具抗菌活性海洋放线菌菌株JMC 06001的分离和鉴定

从湛江硇洲岛高盐泥样中分离到一株微嗜盐放线菌JMC 06001,该菌株的发酵产物具有很强的抗菌活性.菌株JMC 06001在多数培养基上生长良好,气生菌丝白色,基内菌丝淡黄色至浅棕色.在燕麦琼脂(ISP 3)、甘油-天门冬酰胺琼脂(ISP 5)、葡萄糖-天门冬酰胺琼脂及马铃薯浸汁琼脂上产生黄色可溶性色素,在酵母膏-麦芽膏琼脂(ISP2)、蛋白胨酵母膏铁盐琼脂(ISP6)和营养琼脂上产生棕色可溶性色素.生长温度范围为4℃～40℃,最适生长温度28℃.生长pH范围为6.0～9.0,最适pH 7.0.能在含0～1.5 mol/L NaCl的培养基上生长,最适生长盐浓度为0.2～0.5 mol/L NaCl.根据其形态学特征、生理生化特征、细胞化学分类特征和基于16S rRNA基因序列的系统发育分析结果,菌株JMC 06001被鉴定为链霉菌属(Streptomyces)的有效发表种波赛链霉菌(S.peucetius)的一个菌株.     

一株生防圆突起链霉菌的分类鉴定

菌株SCY311是从河南省凤凰山土壤样品中分离到的对多种植物病原真菌具有拮抗活性的一株放线菌。为了明确其分类地位, 在形态特征、培养特征、生理生化特征、细胞壁组分测定等传统分类学方法的基础上, 测定和分析了菌株的16S rRNA基因序列。结果表明, 菌株SCY311在高氏一号培养基上生长良好, 基内菌丝呈褐色; 气生菌丝灰色至鼠灰色, 不产生可溶性色素, 无吸水现象; 孢子链卷曲, 末端形成闭合或开放螺旋; 孢子椭圆或圆柱状, 表面形成结节状突起; 生理生化特征和在国际链霉菌计划(ISP)培养基上的培养特     

高望界土壤放线菌抗菌活性筛选及生物学特征

为了从土壤环境中筛选产生抗菌活性物质的放线菌,采用琼脂扩散法对分离自湖南省高望界自然保护区森林土壤的169株放线菌进行抗菌活性检测,采用16S RNA基因序列分析法进行系统发育分析,采用常规方法进行生物学特性研究。结果表明,有47株受试菌株的发酵产物显示抗菌活性阳性(27.8%),其中6株具有较强抗菌活性。形态观察结果表明,这6株菌株均为典型的产丝产孢放线菌,在多数培养基上生长良好,气生菌丝和孢子丝丰富。系统发育分析表明,6株菌株均属于链霉菌属(Streptomyces),归为5个物种。菌株JSM 147612、JSM 147786、JSM 147831和JSM 147846分别与链霉菌属的已知物种S.violascens(序列相似性为99.93%)、S.malachitospinus(99.65%)、S.anulatus(99.72%)和S.aureus(99.38%)系统发育关系最为密切;菌株JSM 147823和JSM 147842之间的序列相似性为99.86%,应该属于同一物种,与它们系统发育关系最为密切的是S.albidoflavus(相似性分别为99.72%和99.58%)。     

2株具抗菌活性的稀有放线菌的筛选和鉴定

从药用植物根际土壤样品中分离得到了一批放线菌菌株,通过对其进行了抗茵活性筛选,发现菌株45725具有较好的抗耻垢分枝杆菌活性,菌株06-2230具有较强的抗绿脓杆菌活性。菌株45725和06-2230在酵母-麦芽膏琼脂（ISP2）、燕麦琼脂（ISP3）、无机盐淀粉琼脂培养基（ISP4）、葡萄糖天冬素琼脂培养基（ISP5）和马铃薯培养基（PDA）上生长良好,基生菌丝丰富,无气生菌丝。2株菌的最适生长温度为28℃,最适生长pH值7．0～7．5。综合2株菌的形态学、生理生化、细胞化学分类特征和基于16SrRNA基因序列的系统发育分析和DNA—DNA杂交结果,菌株45725和06—2230分别是多形态放线菌属的2个不同种。     

