三种内生真菌对茅苍术组培苗的生长及主要挥发油成分的影响

采用3种内生真菌与茅苍术组培苗共培养技术,研究了内生真菌对茅苍术组培苗生长及其主要挥发油成分的影响。结果表明：培养4周后,接内生真菌小菌核菌（AL3）的植株平均单株根数最多,比对照多92.7%（P<0.01）,并极显著地提高了平均单株根系干质量,比对照高62.9%（P<0.01）;而接种内生真菌小克银汉霉（AL4）和孔球孢霉（AL12）对茅苍术组培苗的生长影响不显著;AL3、AL4和AL12极显著提高了茅苍术叶片PAL酶活力,分别比对照提高了5.8、8.0和11.1倍（P<0.01）;AL3处理组的POD（过氧化物酶）、CAT（过氧化氢酶）和SOD（超氧化物歧化酶）3种酶活性与对照相似;而AL4处理组的3种酶活性分别比对照降低了9.1%、37.1%和9.7%,AL12处理组的3种酶活性分别比对照提高了10.4%、21.2%和9.6%;AL3、AL4和AL12都对茅苍术叶片总多酚含量有极显著影响,分别比对照提高了179.8%、86.2%和84.1%（P<0.01）;接3种内生真菌都改变了挥发油中4种主要活性成分苍术酮、苍术醇、β-桉叶醇及苍术素的相对百分含量。     

茶树内生木霉种的鉴定及其在植物体内的定殖

采用分离自健康茶树叶片组织的一株长枝木霉Trichoderma longibrachiatum菌株CSN-18,研究茶树内生木霉的人工接种、再分离及其在茶树地上部组织中的内生性。该菌在PDA培养基上生长速度快,产孢量大。用CSN-18回接茶苗,接种后一个月可以从茶苗的茎和叶组织中再分离获得该真菌。接种后的茶苗没有观察到明显的病害表现;与对照相比,接种后6个月组培苗生长良好,叶色更绿;接种后1个月,实生苗生长正常。通过石蜡切片和苯胺蓝染色,在已接种的茶树组培苗的叶片内部组织中可观察到木霉的存在,从而证明了木霉能够在茶树地上部组织内定殖,是茶树的一种内生真菌。     

不同化学型和季节变化对茅苍术内生真菌群落多样性的影响

对茅山型茅苍术(MA)和湖北型茅苍术(HA)的内生真菌多样性进行调查,分析二者之间优势菌群和特异菌群的差异。将两种化学型的茅苍术移栽至同一环境中,分别于春季、夏季、秋季3个季节采集叶片进行内生真菌的分离、鉴定和多样性分析。调查一共得到530株内生真菌,总分离率为58.89%,通过形态学特征和ITS序列鉴定归结为20个属。MA内生真菌分离率要高于HA,二者的真菌多样性构成有一定差异性。MA和HA内生真菌的优势菌群呈基本重合现象,主要集中于交链孢属、球座菌属、刺盘孢属等几个属;而二者之间的特异菌群显示出差异性,MA的特异菌群为Leptospora属、支顶孢属、壳针孢属等,HA特异菌群为白僵菌属、轮枝孢属、毛壳菌属等。随着季节的变化,内生真菌群落显示出一定的演替规律。夏季内生真菌的多样性高于春季和秋季。     

小桐子内生真菌及其抗真菌活性研究

从药用植物小桐子的根和茎中分离到内生真菌57株,经鉴定,它们分属于15个不同的分类单元。其中拟盘多毛孢为优势属,其次为拟茎点霉属和茎点霉属。用杨桃炭疽菌,香蕉疫霉和镰刀菌作指示菌对这些内生真菌的抗真菌活性进行检测,结果表明,有2株菌对杨桃炭疽菌具有抑菌活性。     

茅苍术内生真菌的分离及抗肿瘤细胞活性筛选

近年来,植物内生菌在抗肿瘤天然药物的研究取得了很大的进展。本实验从植物茅苍术中利用纯培养方法和组织块法分离获得57株内生真菌,其中,从根中分离得到20株,叶中分离得到19株,茎中分离得到16株,果实中分离得到2株。对57株内生真菌的抗肿瘤活性进行筛选研究,结果表明,菌株KLMPAL027发酵液对人肝癌HepG2细胞抑制率达到63.76%。     

