粤港两地田间发现夜蛾黑卵蜂与 螟黄赤眼蜂寄生草地贪夜蛾

草地贪夜蛾是新入侵我国的重大危险性害虫,了解野外条件下天敌的发生情况对于挖掘和利用本地天敌资源开展生物防治有重要意义。2019年4月至7月,定期在广州及香港地区的玉米田中开展草地贪夜蛾发生情况调查时,发现野外两种卵寄生蜂寄生草地贪夜蛾。通过分子生物学方法鉴定为夜蛾黑卵蜂和螟黄赤眼蜂,并分别建立实验种群,为人工扩繁及田间应用打下基础,为利用本地天敌开展草地贪夜蛾生物防治提供重要参考。     

萤光素酶报告基因在病毒学研究中的应用

萤光素酶是一类在氧气存在下能催化其底物特异性发光的酶,检出灵敏度高、特异性强。萤光素酶催化底物发光因无须外源光的激发,避免了非特异性干扰,具有其他报告基因不可替代的优势。萤光素酶基因作为报告基因已成为医学科学研究领域的重要标记工具,具有良好的应用前景。我们简要综述了萤光素酶报告基因在病毒学研究中的应用进展。     

环境影响因子对玉米芽中辅酶Q10含量的影响

探讨了玉米芽中影响辅酶Q10含量的环境因子以及辅酶Q10的提取新方法.结果表明:光和水环境因子影响较大,在受到水或光因子胁迫时,玉米芽中辅酶Q10有较明显的增长趋势;玉米芽中辅酶Q10的初步提取方法为采用70%乙醇同鲜活玉米芽混合进行鲜磨匀浆萃取,固液分离后残渣再用氯仿超声提取 3 次为最佳提取方法.     

温度对卷蛾分索赤眼蜂种群参数的影响

通过组建卷蛾分索赤眼蜂 Trichogrammatoidea bactrae Nagaraja在米蛾 Corcyra cephalonica(Stainton)卵上实验种群生命表的方法 ,考察了梯度恒温 17、2 0、2 3、2 6、2 9、32℃和 35℃对该蜂发育、存活和繁殖的影响。在试验温度范围内 ,卷蛾分索赤眼蜂的世代发育历期随着温度的升高而缩短 ,发育历期由 17℃时的 2 0 .77d降至 35℃时的 7.2 5 d。卷蛾分索赤眼蜂的临界发育温度为 11.92和 38.95℃ ,适宜的生长发育温区则介于 2 0～ 2 9℃之间 ,最适发育温度为 2 3.0 7℃。在适宜温度 (2 0～ 2 9℃ )范围内 ,卷蛾分索赤眼蜂的幼期存活率维持在 90 %以上 ,雌成蜂具有较长的寿命 ,7.6 7～ 10 .87d;内禀增长率 (rm)及净生殖力 (R0 ) ,分别介于 0 .2 395～ 0 .4 890和 4 2 .32～ 6 4 .2 3之间。极端温度对卷蛾分索赤眼蜂的生长发育和生殖均有明显的抑制作用 ,在 35℃时 ,其幼期存活率为 12 .98% ,雌成蜂寿命不足 1d,且不能进行正常的生殖活动。温度对卷蛾分索赤眼蜂的子代性比有着显著的影响 ,在 17～ 35℃范围 ,子代雌雄性比随着温度的升高而不断下降 ,17,2 0 ,2 3,2 6 ,2 9℃和 32℃时的子代雌雄性比分别为 6 .73,3.4 8,2 .88,2 .4 5 ,2 .4 1和 1.75 ,温度与子代性比的作用关系可用公式 s=exp(3.5 1- 0 .10     

嵌合型HCV全长cDNA的构建及体外转录制备感染性RNA的研究

构建HCV la/1b嵌合型全长cDNA克隆,进行体外转录,脂质体法转染HepG2细胞,以RT-PCR法检测HCV正、负链RNA,Western印迹检测HCV蛋白表达.结果表明,细胞在转染后8代(约35d)内,能间断检测到HCV正、负链RNA以及相对分子质量约70000的HCV NS3蛋白,证明该HCV嵌合体可以在细胞中复制和表达.本研究表明含有该嵌合型全长cDNA的质粒可以为后续HCV的研究提供大量可重复的性质均一的病毒模板,有助于深入了解HCV的复制机制.     

