欧洲鳗鲡红头病病原的研究

我国南方各省欧洲鳗鲡养殖过程中,在黑仔及幼鳗期易发生一种以头部充血发红为主要特征的严重疾病,被称为“红头病”。本文描述了欧鳗红头病的症状,从病鳗血液中分离到３株菌,肌注和口服人工感染试验出现与自然发病相似的症状,死亡率分别９ ８３％和６７％,从病鳗身上重新分离到性状的菌株。４株分离菌的特性完全一致。均为革兰氏阴性杆菌,以周鞭毛运动,兼性压氧,发酵葡萄糖产酸,氧化酶阴性,过氧化氢酶阳性,还原硝酸盐Ｖ     

欧洲鳗鲡外周血细胞的显微和超微结构

利用光镜和透射电镜技术研究了欧洲鳗鲡（Anguilla anguilla）外周血细胞的显微和亚显微结构。结果表明：在外周血细胞中可以区分出红细胞、单核细胞、大淋巴细胞、小淋巴细胞、嗜中性粒细胞和血栓细胞;嗜中性粒细胞内的特殊颗粒包括A、B、C三型;嗜中性粒细胞分为Ⅰ型粒细胞（内含A、B、C三种特殊颗粒）、Ⅱ型粒细胞（内含A型和C型两种特殊颗粒）和Ⅲ型粒细胞（内含C型特殊颗粒）。还见到幼稚的和正在分裂的红细胞和单核细胞,提示示幼稚的红细胞能直接进入外周血流中,嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞无论在血涂片上或超薄切片上均未见到。描述了上述各种血细胞在光镜和电镜观察下的形态和细微结构。血栓细胞体积最小,嗜中性粒细胞体积最大;淋巴细胞数目最多,嗜中性粒细胞数目最少。     

欧洲鳗鲡“狂游病”血液生化指标研究

近年来,欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla L.)的养殖过程中常发生“狂游病”.       

鳗鲡属六种鱼类形态判别研究

使用方差分析、判别分析及主成分等方法对鳗鲡属下6种鱼类(花鳗鲡Anguilla marmorata、菲律宾鳗鲡 A.bicolor Pacifica、美洲鳗鲡 A.rostrala、欧洲鳗鲡 A.anguilla、日本鳗鲡 A.Japonica、澳洲鳗鲡 A.australis australis脊椎骨数、传统可量数据及现代的框架数据进行了研究.结果表明:1)脊椎骨数方面,6种鳗鲡在总脊椎骨数、背鳍前脊椎骨数、背鳍一臀鳍起点间脊椎骨数等几个参数上几乎都存在显著差异,可据此予以区分,主成分分布图上6种鳗鲡彼此分开;2)外形的12项可量数据和16项框架数据的分析结果表明,背鳍前长/全长、背鳍起点一脊椎末端/全长两个比例性状在6种鳗鲡之间均表现出显著差异,可以作为判别这几种鳗鲡的特定参数,互相证实准确率为99.2%,前3个主成分的方差贡献率累积达67.74%,它包含了28个变量中的23个,这些变量分布在鱼体的前、中、后各部位,由此可见6种鳗鲡的区别散布于全身,而非集中于某一区段;3)上述两大类数据的聚类结果完全一致,菲律宾鳗鲡与花鳗鲡、美洲鳗鲡与日本鳗鲡最为相似.     