一株产蓝色素链霉菌18-A-5的鉴定与系统发育分析

从原始热带雨林土壤中,分离到一株产蓝色色素菌株18-A-5,对其进行了系统分类学研究。形态学特征观察表明,在高氏合成一号培养基上初产蓝绿色色素,日久为深蓝色,基内菌丝蓝色,气生菌丝灰白色,产灰色孢子,孢子丝直或柔曲,形成长孢子链,孢子圆柱形。其DNA的G＋C摩尔分数为62.4%,16S rDNA序列分析结果(GenBank登陆号为EU054353),18-A-5与生靛链霉菌Streptomyces indigoferus ATCC23924^T 、草绿色链霉菌Streptomyces herbaricolor ATCC23924^T具有极高的同源性,达100％,聚类分析表明,18-A-5与生靛链霉菌Streptomyces indigoferus、草绿色链霉菌Streptomyces herbaricolor两株菌聚类在一起,分支置信度为74%。结合生理生化特性、细胞壁化学组成分析、脂肪酸分析等将菌株18-A-5定名为草绿色链霉菌Streptomyces herbaricolor。并对该蓝绿色可溶性色素性质进行了耐酸碱性、热稳定性、抗菌谱等初步分析。     

一株根际放线菌的分离鉴定及其生物活性初探

从四川重庆药用植物蒿本根际土中分离到一株放线菌I06-02658,该菌株的发酵产物具有Caspase7抑制活性。菌株I06-02658在供试培养基上生长良好,形成丰富的基内菌丝,颜色从乳白到肉粉。在部分供试培养基上形成丰富的气生菌丝,产生浅黄至浅粉色可溶性色素。系统发育、化学分类特征、形态特征、生理生化特性等分析表明菌株I06-02658是糖霉菌属(Glycomyces)的一个菌株。     

一株具有抗肿瘤活性的海洋放线菌的分离和鉴定

海洋放线菌ACMA006的发酵产物具有很强的抗肿瘤活性和较好的抑菌效果, 但对人正常细胞毒性较弱。该菌株在大多数培养基上生长良好, 产生可溶性色素;基质菌丝在培养早期出现横隔, 随后发生断裂;最适生长温度为28°C。基于16S rDNA序列的系统发育分析表明, 菌株ACMA006属于链霉菌属(Streptomyces)的成员, 与该属的合格发表种卡伍尔链霉菌华盛顿亚种(S.cavourensis subsp. washingtonensis)的16S rDNA序列相似性最高, 同源性达100%, 但在部分形态特征和理化特性上存在较大差异。初步确定ACMA006属于卡伍尔链霉菌华盛顿亚种的一个海洋变种。     

青海盐碱环境中具抗肿瘤活性放线菌的筛选和多样性研究

从我国青海省采集盐碱土样或泥样,用添加1.0~3.0mol/L NaCl的GPY琼脂培养基和ISP2琼脂培养基分离到145株典型放线菌菌株。采用6种肿瘤细胞株对分离菌株的发酵产物进行体外筛选,得到26株抗肿瘤活性阳性菌株(17.9%),19株为拟诺卡氏属(Nocardiopsis)菌株,7株为链霉菌属(Streptomyces)菌株。在抗肿瘤活性、形态特征、生理生化特性和全细胞水解物氨基酸组分分析等实验结果的基础上,选取差异较大的8株抗肿瘤活性阳性菌株进行16S rRNA基因序列测定和系统发育多样性分析。结果表明,2株属于链霉菌属(Streptomyces)的1个已知物种和1个潜在新种;6株属于拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis),可能代表该属的4个新种。研究表明青海盐碱环境中存在产生抗肿瘤活性物质的重要放线菌资源,也提示其中蕴藏着较丰富的微生物多样性。     

