果蝇唾腺染色体的观察和制片方法的改进

几年来我们在教学中进行了多方面的实验探索,在果蝇唾腺制片方法上加以改进,采用加蔗糖液保色,树脂胶封边,制备一种半永久制片标本。操作过程如下: 1.取出唾腺,在其上加2滴(37℃)蒸馏水低渗处理10～20分钟,使唾腺细胞涨大有利于染色体的分散。 2.用滤纸吸去蒸馏水,加1滴1N HCl解离8～15分钟(时间随当时的温度而定),吸去解离液,用蒸馏水轻轻冲洗2～3次,将水吸净。     

用Feuglen染色法制做果蝇唾腺染色体

制作果蝇唾腺染色体通常以改良苯酚品红或醋酸洋红为染色剂 ,这些常规方法存在 1个共同的弊病 ;染色体被着色的同时 ,细胞质也着色较深 ,染色体与其背景形成的反差很小 ,不利于显微摄影。为此笔者改变传统方法用 Feuglen染色法对果蝇唾腺染色体进行染色制片 ,收到了良好的效果。1　方法和步骤1)将盛有 1mol盐酸的小烧杯置于 6 0℃的恒温水浴中 ,待用 ;2 )取较肥大的果蝇三龄幼虫 ,置于滴有 0 .85 %生理盐水中 ,在解剖镜下剖出唾腺 ;3)弃去杂物 ,剔除唾腺上的脂肪 ;　　 4 )将唾腺小心移至 1mol盐酸的恒温小烧杯中 ,2 0～ 30 s;5 )取出唾腺 …     

果蝇唾腺染色体制片方法的改进

1　果蝇的培养培养基为常规的玉米粉培养基 ,培养基要松软、含水量较高、发酵良好。放入 7～ 8对果蝇 ,在 18℃恒温培养。待幼虫出现后 ,将其移至 10～ 12℃恒温培养 ,稍低的温度有利于幼虫的充分生长发育 ,实验时选用肥大的三龄幼虫作为材料 (最好选雌性幼虫 )。2　唾腺的剥离将幼虫放在滴有一滴低渗液 ( 0 .0 75% KCl)的载片口 ,实验者两手各持一枚解剖针 (或大头针 ) ,在解剖镜下左手用解剖针压住幼虫尾端 1/ 3处 ,右手用解剖针自幼虫口沟慢慢地向前拉出 ,一对唾腺也随之被拉出。拉出的唾腺带有脂肪体 ,在低渗液下处理几分钟 ,用解剖针…     

小鼠骨髓细胞的染色体制备

在实验教学中,我们借鉴有关方法,经过多次实践,证明用小鼠骨髓细胞作动物染色体的制备实验,方法简便可靠,结果明显.现介绍如下,供高等院校或中学生物学实验参考. 1.前处理实验用小白鼠(重25克左右),腹腔注射0.1毫升0.1％的秋水仙素溶液. 2.取材注射后2.5—3小时,用乙醚将小鼠麻醉(或直接处死小鼠),立即取出股骨,剔净肌肉. 3.低渗用剪刀将股骨两端剪开,用注射器吸入1毫升0.05M氯化钾低渗液,插入一端,冲洗出骨髓细胞,滴于培养皿中的载玻片上(载玻片置于二根玻棒之上).再加入适量的低渗液,并用滴管展开.盖上培养皿,在37℃下低渗处理20分钟. 4.固定低渗后,往培养皿中缓缓注入甲醇、冰醋酸固定液(3:1),盖上培养皿,固定100分钟.换入无     

蛙类简单的染色体标本制备方法

进行染色体组型分析时,都要制备有丝分裂中期染色体标本。在实验工作中,我用蝌蚪尾部制备染色体标本,方法简便,且效果非常满意。现介绍如下: 1.前处理将刚出卵膜的小蝌蚪放在含有0.2％秋水仙碱的清水中,室温下(25℃左右)培养3小时。 2.低渗将前处理过的蝌蚪尾尖切下,放在蒸馏水或0.075molKCl溶液中30分钟。 3.固定将低渗处理过的尾尖置于固定液[甲醇(或乙醇):冰醋酸=3:1]中固定30分钟。 4.染色压片将经固定的尾尖放在载玻片上,加一     