日本鳗鲡的C-型和G-型溶菌酶研究

研究以日本鳗鲡(Anguilla japonica Temminck et Schlegel)为研究对象, 根据其基因组数据库, 预测并扩增出2类, 共5个溶菌酶基因, 包括1个C-型溶菌酶和4个G-型溶菌酶, 分别命名为AJLysC、AJLysG1、AJLysG2、AJLysG3和AJLysG4。它们的cDNA全长分别为811、749、1352、1175和733 bp, 编码143、193、185、185和187个氨基酸。SignalP预测表明, AJLysC和AJLysG1的N-端分别包括15和19氨基酸的信号肽, 另外3种溶菌酶没有信号肽。基因组分析显示, AJLysC、AJLysG2、AJLysG3和AJLysG4的基因结构与其他鱼类的同类溶菌酶的基因结构相似, C-型溶菌酶具有4个外显子, G-型则具有5个。但是, AJLysG1的基因结构与其他鱼类G-型溶菌酶不同, 具有6个外显子, 与其他鱼类溶菌酶的蛋白序列比较, 发现AJLysG1缺失其他G-型溶菌酶存在的第2个酶活性位点氨基酸, 即天冬氨酸Asp。AJLysC与其他很多物种的C-型溶菌酶具有较高的同一性, 如与牙鲆的同一性为72.7%。G-型溶菌酶中AJLysG2、AJLysG3、AJLysG4彼此之间以及与其他物种G-型溶菌酶的同一性相对较高; 而AJLysG1与其他物种以及与其他3种G-型溶菌酶的同一性均不高, 且都在50%以下。组织表达分析显示, 所有5个溶菌酶基因在12种检测的组织中均有表达。C-型溶菌酶在胃及免疫相关组织的表达量较高; G-型溶菌酶在各组织/器官中的表达则差异较大, AJLysG1在皮肤和肌肉中的表达量最高, AJLysG2在免疫组织/器官如血液、头肾、体肾和鳃中表达量较高。经迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)刺激48h后, 这5个溶菌酶基因在组织/器官中的表达量均有上调, 其中在血液、肠道和头肾等的上调较为显著。此外, 研究尝试重组表达这些抗菌肽, 获得了AJLysG2、AJLysG3和AJLysG4基因在鲤上皮瘤细胞(Epithelioma papulosum cyprinid, EPC)细胞中的表达, 重组蛋白表现出对溶壁微球菌(Micrococcus lyso-deikticus)生长的明显抑制作用。文章较全面地研究了日本鳗鲡溶菌酶基因的组成和类型及其表达变化, 并重组表达了部分基因, 这为进一步研究这些溶菌酶的功能, 特别是对病原微生物的作用奠定了基础。     

日本鳗鲡精子形成过程中的形态结构特点

本文通过扫描电镜、透射电镜观察了日本鳗鲡（Anguilla japonica）精子形成的特殊过程及产生细胞器的特殊结构。由精细胞变成精子包括四个特殊阶段,即经过早期、中期、晚期和精子期．最后形成正常成熟的精子．（1）早期阶段：其特征是细胞核由椭圆形逐步变成长条形;在细胞核的一端．有一个大的圆的染色较浅的形状似球形的特殊结构,约占细胞核的三分之一,其内含有少量着色深的颗粒状和线条状物质,外面由质膜包被着与细胞核分开,该结构和细胞核的外层还有一层质膜包着形成一个整体：精子早期阶段没有形成独立的线粒体和中心粒。（2）中期阶段：其特征是细胞核呈长条形．有球形结构的一端成为细胞核的上端,无球形结构的一端成为细胞核的下端,在下端出现鞭毛的原基;球形结构伴随着精子的发生也发生变化,内部逐步分化出中心粒和线粒体等细胞器：在细胞核的中段有明显的溶酶体分布。（3）晚期阶段：其特征是细胞核呈“眉形”或“新月形”．中心粒从球形结构中释放出来形成独立结构．球形结构中只剩下还没有形成独立结构的线粒体：在细胞核的下端鞭毛的原基处长出较长的鞭毛,这时期的精子已具有运动能力。（4）精子期：其特征是细胞核呈圆形,中心粒位于植入窝内,线粒体分布在细胞核的下面．在线粒体的下面有袖套腔形成,此时形成的鞭毛为“9＋2”结构。日本鳗鲡精子经过四个时期的变态．才能形成真正成熟的精子。     

鳗鲡出血性开口病的病理学研究

本文报告了我国发生的一种鳗鲡病毒病──鳗鲡出血性开口病的组织病理变化：肝、肾、脾脏组织出血、细胞变性,骨质内有大县白细胞浸润,肝、肾、脾脏细胞超微结构病理变化明显,肾、脾脏造血组织和外周血细胞出现核染色质边集、奇异形核,大量髓鞘样结构、自噬体和自噬溶酶体等,并可见类似凋亡细胞及调亡小体结构和邻近细胞内吞噬体增多现象。根据骨组织中白细胞浸润及器官和血液中部分细胞结构已出现异型性特征,作者认为,鳗鲡出血性开口病可能有癌变的趋势．     

