利用竞争型ELISA法鉴定硒诱导的金属硫蛋白

利用竞争型ELISA法鉴定硒诱导的金属硫蛋白 (MT) ,发现对照组小鼠肝脏MT含量为 (2 .47± 0 .90 )μg/g湿重组织 ,硫酸锌组小鼠肝脏MT含量为 (8.15± 2 .2 0 ) μg/ g湿重组织 ,硒麦芽组小鼠肝脏MT含量为(12 .80± 1.44 ) μg/ g湿重组织。锌组和硒组的MT含量与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 5 )。硒组MT含量要显著高于锌组的MT含量 (P <0 .0 5 )。     

硒与金属硫蛋白及对小鼠肝损伤的防护作用研究

应用蛋白质芯片和RT-PCR技术研究硒对小鼠肝脏金属硫蛋白（Metallothionein, MT）的诱导表达;以蛋白质芯片技术为主要实验手段研究CCl4诱导的小鼠肝脏损伤后血清及肝脏蛋白质图谱变化,寻找小鼠血清及肝脏组织损伤标志物,同时观察有机硒(麦硒康,Organ-Se)对损伤的防护作用,结果表明与对照组相比给予有机硒后的小鼠肝脏MT表达明显;比较肝损伤组及用药组（Organ-Se）组的血清及组织蛋白质表达图谱变化,发现血清中存在3个具有统计学意义的标志物：5062.5Da 、5566.5Da、6358.5Da;肝脏组织中有4个具有统计学意义的标志物：5449.6Da、7131.5Da、9903.2Da和10767.3Da;与损伤组相比预先保护组（Organ-Se）的血清及肝脏标志物的表达水平接近正常组。本实验表明非金属元素硒,尤其是有机硒同金属元素（如锌）一样,能够有效诱导MT的表达,为今后进一步开展硒代金属硫蛋白的机制研究奠定了基础;同时在对小鼠肝损伤保护的研究中发现,有机硒具有明显的肝损伤保护作用,是一种较有前途的值得开发的肝损伤防护药。     

大鼠酒精性肝损伤模型及蛋白表达指纹图谱的建立

目的:建立大鼠酒精性肝损伤模型,以蛋白质芯片技术为实验手段对损伤过程中的大鼠血清及肝脏蛋白质变化进行观察,以期获得损伤过程中的蛋白标志物,建立损伤过程蛋白表达指纹图谱;观察有机硒对大鼠肝脏损伤的防护作用。方法:用食用酒精辅以橄榄油对大鼠进行肝损伤,动态检测大鼠肝重比、血清生化指标,并进行肝组织病理切片观察;应用表面加强激光电离解吸飞行时间质谱技术对大鼠肝损伤过程进行跟踪检测,获得蛋白标志物,同时证实有机硒对肝损伤具有一定的防护作用。结果:肝重比、生化指标及病理切片均表明损伤模型已基本建立,同时验证了有机硒的肝损伤保护作用。在12周的损伤过程中,发现大鼠血清中有4个具有统计学意义的蛋白标志物,其相对分子质量(Mr)分别为7010、8307、11624和14041;在肝组织中发现了2个有统计意义的蛋白标志物,其Mr分别为5931.2和7104.6。结论:建立了大鼠酒精性肝损伤模型,获得了血清及肝脏蛋白标志物,为后期进行临床实验提供了可行的研究方法;同时为有机硒应用于临床进行肝损伤防护奠定了良好的实验基础。     

zVAD-fmk对未成熟树突状细胞诱导初始性CD4＋T细胞分化为调节性T细胞影响的体外研究

目的 研究 Caspase 通路在未成熟树突状细胞（imDC）诱导同种异体 CD4＋ T 细胞转化为调节性 T 细胞（Treg）中的作用及探讨免疫耐受机制建立可能的分子机制.方法 将人外周血分离、培养出的imDC 与健康胎儿脐血中分离CD4＋ T 细胞混合培养,同时加入zVAD-fmk,以流式细胞仪检测CD4＋CD25＋ T 细胞（Treg 细胞）转化率.结果 （1）imDC 的鉴定：外周血经诱导后分离的imDC,以流式细胞仪检测细胞表面分子,imDC 表面分子表达的结果：CD80（7.27 ± 0.13）、CD83（3.53 ± 0.35）、CD1a（4.29 ± 0.27）;（2）混合培养后CD4＋CD25＋T细胞的转化率结果为：空白组（1.78 ± 0.11）﹪、对照组（22.23 ± 0.77）﹪、低浓度zVAD-fmk 组（21.63 ± 0.82）﹪、中浓度zVAD-fmk 组（12.24 ± 0.54）﹪、高浓度zVAD-fmk 组（12.20 ± 0.96）﹪,结果对照组和低浓度组、中浓度组和高浓度组间比较,P 〉 0.05,其余各组间比较,P 〈 0.05.加入zVAD-fmk 并与imDC 细胞混合培养的T 细胞转化率相对于未加入阻断剂的T 细胞较低,同时Caspase 信号通路对zVAD-fmk 无浓度依赖性.结论 imDC 可以诱导同种异体初始性CD4＋ T 细胞分化为Treg.Caspase 信号通路特异性的阻断剂zVAD-fmk 可以部分抑制Treg 的转化,说明Caspase 信号通路在诱导免疫耐受中可能起了较为重要的作用.     

血清sCD105、Periostin、TK1在ⅢA-N2期非小细胞肺癌患者根治性切除术后复发中的临床应用价值研究

摘要 目的： 探讨血清可溶性CD105（sCD105）、骨膜蛋白（Periostin）、胸苷激酶1（TK1）对ⅢA-N2期非小细胞肺癌（NSCLC）患者根治性切除术后复发风险的预测价值。方法：选取2017年1月～2019年5月我院收治的127例接受根治性切除术的ⅢA-N2期NSCLC患者,根据术后3年是否复发分为复发组64例和无复发组63例,收集患者临床资料并采用酶联免疫吸附法检测血清sCD105、Periostin、TK1水平。通过多因素Logistic回归分析ⅢA-N2期NSCLC根治性切除术后复发的影响因素,受试者工作特征（ROC）曲线分析血清sCD105、Periostin、TK1水平对ⅢA-N2期NSCLC患者根治性切除术后复发的预测价值。结果：复发组血清sCD105、Periostin、TK1水平高于无复发组（P＜0.05）。复发组纵膈淋巴结转移数、隆突下淋巴结转移数、N2多站转移、N2多区域转移、N2跨区域转移比例高于无复发组（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析显示,纵膈淋巴结转移数增加、N2跨区域转移和sCD105升高、Periostin升高、TK1升高为ⅢA-N2期NSCLC根治性切除术后复发的独立危险因素（P＜0.05）。ROC曲线分析显示,血清sCD105、Periostin、TK1单独与联合预测ⅢA-N2期NSCLC根治性切除术后复发的曲线下面积分别为0.788、0.771、0.787、0.917,三项联合预测的曲线下面积大于各指标单独预测。结论：血清sCD105、Periostin、TK1水平升高为ⅢA-N2期NSCLC患者根治性切除术后复发的独立危险因素,联合检测血清sCD105、Periostin、TK1对ⅢA-N2期NSCLC患者根治性切除术后复发的预测价值较高。