食虫虻消化系统的研究

1.描述了食虫虻Neoitamus angusticornis Loew.消化系统及附属构造的解剖与组织学。 2.中肠的分泌形式基本上为局泌性。 3.一对唾腺开口于舌, 另有一对下唇内腺位于下唇内部, 作用不明, 但由其位置及原生质嗜碱性类似某些昆虫唾腺中的粘液腺, 可能在刺螫时有润滑口针的作用。     

一种用于染色体观察的改良绒毛细胞直接制备法

为弥补羊水检查时间过晚之不足,1984年 Simoni利用绒毛标本直接制备法观察染色体获 得成功,此后,即日益为人们所注目。我们改良 了绒毛细胞直接制备方法,以胶原酶代替乙酸 处理,对绒毛细胞直接制备法（简称乙酸法）和 改良法（简称胶原酶法）进行了比较。大致过程 如下： 取妊娠6-7周人流绒毛组织50mg左 右,严格挑选后,生理盐水洗净,移人含最终浓 度0.5,ug/ ml秋水仙素的RPMI 1640培养液中 孵育1小时（pH7.2, 370C),然后分成两份。一 份按乙酸处理法进行制片：(1)去除培养液,加 3m11.5外拘椽酸钠溶液低渗15分钟;(2）加人 数滴3:1的甲醇：冰乙酸预固定10分钟;(3）吸 弃固定液,重复固定巧分钟;(4)吸弃固定液, 加入1m160并乙酸水溶液,处理2分钟,即追加 纯甲醇2ml; (5)吸取细胞悬液于离心管内离心 (1500-1800rpm); (6）冰水滴片,风干,Giemsa 染色。另一份按改良的胶原酶法制备染色体,大 致如下：(1)弃培养液加人15ng/ml胶原酶4ml, 孵育15-20分钟（370C); (2）加人4m1生理盐 水,离心（1000rpm),分钟,弃上清液,经0.75% 氯化钾4 ml低渗20分钟（370C),用甲醇冰醋 酸固定液lml预固定后,依上法离心,弃上清 液;(3）甲醇冰醋酸（3:1)重复固定15分钟,混 匀后自然沉降,吸上层细胞悬液离心,如此重复 二次后,再固定15分钟,气干法制片。28例实 验结果见表1,无论是可数分裂相,还是完整分 裂相出现率,胶原酶法均比乙酸法为高,二者间 有显著差异。     

果蝇唾腺染色体的几种染色方法比较

《生物学通报》编委 :您好。笔者对贵刊 2 0 0 2年第 37卷第 2期第 2 3页刊登的“用 Feuglen染色法制作果蝇唾腺染色体”一文感兴趣 ,但笔者认为文中几处不妥 ,比如 1)水浴温度波幅偏高 ;2 )染色时间不确定 ;3)试剂配方不全 ;4 )盐酸的浓度单位有误 ,mol?M?;5 )注意事项影响实验结果表述不清。特撰写下文与各位读者商榷。双翅类昆虫如黑腹果蝇 (Drosophila melanogaster)的唾腺染色体 (Salivary chromosome)比普通染色体大的多 ,处于体细胞同源染色体的配对状态 ,是由于唾腺染色体经过多次复制而并不分开形成的 ,大约有 10 0 0～4 0 0 0根…     

胰酶液在果蝇唾腺染色体制片中的应用

用黑腹果蝇的三龄幼虫作制备唾腺染色体的材料,由于其唾腺小,周围粘有脂肪体,较难去除,很容易把唾腺弄碎;而脂肪体的存在,又影响压片时唾腺染色体的展开。我们发现,用胰酶液对唾腺预处理,易制得理想的压片。现将此法介绍如下: 1.剖取唾腺在载玻片上滴一滴0.7％氯     

意大利蜜蜂工蜂唾腺和中肠消化酶活性比较研究

对意大利蜜蜂 Apis mellifera ligustica L工蜂唾腺和中肠中淀粉酶、蛋白酶、蔗糖酶、果胶酶和海藻糖酶5种消化酶进行活性测定,发现巾肠的蛋门酶和蔗糖酶活性较唾腺高,有显著性差异;唾腺的果胶酶活性较中肠高,有显著性差异;唾腺与中肠的淀粉酶和海藻糖酶没有显著性差异.表明意大利蜜蜂工蜂对蔗糖和蛋白的消化主要由中肠分泌的消化酶来完成,唾腺起辅助作用;对果胶的消化主要在唾腺,中肠起辅助作用;而在淀粉和海藻糖的消化过程中唾腺和中肠都有很重要的作用.     