鳗鲡开口病的病毒分离及特性研究

从患开口病鳗中分离到一种病毒于３０℃条件下,病毒能在ＥＧ细胞上产生细胞病变及形成１．２ｍｍ大小的空斑,电镜下观察,病毒呈圆形,具囊膜。膜上有纤状突起,成熟颗粒直径为７０－８５ｍｍ其核酸为单链单分子ＲＮＡ,病毒对氯仿,热和ｐＨ３不稳定,经多次冻融,其滴度稍有下降,病毒是在细胞浆内复制,温度范围在２５－３２℃之间,最适复制温度为３０℃。     

爱德华氏菌人工经口感染及病理观察

用从病鱼体内分离到的福建爱德华氏茵（Ｅｄａｗａｒｄｓｉｅｌｌａｆｕｊｉａｍｅｎｓｉｓ）人工经口感染鳗鲡获得成功,证明该菌由消化道传染。人工感染后一系列组织病理观察表明：该菌对肝脏的损害是致肝细胞融解形成灶性坏死,对肾脏引起造血组织增生。当继发感染气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏ－ｎａｓ）后,灶性坏死区形成脓肿。继发感染是爱德华氏病致死的原因,同时也是鳗鲡爱德华氏病症伏表现为肝脏型或肾脏型两种类型的原因。     

鳗鲡肝脏、脾脏显微与超微结构

经光镜和电镜观察发现：鳗鲡肝脏的肝小叶不规则。肝细胞胞质内富含多种细胞器及包含物。胆小管由２—４个肝细胞围成，相邻肝细胞间有连接复合体封闭胆小管。肝血窦为有孔型、孔处无隔膜，内有巨噬细胞。窦周隙明显，未见贮脂细胞。肝细胞向胆小管腔与窦周隙面伸出许多指状微绒毛。脾脏内白髓中淋巴细胞聚集成群，未见明显脾小结、淋巴鞘。红髓由脾索与脾窦组成，动脉分支末端（壁厚的毛细血管）可开放于红髓，无明显巨噬细胞中心。脾窦及脾小动脉内皮细胞通常为长杆状、沿血管纵向平行排列。脾窦为有孔型，孔处可见薄的隔膜。脾小动脉内皮外为２—５层平滑肌（多数为纵行）。     

养殖日本鳗鲡腐皮病真菌性病原的分离与鉴定

针对近年来人工养殖日本鳗鲡(Anguilla japonica)在越冬过程中广泛发生、传染速度快、死亡率高的腐皮病进行了真菌性病原的分离与鉴定。以麦粒培养法从患病鳗鲡的病灶处分离获得1株真菌菌株Js80122;通过孢子悬液背部肌肉注射、培养物创伤浸泡、孢子创伤涂抹、孢子与细菌混合注射等方法人工感染健康鳗鲡,证实了Js80122为日本鳗鲡腐皮病的病原菌。于不同培养温度条件下,以载玻片培养观察法和盖玻片插片培养观察法对Js80122进行生活史观察与形态学鉴定,结果显示Js80122为丝状真菌,菌丝无横隔,分枝发达,具无性与有性两种生殖方式,动孢子囊呈棍棒形或纺锤形,新生孢子囊以层出或聚伞状方式生长,孢子具两游现象,藏卵器中有1个以上的卵孢子,卵孢子光滑无皱缩。依据其形态学特征,鉴定Js80122为水霉科(Saprolegniaceae)、原绵霉属(Protoachlya Coker)、原绵霉(Protoachlya paradoxa)。       

