蛙类简单的染色体标本制备方法

进行染色体组型分析时,都要制备有丝分裂中期染色体标本。在实验工作中,我用蝌蚪尾部制备染色体标本,方法简便,且效果非常满意。现介绍如下: 1.前处理将刚出卵膜的小蝌蚪放在含有0.2％秋水仙碱的清水中,室温下(25℃左右)培养3小时。 2.低渗将前处理过的蝌蚪尾尖切下,放在蒸馏水或0.075molKCl溶液中30分钟。 3.固定将低渗处理过的尾尖置于固定液[甲醇(或乙醇):冰醋酸=3:1]中固定30分钟。 4.染色压片将经固定的尾尖放在载玻片上,加一     

从小白鼠血液制备染色体的快速方法

每只小白鼠注射(I.P)0.1毫升秋水仙素(0.6毫升/毫升),四小时后杀死。从心脏取血,用肝素抗凝。取10滴左右血液置于一刻度离心管中,管内预先装好3—5毫升0.7％柠檬酸钠,放在37℃下温浴,摇匀后加一滴稳定的玻璃酸酶(150N.F.单位/毫升)。在37℃下温浴20分钟。用温浴的最后五分钟配制3∶1甲醇-醋酸固定液。温浴完毕时加2滴固定剂并温和地摇匀。600转离心机离心5分钟弃去上清液(留1毫升左右)再加3毫升固定剂,加塞后放置冰箱30分钟。在600转离心机离心5分钟弃去上清液(留1毫升),再加预冷固定液3毫升,用吸管来回搅匀。离心弃去上清液。再加2毫升冷固定剂,并在冰箱中过夜。第二天离心后弃去上清液,用甲醇洗,吸去甲醇,取一     

用印片法制青霉和曲霉的永久封片

(一)材料和方法 1.菌种:青霉(Penicillium chrysogenum),黑曲霉(Aspergillus niger) 2.培养:将青霉和黑曲霉斜面制成悬液,吸0.1ml于马铃薯培养基(马铃薯200克,蔗糖20克,琼脂粉11克,水1000毫升,15磅/吋~2灭菌30分钟)平板上涂布,于28℃培养2天。 3.制片:取两块干净载玻片,在其中一块上涂一层薄胶层(胶为光学树脂),然后用解剖针在青霉或曲霉平板上挖一小块带菌琼脂(约0.5厘米~2),将琼脂块放在薄胶层上(培养面朝下),用另一块载玻片在琼脂块上轻轻按压,然后将琼脂块小心弃去。将印有菌迹的载玻片     

以龙胆紫染硫酸酯多醣类的组织化学意义

甲、方法:1)固定于任何固定液皆可,但以酒精为最合适。石蜡切片,厚3微来。切片脱蜡,降酒精,至蒸馏水。2)以龙胆紫(gentian violet)水溶液1∶250,000或1∶1,280,000染色24小时(即0.25毫升0.1%龙胆紫贮存液加入100毫升蒸馏水内;或以0.1毫升0.1%龙胆紫液加入128毫升蒸馏水内)。3)滤纸吸干切片,然后在亚尼林二甲苯(anilinc-xylene)1∶1或1∶2液内脱色及脱水约5分钟(或稍长),直至紫色不再从切片上脱下为止。以二甲苯洗2—3次,用树胶封片。若染透明质酸(hyaluronic anid)可以甘油封片。     

用新鲜材料观察四种基本组织

从刚处死的动物身上取下所需的新鲜材料,观察动物四种基本组织的方法,取材容易,操作简便,不需要特殊药品及仪器,对缺少切片、标本的中学是很有用的。实验动物蟾蜍或蛙、小鼠都可。一般器材显微镜、天秤、载玻片、盖玻片、细口玻璃瓶、解剖器、大头针、青霉素小瓶、软木轮、培养皿(或用药瓶的塑料盖代用)、滤纸、大针、吸管。药品 30—40%氢氧化钠水溶液(以33％最佳),1%硝酸银水溶液,0.9%生理盐水、蒸馏水、紫药水或碘酒(市售)、任格(Ringer)氏液(两栖类生理盐水)。实验方法 1.处死动物:蟾蜍(或蛙)用探针毁脑和脊髓。小鼠用颈椎脱位法。 2.取材和观察上皮组织: 单层扁平细胞及细胞间质的观察取蟾蜍(或蛙、小鼠)肠系膜一块,铺展于带孔的软木轮上,四周用大头针固定。用蒸馏水洗肠系膜2—3次,洗毕,将此软木轮放在培养皿内(或塑料瓶盖),然后在肠系膜上滴入1%硝酸银溶液(液体没过肠系     

鱼类染色体的观察

在早春到市场上买性成熟的活雄鲤一条,取其精巢(性腺已发育到第Ⅳ期),做染色体的观察。 1.固定将精巢放入Carnoy固定液(无水酒精3份,冰醋酸1份),固定3小时,再换入70％酒精中。 2.染色用镊子和解剖针仔细取出精巢内的精细小管(细如白发),一小段,放手掌上剔去周围异物之后,放置载玻片上,加醋酸洋红(45％醋酸100毫升加洋红1克煮沸、冷却、过滤即成),染色2-3小时。     