大、小鼠寄生虫检测方法探讨

大、小鼠在所有实验动物中的地位及用量均占首位。作者于1987年进行了大、小鼠寄生虫检测方法探讨,现报道于下。1检测方法抽查的大小鼠分笼过夜(每笼1鼠),翌日逐个收粪,每鼠同时采用下述四种方法检测,比较各种方法的寄生虫检出率。1.1直接涂片检查法取一张清洁的载玻片,滴一滴生理盐水及一滴0.5—1%的碘液,两滴液体相距约0.8—1.0cm。用竹签挑取少量粪便,先在生理盐水中涂抹,再用此竹签在碘液中涂抹。取一清洁薄盖片盖在此2滴粪便混悬液上,生理盐水与碘液扩散后在盖片中间形成一条分界线。在低倍镜下先检查生理盐水的一半,观察有无滋养体、…     

DNA的重组技术(Ⅳ) 真核细胞高分子量DNA的提取

(一)从离体培养的细胞中提取 1.吸去培养液,用4℃预冷的Tris—生理盐水缓冲液洗细胞1次。Tris—生理盐水的配制是NaCl3g,KCl0.68g,Tris3g,溶于重蒸水,用1N HCl调至pH7.4,加重蒸水到1000毫升。高压蒸汽灭菌15磅,20分钟,贮于4℃。     

丝裂霉素C预防肌腱粘连的实验研究

目的:探讨丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)对肌腱粘连的影响.方法:SD大鼠80只,右足为丝裂霉素C组,左足为生理盐水组.以屈趾肌腱为试验对象,切断后采用改良Kessler法缝合.右足吻合处用0.4mg/ml MMC脑棉片湿敷5分钟,生理盐水反复冲洗3次;左足生理盐水脑棉片湿敷5分钟,生理盐水反复冲洗3次.术后1、2、4、8周处死动物,收集2组屈趾肌腱分别进行大体观察、组织学观察和羟脯氨酸含量测定.结果:丝裂霉素C组肌腱粘连程度较生理盐水组明显减轻,有统计学意义(P＜0.05),羟脯氨酸含量在术后2、4、8周较生理盐水组增高.结论:丝裂霉素C有防止肌腱粘连的作用.     

盐酸布比卡因、透明质酸酶对大鼠在体肌卫星细胞增殖的影响

目的 :研究盐酸布比卡因和透明质酸酶对成年大鼠肌卫星细胞在体增殖的影响。方法 :免疫组化法 ,H .E染色法 ,光镜和电镜观察。结果 :①正常对照组和生理盐水组肌纤维完整 ,有少量Desmin阳性肌卫星细胞 ,面密度值为 0 .66%± 0 .57%和 2 .48%± 1.13 %。生理盐水组较正常对照组无显著差异 (P >0 .0 5)。②透明质酸酶组肌纤维完整 ,Desmin阳性肌卫星细胞数量增加 ,面密度值为 2 .52 %± 1.41% ,较生理盐水组和正常对照组无显著差异(P >0 .0 5)。③盐酸布比卡因组和盐酸布比卡因 +透明质酸酶混合液组均可见大量坏死和溶解的肌纤维 ,并伴有肌卫星细胞的激活、增殖 ,Desmin阳性肌卫星细胞显著增加 ,并有部分融合形成小肌管。面密度值分别为 19.0 1%± 4.74%和 2 2 .41%± 7.64% ,较生理盐水组显著增加 (P <0 .0 1)。结论 :局麻药盐酸布比卡因能引起在体肌卫星细胞的活化、增殖并形成肌管 ,单独透明质酸酶溶液在本实验条件下对在体肌卫星细胞无明显作用     