日本鳗鲡TLR21基因的鉴定、免疫应答与启动子分析

为研究TLR21（Toll like receptor 21）在低等脊椎动物中的功能及表达调控机制,我们扩增获得了日本鳗鲡TLR21（AjTLR21）cDNA序列,其编码的蛋白具有TLR家族的共同特征。AjTLR21基因结构与其他鱼类和两栖类TLR21相同,由单个外显子编码。荧光定量结果显示,AjTLR21在血液、鳃、脾脏、中肾等11个组织/器官中转录表达,其中在血液中表达量最高。经Poly I:C诱导后8h,AjTLR21在脾脏和中肾中的表达量显著性上调;诱导后16h,AjTLR21在血液、鳃、肠和脾脏中的表达量显著性上调（P < 0.05）。双荧光素酶报告基因结果显示,在AjTLR21 5'上游调控序列-1179 bp到+117 bp存在Poly I:C调节的正调控元件。经Edwardsiella tarda诱导后16h和72h,AjTLR21分别在血液和中肾组织的表达量显著性上调,表明AjTLR21同时也参与了抗细菌免疫应答,其在机体免疫系统中的功能具有多样性。研究对于理解日本鳗鲡AjTLR21的免疫学功能具有重要的理论意义和应用价值。     

鳗鲡肝肾病病原菌的研究

近年来,在广东潮州各养鳗场,每年３－５月和１０－１２月,广泛流行一种危害严重的鳗鲡肝肾病,给鳗鲡养殖业造成严重损失。本文记述了该病的症状,重点研究鳗肝肾病的病原菌。作者从患肝肾病的病鳗肝脏、肾脏和胃液中分离到１０株致病菌。根据分离株的形态、培养、生化特性,８株致病菌特性一致,鉴定为迟饨爱德华氏菌（ＥｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａｔａｒｄａＥｗｉｎｇｅｔＭｃｗｈｏｒｔｅｒ）另外两株菌特性相同被鉴定为运动性Ａｅｒｏｎｌｏｎａｓｓｐ．。研究结果阐明了鳗鲡肝肾病主要是由Ｅ．ｔａｒｄａ引起的爱德华氏菌病,部分病例是由Ｅ．ｔａｒｄａ和运动性Ａｅｒｏｍｏｎａｓ菌引起的并发症．Ｅ,ｔａｒｄａ是鳗鲡肝肾病的病原菌。     

鳗鲡出血性开口病的研究初报

鱼类恶性肿瘤的研究报道较多。但象白血病这类造血系统恶性肿瘤国内外尚未见报道。群体发生带有传染性的恶性肿瘤更是罕见。这不仅是在鱼病的研究中,就是对恶性肿瘤的研究也有重要意义,现将结果报告如下以供同仁研究参考。       

日本鳗鲡IFN-γ基因的鉴定、表达模式及启动子活性分析

为揭示鱼类IFN-γ的生物学功能, 研究从日本鳗鲡(Anguilla japonica)中克隆获得了IFN-γ基因, 命名为AjIFN-γ。AjIFN-γ具有脊椎动物IFN-γ的典型特征: 包括4外显子/3内含子的基因结构、C端的IFN-γ特征性氨基酸基序和1个核定位信号, 以及6个α-螺旋反向平行构成的二级结构。AjIFN-γ在日本鳗鲡所有组织中均低水平转录表达, 其中肝脏中表达量最高, 其次是皮肤和头肾。Poly I:C刺激和迟缓爱德华氏菌感染均可显著诱导AjIFN-γ在鳃、头肾、体肾和(或)脾脏中的转录表达, 表明AjIFN-γ能够参与日本鳗鲡抗菌和抗病毒的免疫过程。此外, 研究还克隆了AjIFN-γ基因的5′调控区序列共1536 bp, 并构建了一系列Aj IFN-γ 5′调控区删节突变体, 分析其启动子活性, 结果表明, 上游–240/+136区域中含有起始AjIFN-γ转录的关键启动子调控元件, –1062/–814区域存在转录的正调控元件, 而–1252/–1062区域存在转录的负调控元件。上述结果进一步丰富了鱼类IFN-γ的基础知识。     