稳定表达HCV 1a NS5A和NS5A-△ISDR细胞株的构建

以pBRTM／HCV-3011模板,通过PCR法扩增ns5α、LISDR(左端序列)和RISDR(右端序列),分别经XhoⅠ／EcoRⅠ、XhoⅠ／HindⅢ和EcoRⅠ／HindⅢ双酶切,连入穿梭质粒pEGFP—N3中,构建重组质粒pEGFP—N3-ns5a和pEGFP—N3-ns5a—△ISDR。对重组质粒进行酶切分析和序列测定。将这2种重组质粒通过电穿孔法转染HeLa细胞,然后在G418选择压力下进行有限稀释法筛选,用RT-PCR和荧光显微镜鉴定。经酶切鉴定和基因测序证实,重组穿梭质粒已插入目的片段ns5a、LISDR和RISDR。RT-PCR和荧光显微镜检测到目的基因的表达。以上结果说明成功构建了真核表达载体pEGFP—N3-ns5a和pEGFP—N3-ns5α—△ISDR,目的基因在HeLa细胞中得到表达,为研究HCV NS5A中是否存在抗干扰素治疗的功能蛋白提供了实验材料。     

丙型肝炎病毒ns3区全长基因在大肠杆菌中的高效表达及纯化

利用PCR技术扩增HCV ns3基因,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后与原核表达质粒pProEX—HTb连接,转化感受态细胞Ecoli DH50α,酶切鉴定得阳性重组质粒pProEX—HTb—ns3并测序;pProEX—HTb—ns3转化宿主细胞获得工程菌,用IPTG诱导,获得NS3蛋白的高效表达,薄层扫描显示其占菌体总蛋白的35％;目的蛋白在变性条件下经Ni^2 -NTA凝胶亲和层析纯化,透析并浓缩后用丙型肝炎患阳性血清做为一抗行Western—Blot证实特异性和抗原性。结果成功表明,诱导表达产物主要以包涵体形式存在;6His—NTA纯化后获得目的蛋白,Western—blot结果显示纯化蛋白具有良好的抗原性。HCVNS3蛋白的高效表达及纯化,为利用NS3蛋白作为诊断抗原及制备单克隆抗体奠定了基础。     

47kD尾连蛋白在病毒感染过程中的作用

47kD尾连蛋白(tail interacting protein of 47kD, TIP47)是PAT蛋白家族成员,主要定位于脂滴(lipid droplets, LDs)表面及细胞质中,参与脂质代谢调节及病毒复制、转运、组装、释放过程,而且人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)和登革病毒(dengue virus, DENV)等多种病毒感染与此过程密切相关。现就目前TIP47在HIV、HCV、DENV等多种病毒感染中所起的作用作一概述,旨在为抗病毒治疗及疫苗研制提供新的思路与途径。     

基因枪法和肌内注射法免疫HCV NS3/4A诱导小鼠免疫应答的比较

目的比较肌内注射法和基因枪法对免疫效果的影响。方法将携带HCV NS3/4A基因的质粒pcDNA3.1-NS3/4A,分别肌内注射和基因枪免疫BALB/c小鼠。基因枪免疫采用2μg/只和10μg/只两种剂量,肌内注射免疫的剂量为100μg/只,共免疫3次。分别于第3次免疫后10 d和20 d,收集小鼠血清、分离脾细胞;ELISA法检测小鼠血清中特异性抗体水平;ELIspot检测小鼠IFN-γI、L-2和IL-4;非放射性细胞毒性试验检测其对肿瘤细胞的杀伤作用,从而比较肌内注射和基因枪法激发小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答的影响。结果免疫后第10 d检测结果表明,2μg/只和10μg/只基因枪法免疫产生的抗体效价分别为1∶500和1∶1 000,100μg/只肌内注射免疫产生的抗体效价为1∶1 000。第20 d再次检测,基因枪法产生的抗体效价仍为1∶500和1∶1 000,肌内注射降低为1∶500。2μg/只和10μg/只基因枪免疫产生的IFN-γ和IL-2均高于100μg/只肌内注射免疫。但这两种免疫方法均未激发IL-4的水平。在不同的效靶比情况下,10μg/只和2μg/只基因枪免疫激发的CTL细胞杀伤活性均高于100μg/只肌内注射免疫。结论基因枪法免疫小鼠诱导的体液免疫和细胞免疫应答均显著高于肌内注射免疫。     

杨桃园桔小实蝇的防治适期研究

杨桃园桔小实蝇种群数量动态具有明显的规律,且与杨桃果实的成熟期密切相关。通常3月实蝇种群数量开始上升,4月～10月为发生盛期,其间出现3—4个发生高峰,11月次至年2月虫量较低。桔小实蝇对杨桃果实的成熟度具明显选择性,偏好硬度（成熟度）在89度以下的果实。单个果实中约有6个产卵孔、30头幼虫,杨桃从被害到落果时间长度一般为9d。经分析,发现产卵孔数和落果中的幼虫数量、产卵孔数与落果时间长度之间显著相关,建立了两者间关系方程。在以上研究基础上,确定了杨桃园桔小实蝇防治的一些关键时期。