水螅神经网永久标本制片法

一、麻醉将一条水螅放入盛有蒸馏水的培养皿内(水以刚没过水螅为准),静等水螅斜着伸展,水螅触手也伸展自如后,用10毫升的注射器,吸取自配盐酸丁卡因0.3％麻醉液(注1),将注射针头直接对准水     

涡虫梯形神经系统整体制片法

1.材料准备:将培养在于浮溪水中的涡虫放到暗室饿一周,使它体表色素逐渐褪色。2.杀死与固定:用毛笔取涡虫放载玻片上,俟涡虫完全伸展后,以吸管吸固定液(10%冰醋酸),从涡虫尾部迅速浇至头部浇死,见涡虫身体先卷曲后稍伸展时,立即用另一支毛笔轻轻将涡虫首尾位置移正摊平,最好立即再加一载玻片压上使其身体压平,再取下然后将腹面朝上。固定时间为5—10分钟,直到身体透明为止。     

用减压法固定处理草履虫

在制作草履虫玻片标本时,在常压下对草履虫进行固定处理,虫体容易收缩变形,效果不佳。采用抽真空减压的方法,对草履虫进行固定处理,可避免上述缺点,效果比较好。制作过程简述如下: 1.离心浓缩把含有草履虫的培养液,用2000—3000转离心5—10分钟,制取出浓缩的草履虫液备用。 2.分装处置取浓缩的草履虫液50—100毫升,倒入大培养皿(直径100—150毫米)内,并将皿放到真空干燥器内。另用指管或安瓶装满40％甲醛或     

制作植物细胞有丝分裂装片的小经验

在洋葱根尖有丝分裂切片时,从固定液中取出洋葱根尖,在10％盐酸溶液中解离10分钟,经清水漂洗后放在载玻片上。用镊子(或刀片)截取根尖乳白色部分(取乳白色的三分之二),剔除其余部分。用吸水纸吸去根尖周围的水。用镊子将截取的根尖充分捣烂(根尖在     

果蝇唾腺染色体的观察和制片方法的改进

几年来我们在教学中进行了多方面的实验探索,在果蝇唾腺制片方法上加以改进,采用加蔗糖液保色,树脂胶封边,制备一种半永久制片标本。操作过程如下: 1.取出唾腺,在其上加2滴(37℃)蒸馏水低渗处理10～20分钟,使唾腺细胞涨大有利于染色体的分散。 2.用滤纸吸去蒸馏水,加1滴1N HCl解离8～15分钟(时间随当时的温度而定),吸去解离液,用蒸馏水轻轻冲洗2～3次,将水吸净。     

提取及验证血液中纤维蛋白原的简易方法

取新鲜的动物血液(如猪的血液)200毫升,分别置入100毫升烧杯A和B中(A为对照),立即用筷子按顺时针或逆时针方向(不要改变方向)搅拌B杯中血液.几分钟后,筷子上便缠绕一团丝状物,将其拭入培养皿中.重复以上操作,直至不再有丝状物时为止.用吸管分别吸取A、B烧杯中的血液,置于洁净的载玻     

草履虫的纤毛染色方法

(一)杀死固定 1.固定液配制酒精95％5毫升,苦味酸(饱和液)15毫升,冰醋酸20毫升,甲醛60毫升,蒸馏水100毫升。将上面四种药物混合后,再加等量的蒸馏水稀释,即成200毫升的固定液。如要少配或多配,可依次按1∶3∶4∶12∶20的比例进行。此固定液可长期保存,效果不变,也适应其他原生动物和动物组织的固定。 2.固定的方法用吸管吸取培养草履虫的烧杯边缘的培养液,可得到高浓度的草履虫,投入离心管中,然后以9∶1的比例加入固定液(即草履虫培养液9份,固定液1     