哈茨木霉的培养及其对烟草疫霉生长的抑制研究*

哈茨木霉是一类重要的植病生防因子。哈茨木霉TH-1分别在PDA培养基、麦芽糖培养基、查氏培养基和琼脂培养基上培养均能产孢,其中PDA培养基为最适培养基。PDA培养基上,菌丝生长适宜温度27.5℃~35℃,最适温度32.5℃,产孢最适温度27.5℃。菌丝生长适宜pH值为3~7,产孢适宜pH值为5~9,生长与产孢最适pH值为5。光照对菌丝生长影响不大但明显影响菌株的产孢数量,光照时间越长产孢量越大。对峙培养试验表明TH-1明显抑制疫霉菌的生长速率,其无菌滤液明显抑制烟草疫霉菌游动孢子的萌发,并抑制游动孢子芽管     

具抗肿瘤活性放线菌菌株YIM 90022的分离和系统发育分析

从青海盐碱土壤样品中分离到一株兼性嗜碱放线菌YIM 90022,该菌株的发酵产物具有很强的体外抗胃癌、肺癌、乳腺癌、皮肤癌、肾癌和子宫癌肿瘤细胞株活性。基于16S rRNA基因序列的系统发育分析表明,菌株YIM90022属于拟诺卡氏属(Nocardiopsis)的成员,与该属的4个有效发表种N.exhalansDSM 44407T,N.prasinaDSM43845T,N.metallicusDSM 44598T和N.listeriDSM 40297T系统发育关系最密切,与其分别以98.8%,98.5%,98.4%和97.8%的16S rRNA基因核苷酸序列相似性聚为一簇。但菌株YIM 90022不与这4个有效种中任何一个单独相聚,形成了一个独立亚分枝。结合形态特征、生理生化特性、细胞化学分类特征,以及rep-PCR基因指纹分析等方面的研究结果,菌株YIM 90022可能为拟诺卡氏菌属的一个潜在新种。菌株YIM 90022在大多数培养基上生长良好,气生菌丝和基内菌丝丰富,在酵母膏麦芽膏琼脂、燕麦片琼脂等培养基中产生可溶性色素。生长pH范围6.0~12.0,最适pH 8.5;能在含0~15%NaCl(W/V)的培养基上生长。     

草菇Vvrin1基因RNAi转化子的筛选及其转录组分析

草菇味道鲜美,食用价值高,是我国主要栽培的商业食用菌之一。MADS-box转录因子对真核生物的生长发育和信号传导具有关键性的调控作用。本研究通过农杆菌介导的方法获得5个草菇MADS-box转录因子Vvrin1基因的RNA干扰转化子,并进一步对转化子的表型进行分析,发现5个转化子菌丝在PDA固体培养基和栽培料中的生长速度均显著小于（P<0.05）转化野生型菌株H1521,且转化子菌丝颜色呈黄白色,较粗,较稀疏。出菇实验发现,RNA干扰转化子生长停滞在菌丝阶段未能形成原基出菇。转化子菌丝阶段的转录组测序数据发现,上调基因主要富集在核糖体、氨基酸生物合成和次生代谢物的生物合成等途径;下调基因主要富集在MAPK信号通路、脂肪酸氧化、磷脂酰肌醇信号系统等途径。进一步推测MADS-box转录因子Vvrin1基因表达水平降低会影响MAPK信号通路和磷脂酰肌醇信号通路的表达,进而降低菌丝生长速度,影响原基形成。     

一株抗万古霉素耐药菌的抗生素产生菌AR1148的鉴定

从土壤中分离得到一株放线菌AR1148,其代谢产物对万古霉素耐药肠球菌有较明显的抑菌活性。该菌株的基内菌丝无横隔,气生菌丝丰茂,分枝较好,孢子椭圆形,表面光滑。菌丝细胞壁工型,含有L-2,6-二氨基庚二酸（LL-DAP）和甘氨酸。菌株AR1148归属于链霉菌属金色类群。根据16SrDNA序列分析,该菌株与现有种差异明显,聚类在不同的分支。定名为Streptomyces sp．AR1148。     

