和氮贮积率与鱼粉对照组相比较没有出现显著差异(P0.05);与不添加植酸酶的豆粕组相比较,在含豆粕饲料中添加1000IU/kg饲料的植酸酶显著提高牙鲆的特定生长率(P0.01)、氮贮积率(P0.05)和磷贮积率(P0.01),显著降低氮排放率(P0.05)和磷排放率(P0.01),但饲料效率和蛋白质效率没有显著变化(P0.05);在豆粕中添加植酸酶进行发酵预处理,降低了豆粕中植酸含量,在饲料中添加植酸酶预处理豆粕显著提高牙鲆的特定生长率(P0.01)、饲料效率、蛋白质效率和氮贮积率(P0.05),显著降低氮(P0.05)、磷和钙的排放率(P0.01)。