千层塔内生真菌的分离与鉴定

目的：为从千层塔中分离具有药用价值的内生真菌奠定基础。方法：新鲜千层塔茎段,经酒精和升汞消毒后,接种于PDA平板培养基上进行内生真菌的分离、纯化;根据菌落形态和孢子等形态特征,结合核糖体基因居间序列（ITS序列）进行菌株鉴定。结果：从千层塔的茎中分离出4株内生真菌。内生真菌I菌落形态和孢子特征与枝状枝孢霉属的特征相符合,ITS序列与GenBank中多条属于枝状枝孢霉的ITS序列相似,鉴定该菌株属于枝状枝孢霉;内生真菌II菌落形态和孢子特征与黄青霉的特征相符合,鉴定该菌株属于黄青霉;内生真菌III菌落形态和孢子特征与尖孢镰刀菌的特征相符合,ITS序列与GenBank中多条属于尖孢镰刀菌的ITS序列相似程度高,鉴定该菌株属于尖孢镰刀菌;内生真菌Ⅳ菌落形态与盾壳霉相似,ITS序列与GenBank中6条属于盾壳霉的ITS序列具有较高的相似性,鉴定该菌株属于盾壳霉。结论：从千层塔中分离和鉴定出4株内生真菌,分别属于枝状枝孢霉、黄青霉、尖孢镰刀茵和盾壳霉。     

黄花蒿内生菌的分离与初步鉴定

利用平板分离法从药用植物黄花蒿(Artemisia annua Linn.)的根、茎和叶中共分离内生菌80株,其中内生真菌37株、细菌40株、放线菌3株.经菌种形态观察和染色等,初步鉴定了黄花蒿内生真菌具有5个属,包括囊孢菌(Capsule)、头孢霉(Cephalosporium)、弯孢霉(Curvularia)、曲霉...     

除虫菊内生真菌类群与分布的初步研究

为了解除虫菊内生真菌的种类和分布情况,采用常规分离方法,从除虫菊(Pyrethrum cinerariifolium Trev.)根、茎、叶、花中分离获得内生真菌共计128株,经形态观察,鉴定出12个属:镰孢霉属(Fusarium),毛壳菌属(Chaetomium),茎点霉属(Phoma),链格孢属(Alternaria),内多隔孢属(Endophragmiella),拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis),腐殖霉属(Humicola),黑孢霉属(Nigrospora),韦氏孢属(Wiesneriomyces),色串孢属(Torula),阜孢霉属(Papularia),丝核菌属(Rhizoctonia),其中镰孢菌属、链格孢属、腐殖霉属为优势种群。除虫菊不同部位内生真菌的数量、分布、种群及其组成存在差异。     

茅苍术挥发油对三种内生真菌及七种外源真菌的抑菌活性

为了研究宿主植物次级代谢产物对内生真菌生长的抑制作用,以药用植物茅苍术及其内生真菌为材料,采用有机溶剂萃取法提取茅苍术挥发油,应用滤纸片扩散法和平板涂布法研究茅苍术挥发油对茅苍术内生真菌及其他外源真菌的抑菌作用.结果表明: 挥发油对3种内生真菌生长具有抑制作用;对酵母、水霉有很强的抑菌活性;对根霉、犁头霉抑菌作用不明显;对绿色木霉、黑曲霉的产孢具有抑制作用;对疫霉生长无抑制作用.在高浓度挥发油胁迫下,内生真菌菌丝分支增多,分支间距离变短,气生菌丝生长受到抑制.两种内生真菌对挥发油具有代谢转化能力,降低了其主要成分的含量.表明茅苍术挥发油对内生真菌生长具有限制作用,但内生真菌能够通过自身分解代谢适应茅苍术挥发油.     

远志内生真菌抑菌活性筛选

从10月份采集的栽培和野生远志(Polygala tenuifolia Willd) 的根、茎、叶中分离内生真菌85株, 其中自栽培远志分离33株, 野生远志分离52株, 共鉴定76株, 隶属于23个属。通过对14种指示菌进行生长抑制试验, 发现远志内生真菌对枯草芽孢杆菌、宋内氏痢疾杆菌、大肠杆菌、白色念珠菌和九州镰孢霉等5种指示菌抑制效果较好。经鉴定, 它们属于镰孢霉属, 交链孢霉属, Aphanocladium等属, 对单核细胞增生李斯特菌、蜡样芽孢杆菌、普通变形杆菌、致病性大肠埃希氏菌、小孢拟盘多毛     