日本鳗鲡精卵的超微结构以及受精过程观察

通过扫描电镜和透射电镜对经人工催产获得的日本鳗鲡(Anguilla japonica)精子、卵膜的超微结构以及受精过程进行了观察。实验观察到,除一般硬骨鱼类的精子特性外,日本鳗鲡精子有其独特的结构。精子头部为不规则的梨形,有背腹面之分。一个巨大的球形线粒体位于头部顶端。精子中段向后伸出一支根,支根位于袖套腔外精子的背侧,前端向精子头部线粒体方向延伸,支根的微管结构为"8+2"结构,并在精子入卵过程中起到切断鞭毛的作用。精子的尾部由鞭毛和鞭毛末端的结组成。鞭毛横切面呈圆形,无侧鳍,鞭毛微管结构为"9+0"结构。受精卵的整个表面密布着无规律延伸的脊、脊包围形成的窝和窝中的孔所组成的脊孔复合体,但无典型特征的受精孔。受精卵超薄切片观察发现,日本鳗鲡卵膜分为外层壳膜和内层卵黄膜。壳膜与卵黄膜间为卵周隙。壳膜只观察到放射带,未见透明带。放射带可分为三个亚层:最外层为脊孔复合体的脊,中间层为皱纹层,最内层为致密的平滑层。脊孔复合体的孔横穿整个放射带,在放射带内层形成一个乳突状结构。日本鳗鲡的卵膜不仅具有保护卵子的作用,而且还参与了受精。实验还通过扫描电镜观察了日本鳗鲡精子的入卵过程。观察结果认为:日本鳗鲡精子入卵过程可分为卵膜对精子的吸引、精子对卵膜的锚定、精核的进入和孔封闭等4个阶段。但由于研究只观察到受精过程中日本鳗鲡精子和卵膜的形态变化,因此对精子穿过卵膜的方式和特征等尚需做进一步的研究。整个受精过程为1min30s左右。此外,研究还探讨了日本鳗鲡精子结构的特殊性和受精过程的特殊性,为进一步突破日本鳗鲡人工育苗技术提供了理论依据。       

日本鳗鲡肝脏表达抗菌肽2基因的克隆与表达

为探讨鱼类抗菌肽基因的生物学功能,研究应用RACE方法克隆获得了日本鳗鲡 (Anguilla japonica) 肝脏表达抗菌肽2基因 (Liver-Expressed Antimicrobial Peptide 2,LEAP-2),即AJLEAP-2的cDNA序列,全长为450 bp,开放阅读框编码89个氨基酸。其成熟肽含有LEAP-2保守基序C-X5-C-X4-C-X4-C。AJLEAP-2基因组结构与其他脊椎动物LEAP-2相同,都包含有三个外显子。利用荧光定量PCR检测了AJLEAP-2在日本鳗鲡不同组织/器官中的表达,发现其转录子在肝脏中表达量最高,是内参基因 (-actin) 的6倍; 其次是肠道,但其表达量仅为肝脏的1/130。此外,还检测了AJLEAP-2在日本鳗鲡玻璃鳗(Glass eel)阶段的转录表达水平,结果显示,玻璃鳗中AJLEAP-2的转录表达量仅低于黑仔期的肝脏,为黑仔鳗肠道表达量的2倍。LPS和迟缓爱德华菌 (Edwardsiella tarda) 刺激能显著上调鳗鲡血液中AJLEAP-2的转录表达,刺激16h后上调倍数最高,分别为对照组的86倍和12倍。此外,LPS刺激72h和E. tarda 刺激8h后,肠道中AJLEAP-2显著上调表达(P0.05),为对照组的8倍。Poly I:C刺激24h后,血液中AJLEAP-2转录表达显著下调。结果表明,AJLEAP-2在日本鳗鲡抗细菌感染过程中起重要的作用。     

长江靖江段沿岸日本鳗鲡丰度的时间格局及生物学研究

于2002—2017年在长江靖江段沿岸对日本鳗鲡资源量进行长期调查, 对其丰度的时间格局特征及环境影响因素等进行了分析。结果显示, 在近16年519次调查中, 采集到日本鳗鲡137尾, 平均年龄(1.8±1.0)龄, 平均全长和体质量分别为(31.1±9.8) cm和(57.64±91.94) g, 89.1%的个体未性成熟, 94.9%的个体处于黄鳗期。全长与体质量关系式为: W=0.0002415×L3.483 (r2=0.9537, n=137)。日本鳗鲡在靖江段渔获物中的数量百分比与重量百分比分别仅为0.08%和0.69%, 且丰度和出现率在年间均呈波动式递减趋势。同时发现靖江段日本鳗鲡丰度年际波动与长江口鳗苗群体补充无关, 其出现率受水温及水质因子氨氮和浑浊度的影响。