果蝇幼虫唾液腺脂肪体的剔除

在制作唾液腺染色体装片时,须把脂肪体剔除.我采用1NHCl处理唾液腺后再剔除脂肪体,收到良好效果.现介绍如下:拉出唾液腺后,先剔除幼虫残体,然后吸去生理盐水,在腺体上滴一滴1NHCl,浸2-3分钟,唾液腺和脂肪体由半透明渐变为白色,特别是脂肪体变得完全不透明,轮廓清晰,肉眼即可辩     

丝状固氮蓝藻柱胞鱼腥藻原生质球的培养再生

丝状固氮蓝藻柱胞鱼腥藻 (Anabaena cylindrica)在含 0 .1mol/ L KCl的 Allen液体培养基中培养7～ 9d,90 %以上细胞转化为原生质球或半原生质球 ,对低渗敏感或抗低渗。此种材料经 0 .1%溶菌酶 ,在 2 8℃下处理 3～ 4h,细胞低渗破裂率约 10 0 % ,成为质量较高的原生质球。用 0 .15mol/ L Ca Cl2 液体无机盐培养基培养 ,原生质球再生和分裂。不同原生质球再生不同步 ,最快培养 3 d分裂。再生分裂的主要方式为均等分裂 ,但有不规则分裂和出芽方式 ,再生率在 2 5%以上。     

制备青虾染色体方法新探

1方法1.1秋水仙素注射挑选活动力强、性成熟的青虾,每个体重(5±0.2)g,确定秋水仙素的注射剂量为0.1mL,注射质量分数分别是1×10-3mg/g、2×10-3mg/g、3×10-3mg/g4×10-3mg/g、5×10-3mg/g、6×10-3mg/g(体重),用微量注射器于第1与第2腹足之间腹肌注射,对照组注射0.1mL的生理盐水,作用时间24h,取出卵巢、精巢、触角腺、肝胰腺、心脏、鳃,分别制片。1.2细胞低渗处理除去表面脂肪,用生理盐水洗涤后,转移到尖底离心管里,加入适量的生理盐水,超声震荡仪打散细胞,在进行1500r/min的离心8min。然后用吸管小心吸去上清液。加入0.4%KCl至8mL,于37…     

黑胡鞘尾蝠和大蹄蝠的染色体分析

1.材料与方法本文所用黑胡鞘尾蝠(Taphozous melanopogon)和大蹄幅(Hipposidaros armiger)系1990年3月在海南省坝王岺石灰岩洞中捕取。染色体标本采用秋水仙素—低渗—空气干燥直接制片法。秋水仙素量按1微克/克体重计算,实验材料取臂骨骨髓,经0.4％KCl低渗30分钟。标本用1/10 Giemsa液染色20分钟。光镜下选取10个分散好的中期分裂相进行摄影、剪贴、测量,根据Levan等(1964)按臂比指数进行染色体分类,依着丝粒位置和相对长度排列编号。     

pICln蛋白与低渗透压关系的初步研究

目的: 初步探讨pICln在低渗透压下的作用和变化.方法: 低渗处理pICln表达的大肠杆菌及LLC-PK1细胞,测定大肠杆菌培养物的光密度及pICln在LLC-PK1细胞的胞质及膜两相的分布.结果: pICln表达的大肠杆菌的繁殖率明显高于对照组;低渗培养时LLC-PK1细胞的pICln在胞质中明显增加.结论: pICln具有抗肿胀、保护细胞的作用,它可能作为胞质调节蛋白来对抗低渗.     

磁处理党参药液对小鼠肠推进运动影响的药效研究

目的 :观察磁处理党参药液对小鼠肠推进运动的影响。方法 :实验分为非磁处理党参药液对照组 ,生理盐水对照组 ,0 .1T磁处理试验组和 0 .2 5T磁处理药液试验组 ,采用灌胃给药的途径进行实验观察。结果 :0 .1T和 0 .2 5T磁处理药液组和生理盐水对照组相比较 ,试验组具有显著促进小鼠肠的炭末推进作用 (p <0 .0 1 ) ;非磁处理与磁处理党参药液组相比较 ,0 .1T和 0 .2 5T磁处理药液组对小肠的炭末推进率有着显著的抑制作用 (p <0 .0 1 )。结论 :党参磁处理药液对小鼠肠的推进有明显作用。