环境因子对乌桕内生真菌生长及脂肪酸的影响

为探讨内生菌和植物的生态关系,以生物量和脂肪酸组分作为主要指标,研究了乌桕韧皮部分离获得的5种内生真菌(丝核菌、小菌核菌、小单头孢、毛壳菌、拟盘多毛孢)在不同环境因子下的生长．与合成培养基相比,在液体马铃薯培养基上发酵,生物量较高,脂肪酸不饱和指数较低;其脂肪酸主要为棕榈酸、油酸、亚油酸．与未添加乌桕汁的合成培养基相比,添加乌桕浸汁对小菌核菌生长有促进作用,对其余4种菌有抑制作用;脂肪酸不饱和指数均进一步增加．在合成培养基中添加NaCl培养小菌核菌,生物量均无显著差异;在0～0．5mol·L^-1 NaCl时,脂肪酸不饱和指数无显著差异;在0．6～1．0mol·L^-1 NaCl时随着盐浓度增加,脂肪酸不饱和指数却下降;表明该菌有较强的耐盐能力．添加植物油对小菌核菌菌丝生长有促进作用,其中在添加1．5％的植物油时,生物量最大;其脂肪酸随添加植物油而改变．以上特点均和二者的共生关系有关．     

几种药用植物内生真菌抗真菌活性的初步研究

从三尖杉,南方红豆杉及香榧中分离出172株内生真菌,对其进行抗菌活性检测,结果表明共90株内生真菌对一种或多种植物病原真菌,如红色面孢霉（Neurospora sp.）,木霉(Trichoderma sp.）,镰刀菌（Fusarium sp.）等有抑制作用,来自三尖杉、南方红豆杉和香榧的抗菌活性菌株比例分别为40％,54.2%及57.1%。其中平板抑菌圈直径大于15mm的高抗菌株有35株。按Ainsworth等鉴定系统和方法进行鉴定,具有抗菌活性的内生真菌主要分布于心青霉属、镰孢菌属等18个属中。     

1株产紫杉醇内生真菌LNUF014的鉴定及产物检测

从红豆杉的韧皮部组织中分离得到的360株内生真菌中,通过对发酵粗提的检测,共筛选到11株产紫杉醇的真菌。其中1株内生真菌LNUF014的发酵液采用有机试剂抽提紫杉醇,经薄层层析和高效液相色谱分析,初步表明该菌株的紫杉醇类物质含量为53.68μg/L。根据形态学研究和真核生物18S rDNA基因序列分析,将其鉴定为镰刀菌属(Fusarium)。产紫杉醇内生真菌的研究将对紫杉醇类抗肿瘤药物的研制具有重要意义。     

再接种内生真菌对葡萄叶内生真菌群落结构的影响

【目的】探讨回接内生真菌对葡萄叶内生真菌群落结构的影响。【方法】将葡萄叶中分离到的8株内生真菌回接到健康生长的玫瑰蜜葡萄叶片上,同时设置管理上喷施农药与未喷施农药两组处理,3个月后分析不同真菌菌剂处理后葡萄叶片内生真菌的分离率、优势度和多样性指数。【结果】5种菌剂的处理(Xylaria sp.、Nigrospora sp.、Alternaria sp.1、Alternaria sp.2和Colletotrichum sp.)在处理后的叶片中分离到了较多数量的接种菌。不同菌剂处理后葡萄叶片菌群结构差异显著。【结论】与对照处理的葡萄相比,菌剂的处理增加了叶内生真菌的分离率,但显著降低了内生真菌的多样性指数;发现喷施农药组叶片内生真菌的分离率较低,但多样性相对较高。     

Antimicrobial potentials of endophytic fungi residing in <Emphasis Type="Italic">Quercus variabilis</Emphasis> and brefeldin A obtained from <Emphasis Type="Italic">Cladosporium</Emphasis> sp.

Among 67 endophytic fungi isolated from Quercus variabilis, 53.7% of endophytic fungal fermentation broths displayed growth inhibition on at least one test microorganism, such as pathogenic fungi (Trichophyton rubrum, Candida albicans, Aspergillus niger, Epidermophyton floccosum, Microsporum canis) and bacteria (Escherichia coli, Bacillus subtilis, Pseudomonas fluorescens). Moreover, 19.4% of strains showed a broader antimicrobial spectrum, such as Aspergillus sp., Penicillium sp., Alternaria sp., 20.9% of strains showed strong inhibition (+++) to pathogenic bacteria, while only 7.5% displayed that to test fungi. The most active antifungal strain I(R)9-2, Cladosporium sp. was selected and fermented. From the broth, a secondary metabolite, brefeldin A was obtained. This is the first report on the antimicrobial potentials of endophytic fungi residing in Q. variabilis and isolation of brefeldin A produced by Cladosporium sp.     