核磁共振,磁化水对双孢蘑菇176菌株同工酶的影响

用普通水制备马铃薯葡萄糖培养基（ＰＤＡ）和用磁化水制备马铃薯葡萄糖培养基（ＭＰＤＡ）,分别培养双孢蘑菇１７６ 菌株。用不同磁场强度的核磁共振处理这些双孢蘑菇的菌丝体,以不处理为对照（ＣＫ）。取磁场处理后５ 小时的菌丝体进行酯酶同工酶（ＥＳＴ）,多酚氧化酶同工酶（ＰＯ）酶谱分析,并转接ＰＤＡ 和ＭＰＤＡ上培养１４ 天,再次分析同工酶谱。结果表明：０．１Ｔ磁场强度对双孢蘑菇ＥＳＴ和ＰＯ 产生的影响最明显,可使某些酶带活性降低或消失,某些酶带活性增强甚至诱发出ＰＯ的新酶带。但这些同工酶酶谱所发生的变化,需要培养较长时间才能明显表现出来。核磁共振处理后转接到ＰＤＡ 上培养,会使已发生变化的同工酶,变化更显著,用ＭＰＤＡ 培养双孢蘑菇ＥＳＴ酶谱发生改变,但是能使ＰＯ的酶活性增强。     

红曲霉原生质体的制备、再生及其遗传转化系统

原生质体是研究和建立真菌遗传转化系统的重要工具。为了建立原生质体介导的红曲霉遗传转化系统,考察了各种细胞壁裂解酶和渗透压稳定剂等对红曲霉原生质体形成和再生的影响。将红曲霉分生孢子在铺有玻璃纸的平板上30℃培养30~40 h收获的菌丝体最有利于原生质体的形成和释放。红曲霉菌丝体形成和释放原生质体最适裂解酶和酶解时间分别为：0.3 % lysing enzyme、0.1 % cellulase和1 % snailase的酶组合,30℃作用2.5 h;最适渗透压稳定剂是：1mol /L MgSO4。最适合原生质体再生的培养基为含0.6 mol/L蔗糖的CM培养基。原生质体液涂布单层再生培养基的方法,再生率最高,菌株M34和N18分别为8.5 %和36.4 %。在PEG和CaCl2存在下,以潮霉素B为抗生素选择标记,用质粒pBC-Hygro和pNL1共转化菌株M34原生质体,每微克DNA克获得100个稳定转化子。     

一株产酶真菌Phaeophlebiopsis sp.转录组分析

对从药渣中分离的真菌ZYJHYZ254进行鉴定及产酶活性研究,从转录组分析菌株不同生长时期差异表达基因对其生长发育及产酶调控的影响,以筛选高产木质纤维素水解酶真菌,寻找调控关键基因。鉴定ZYJHYZ254为拟暗射脉菌Phaeophlebiopsis sp.,产酶在第5-7天最高。从生长3 d与7 d的菌丝中共检测到1 232个差异基因,以3 d的菌丝为对照,显著上调、下调基因分别有826及406个,基因注释和GO、KEGG功能富集分析结果表明差异表达基因主要与蛋白质合成、代谢及酶合成相关。此外,共有387个CAZymes基因表达,GH数量最多,约占49.61%,其次为AA (97)与GT (62),约占25.06%与16.02%。GH16 (24个)占GH的12.50%,含量最多,主要编码葡萄糖苷酶、木聚糖酶等,AA中AA3 (37个)占比38.14%,编码氧化酶、脱氢酶等。结果表明ZYJHYZ254中生长3 d与7 d的菌丝经功能富集分析发现差异表达基因主要与蛋白质合成、代谢,以及酶合成相关。进一步研究发现在两个生长时期中CAZymes基因表达最多的是GH16与AA3,预示了该菌葡萄糖苷酶、木聚糖酶、β-半乳糖苷酶、氧化酶与脱氢酶含量最丰富,对降解特殊生物质中的木质纤维素具有重要意义。     

Apparent degradation of 1,1,1-trichloro-2,2-bis(p-chlorophenyl)ethane (DDT) by a Cladosporium sp.