一种用于染色体观察的改良绒毛细胞直接制备法

为弥补羊水检查时间过晚之不足,1984年 Simoni利用绒毛标本直接制备法观察染色体获 得成功,此后,即日益为人们所注目。我们改良 了绒毛细胞直接制备方法,以胶原酶代替乙酸 处理,对绒毛细胞直接制备法（简称乙酸法）和 改良法（简称胶原酶法）进行了比较。大致过程 如下： 取妊娠6-7周人流绒毛组织50mg左 右,严格挑选后,生理盐水洗净,移人含最终浓 度0.5,ug/ ml秋水仙素的RPMI 1640培养液中 孵育1小时（pH7.2, 370C),然后分成两份。一 份按乙酸处理法进行制片：(1)去除培养液,加 3m11.5外拘椽酸钠溶液低渗15分钟;(2）加人 数滴3:1的甲醇：冰乙酸预固定10分钟;(3）吸 弃固定液,重复固定巧分钟;(4)吸弃固定液, 加入1m160并乙酸水溶液,处理2分钟,即追加 纯甲醇2ml; (5)吸取细胞悬液于离心管内离心 (1500-1800rpm); (6）冰水滴片,风干,Giemsa 染色。另一份按改良的胶原酶法制备染色体,大 致如下：(1)弃培养液加人15ng/ml胶原酶4ml, 孵育15-20分钟（370C); (2）加人4m1生理盐 水,离心（1000rpm),分钟,弃上清液,经0.75% 氯化钾4 ml低渗20分钟（370C),用甲醇冰醋 酸固定液lml预固定后,依上法离心,弃上清 液;(3）甲醇冰醋酸（3:1)重复固定15分钟,混 匀后自然沉降,吸上层细胞悬液离心,如此重复 二次后,再固定15分钟,气干法制片。28例实 验结果见表1,无论是可数分裂相,还是完整分 裂相出现率,胶原酶法均比乙酸法为高,二者间 有显著差异。     

酶的微波孵育

我们在酶组织细胞化学技术中,应用微波辐射对生物组织进行快速孵育处理,获得满意的效果。具体操作;将小鼠断椎处死后立即打开腹腔,取出心、肾等组织,用刀片切成1mm~3左右的小块,放入2％多聚甲醛和2.5％戊二醛混合固定液中固定2小时。再用0.1mol/L二甲胂酸钠缓冲液浸洗3次,每次10分钟。     

花粉体外萌发的永久装片制作法

在大量花粉活力测定中,要做到及时计数是很困难的,因此需要在低温(0～4℃)下保存或用固定液固定,也可照相计数。但依赖低温和固定液保存时间很短,显微照相又费事。我们针对花粉萌发和萌发后的保存做了一定改进,实验步骤如下: 1.在上午10点左右采摘开放而花药未开裂的花朵,带回实验室,用镊子取下开裂的花药,将花粉搕于载玻片上,同时取培养液(15％蔗糖,10ppm硼酸,1％～2％琼脂)滴在载玻片上。此时,花粉均匀且密集于载玻片中部。     

用改进的载玻片做装片观察草履虫效果好

先将载玻片上表面涂一层融化的石蜡,干结后,遂定点剥离;要使剥后露出的玻面成直径约为1毫米的圆面为宜(或条形,条形的长不超过2毫米,宽不超过1毫米)。然后用滴管滴注氢氟酸(HE)(用后将滴管冲洗干净),再小心将其置于闭合容器内(最好用培养皿,防HE挥发)。注意向培养皿放载片时勿倾斜,以防溢流。待静置2—4小时后取出,冲洗,最后在热水中擦     

一种快速观察四膜虫纤毛的方法

器材与药品离心机,三用水箱,天平,染色缸。席夫试剂(schiff reagent),漂白液,乙醇二甲苯,磷酸缓冲液(PH7.2)。亮绿(溶剂是95％的乙醇) 步骤 1.取四膜虫浮液3—5ml,离心5分钟(800—1000转/分),去上清液,留沉淀物0.3—0.5ml。 2.用PH7.2磷酸缓冲液洗涤,离心5分钟(800—1000转/分),去上清液,留沉淀物0.3—0.5ml。 3.涂片。用甲醇固定液固定。 4.水解处理。室温下先在1NHCl中处理1分钟,后移至1NHCl(60℃)中处理7—9分钟(水解     

观察食用菌菌丝生长和子实体发育的简便方法

为了让学生在学习“食用真菌”知识时,能观察到菌丝生长和子实体发育的过程,经过反复实验,采用金针菇培养皿平面培养法,可在较短时间内达到观察目的,效果良好。培养基配制去皮马铃薯煮出液20毫升,葡萄糖2克,硫酸镁0.05克,磷酸二氢钾0.1克,琼脂2克,水100毫升。把配制好的培养基装入三角烧瓶中,加棉塞外包牛皮纸,经1.5公斤/厘米~2高压灭菌25分钟,冷却备用。并将洗净的中号(直径9厘米左右)培养皿若干套也同时高压灭菌。     

果蝇唾腺染色体制片方法的改进

1　果蝇的培养培养基为常规的玉米粉培养基 ,培养基要松软、含水量较高、发酵良好。放入 7～ 8对果蝇 ,在 18℃恒温培养。待幼虫出现后 ,将其移至 10～ 12℃恒温培养 ,稍低的温度有利于幼虫的充分生长发育 ,实验时选用肥大的三龄幼虫作为材料 (最好选雌性幼虫 )。2　唾腺的剥离将幼虫放在滴有一滴低渗液 ( 0 .0 75% KCl)的载片口 ,实验者两手各持一枚解剖针 (或大头针 ) ,在解剖镜下左手用解剖针压住幼虫尾端 1/ 3处 ,右手用解剖针自幼虫口沟慢慢地向前拉出 ,一对唾腺也随之被拉出。拉出的唾腺带有脂肪体 ,在低渗液下处理几分钟 ,用解剖针…