Antagonistic actinomycetes from Moroccan soil to control the grapevine gray mold

One hundred and forty-two different actinomycete strains were isolated from rhizosphere soil of Vitis vinifera L. sampled from four Moroccan areas. To evaluate the antifungal effect of the different collected actinomycete isolates, five fungi known to be phytopathogens (Pythium ultimum, Fusarium oxyysporum f. sp. albedinis, Sclerotium rolfsii, Verticillium dahliae and Botrytis cinerea) were used. Results showed that 24 isolates had an in vitro inhibitory effect toward at least 4 of the indicator fungi, but only 9 inhibited all these phytopathogens. These nine isolates were subsequently evaluated individually using in vitro grapevine plantlets for their ability to protect against plant gray mold. We demonstrate here that pre-inoculation of plantlets with these isolates allow them to withstand Botrytis cinerea. Six of these strains were shown to belong to the genus Streptomyces and three to the genus Micromonospora. These findings indicate the potential of developing effective actinomycetes from Moroccan habitats for the biological control of Botrytis cinerea. Electronic supplementary material  The online version of this article (doi:) contains supplementary material, which is available to authorized users.     

广藿香内生真菌多样性及其对青枯菌的拮抗活性

【目的】对广藿香各部位内生真菌的类群结构及多样性进行系统分析,筛选出对青枯菌具拮抗活性的菌株。【方法】采用组织块分离法从广藿香健康植株的根、茎、叶中分离内生真菌,结合形态学和基于ITS-r DNA序列分析鉴定方法分析广藿香内生真菌的类群结构及多样性,并利用双层平板拮抗法筛选对青枯菌具有抑制活性的菌株。【结果】从广藿香中共分离获得313株内生真菌,隶属于30个属,其中链格孢属(占28.75%)、拟茎点霉属(占23.00%)和炭疽菌属(11.82%)为优势类群,此外还分离到炭皮菌属、弯孢聚壳属、Gibellulopsis、新萨托菌属、葡萄座腔菌属、篮状菌属等较为少见的类群。茎、叶内生真菌的定殖率和分离率明显高于根,而根部多样性指数为2.64,要高于茎(2.00)和叶(1.97);广藿香茎与叶、根与茎、根与叶之间的内生真菌相似性指数分别为0.35、0.20、0.19,均小于0.5,显示各部位之间的内生真菌组成不相似程度高。从313株广藿香内生真菌中通过拮抗实验筛选到16株对青枯菌有拮抗活性的菌株,其中GHXR07、GHXR27和GHXR29的拮抗活性尤为显著,分别被鉴定为Talaromyces sp.、Myrothecium roridum Tode和Talaromyces wortmannii(Kl?cker)Benjamin。【结论】广藿香内生真菌具有丰富的物种多样性且其类群分布具有一定的组织特异性,其中部分菌株对青枯菌具有明显的拮抗活性。     

Isolation and characterization of endophytic streptomycete antagonists of Fusarium wilt pathogen from surface-sterilized banana roots

A total of 131 endophytic actinomycete strains were successfully isolated from surface-sterilized banana roots. These isolates belonged to Streptomyces (n=99), Streptoverticillium (n=28), and Streptosporangium (n=2) spp. The remaining 2 isolates were not identified. About 18.3% of the isolates inhibited the growth of pathogenic Fusarium oxysporum f. sp. cubense on banana tissue extract medium. The most frequently isolated Streptomyces sp. strain S96 was similar to Streptomyces griseorubiginosus. About 37.5% of the S. griseorubiginosus strains were antagonistic to F. oxysporum f. sp. cubense. The antagonism of strain S96 was lost when FeCl(3) was introduced into the inhibition zone. In vivo biocontrol assays showed that the disease severity index (DSI) was significantly (P=0.05) reduced and mean fresh weight increased (P=0.001) in plantlets treated with strain S96 compared to those grown in the absence of the biocontrol strain. These findings indicate the potential of developing siderophore-producing Streptomyces endophytes for the biological control of fusarium wilt disease of banana.     

一株产紫杉醇菌的分离及其代谢产物对HeLa细胞抑制作用的研究

从东北红豆杉Taxus cuspidata的主干和侧枝树皮及皮下分离筛选得到181株纯化的内生菌株。经过摇瓶发酵培养,再用甲醇、乙酸乙酯萃取抽提,抽提产物经以标准紫杉醇为对照的薄层层析(TLC)、高效液相色谱(HPLC)、质谱(MS)分析,发现有1株菌株HD181-23能够产生紫杉醇,其紫杉醇产量为206.34μg/L。对菌株HD181-23菌落、菌丝体和孢子形态和产孢特征进行了研究,表明菌株HD181-23为葡萄孢属的种,暂定为Botrytissp.。该菌株的发酵提取纯化产物经HeLa细胞毒实验,结果显示对HeLa细胞具有较强的抑制作用。