Cladosporium sp. strain AJR³18,501 was isolated from DDT-contaminated soil by its ability to decolourise the polymeric dye, Poly R-478. When inoculated into potato/dextrose broth containing 100 mg of DDT l^–1, a 21% decrease in DDT concentration was observed 12 days after its addition, however, no transformation products were detected by gas chromatography. TLC of culture medium and mycelia extracts revealed 1,1-dichloro-2,2-bis(p-chlorophenyl)ethane and five unknown transformation products associated with the mycelia.     

Isolating Mortierella alpina strains of high yield of arachidonic acid

AIMS: To develop a fast isolation method for arachidonic acid-producing fungi of high yield. METHODS AND RESULTS: Relation between the staining degree of mycelia of Mortierella alpina stained with triphenyltetrazolium chloride (TTC) and arachidonic acid content in the fungal lipids was investigated. Results showed that staining degree of mycelia stained with TTC increased when arachidonic acid content in mycelia lipids increased. This finding was used to isolate strains of high arachidonic acid yield. Arachidonic acid producing fungi were selectively isolated from soil at a low temperature of 4 degrees C and the mycelia of these isolates were stained with TTC. CONCLUSIONS: The strain M. alpina M6 that had the highest staining degree had the highest arachidonic acid content (72.3%). The yield of arachidonic acid in this strain reached 4.82 g l(-1). SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: A fast and effective method to isolate strains of high arachidonic acid yield was established according to the finding that staining degree of mycelia of M. alpina was positively correlated with arachidonic acid content in mycelia lipid.     

Identification of a sterol mutant of Neurospora crassa deficient in delta 14,15-reductase activity.

A mutant (erg-3) of Neurospora crassa resistant to the polyene antibiotic nystatin was compared with its sensitive, wild-type parent to detect differences in sterol composition using gas chromatography-mass spectrometry. The major sterol in wild-type mycelia, comprising 80% of the total, was ergosterol. The major sterols in mutant mycelia, comprising 86% of the total, were delta 8,14-sterols. It is proposed that the nystatin-resistant strain is unable to synthesize ergosterol because it lacks delta 14,15-reductase activity as a result of a mutation in the erg-3 gene.     

菌龄与培养基组分对曲霉原生质体释放的影响

培养基组分显著影响曲霉菌丝原生质体的释放,降低培养基中碳素或氮素养分供给量能显著促进原生质体的释放,且降低碳素养分的促效更大。菌龄与原生质体释放量之间的关系因培养基种类而异,在完全培养基上营养体生物量累积曲线具典型正S型曲线特征,原生质体释放量与菌龄呈明显反比例关系,在本研究条件下12 h龄固培菌丝体最宜制备原生质体。在酪素培养基上,原生质体释放量与菌龄无关,12~26 h菌龄期间的固培菌丝体均可释放出大量原生质体。     

微紫青霉菌Penicillium janthinellum菌株GXCR吸附废水中Cd2+的研究

研究了5种不同预处理方式对丝状真菌微紫青霉菌Penicillium janthinellum菌株 GXCR的Cd2+吸附的影响。结果表明,高温（80℃）、去离子水中的匀浆化、匀浆+碱化（NaOH,0.5mol/L）（简称匀浆碱化）和匀浆+30%二甲基亚砜处理均能提高菌体的吸附率,其中匀浆碱化处理后菌体的吸附效果最佳,吸附增量达到117.96%;匀浆+酸化（H2SO4, 0.5mol/L）处理则导致菌体的Cd2+吸附能力显著下降。匀浆碱化菌体吸附符合典型的Langmuir方程,表明该菌对Cd2+的吸附可能是以表面吸附为主的吸附行为。在吸附-解吸附循环4次后匀浆碱化菌体的Cd2+的吸附效率为58.01%。红外光谱分析显示匀浆碱化处理主要影响菌体表面分子的–OH和C=O基团,其中与Cd2+结合的主要基团是–OH。结果也表明,匀浆碱化菌体具有处理电镀废水的潜能。