IFN-α对人脐带间充质干细胞粘附分子表达的影响

目的:本研究旨在观察不同浓度IFN-α对体外培养人脐带间充质干细胞表面粘附分子表达变化的影响.方法:采用组织块移行法培养人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,hucMSCs),并进行干细胞表面抗原、成骨和成脂鉴定.向P3代hucMSCs加入不同浓度的IFN-αt,24小时后收集细胞,应用流式细胞仪检测CD44、CD49d、CD54、CD58、CD62p、CD62L、CD102及CD106等八种粘附分子的表达情况.结果:①生理状态下,CD106、CD62P、CD62L和CD102阳性表达率极低(均＜1％),CD54表达最高,为41.58％,经FN-α干预后,CD102、CD106、CD62L、CD62p阳性表达率略有升高,但总体变化不明显(均＜5％).②CD49d、CD54、CD58阳性表达率与IFN-α呈浓度依赖性,最高达(66.36± 2.48)％、(76.26±1.85)％、(47.78±0.44)％;CD44在浓度为3x 103U/ml时阳性表达率最高,为(49.81±3.25)％,且干预组与对照组、各组间比较差异有显著性意义(P＜0.05).结论:炎症因子IFN-α可显著提高hucMSCs表面CD54、CD58、CD44、CD49d的阳性表达率,但对CD102、CD106、CD62P和CD62L作用不明显.     

rhG-CSF动员对供者CD4^＋T细胞免疫表型和功能影响

目的：研究重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）动员对供者CD4＋T细胞表面分子淋巴细胞功能相关抗原-1（LFA-1）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、L-选择素（LAM-1）和人整合素-4（VLA-4）的表达及其介导的CD4＋T细胞功能的影响,探讨外周血干细胞移植过程中CD4＋T细胞免疫耐受机制。方法：使用三色荧光标记检测动员前及动员后第5天供者外周血LFA-1、ICAM-1、LAM-1和VLA-4的表达率,ELISA方法检测动员前后CD4＋T细胞分泌IFN-γ和IL-4能力,免疫磁性分选法分离纯化CD4＋T细胞,检测动员前后CD4＋T细胞对基质细胞衍生因子-1α（SDF-1α）的迁移能力和对ICAM-1的黏附能力。结果：动员前后CD4＋T细胞LFA-1（CD11a）和VLA-4（CD49d）表达率差异无统计学意义（P〉0.01）,动员前后CD4＋T细胞LAM-1（CD62L）和ICAM-1（CD54）的表达率差异均有统计学意义,动员前显著高于动员后（P〈0.01）;动员前后CD4＋T淋巴细胞向SDF-1α的迁移率差异无统计学意义（P〉0.01）;动员后CD4＋T细胞对ICAM-1的黏附率降低（P〈0.01）;动员后IL-4和IFN-γ两个细胞因子在外周血血清的浓度均降低（P〈0.01）。结论：rhG-CSF动员不影响CD4＋T细胞LFA-1和VLA-4表达及CD4＋T细胞迁移,但影响CD4＋T细胞ICAM-1和LAM-1表达以及CD4＋T细胞通过LFA-1对ICAM-1的黏附能力影响,并可能影响CD4＋T细胞分泌细胞因子IL-4及IFN-γ的功能。     

表达CD19^＋CD56^-的多发性骨髓瘤浆细胞免疫表型的鉴别

目的：研究多发性骨髓瘤患者浆细胞和对照组正常浆细胞免疫表型,有效地识别表达CD19^＋CD56^-的多发性骨髓瘤恶性浆细胞。方法：采用四色流式细胞仪（BD,FACSCalibur）检测44例MM患者浆细胞以及25例健康骨髓捐献者正常浆细胞膜上的抗原表达。采用CellQuest软件分析结果。细胞膜表面抗原表达率大于20％定义为表达阳性。阳性率为表达阳性的患者及健康对照者所占百分比。结果：44例MM患者浆细胞免疫表型表达频率为：CD^138＋;97．72％（43／44）、CD38^＋：100％（44／44）、CD56^＋：63．64％（28／44）、CD19：84．09％（37／44）、CD200^＋：77．27％（34／44）、CD28^＋：38．64％（17／44）;25例对照组正常浆细胞免疫表型表达频率为：CD138^＋：100％（25／25）、CD38^＋：100％（25／25）、CD56^＋-：100％（25／25）、CD19^＋：96％（24／25）、CD200^＋：0％（0／25）、CD28^＋：0％（0／25）。在44例MM患者中,9％（4／44）患者表达CD19^＋CD56^-,利用CD200检测4例表达CD19^＋CD56^-的患者,有3例患者伴有CD200阳性表达,可与正常浆细胞鉴别。结论：CD200有利于鉴别表达CD19＋CD56-MM恶性浆细胞与正常浆细胞。     

胃腺癌血管生成拟态和HIF—1α的表达及意义

目的探讨在人胃腺癌组织中是否存在血管生成拟态（Vasculogenic mimicry,VM）及VM与HIF-1α表达的关系,以及HIF—1α表达的临床病理意义。方法收集临床病例资料完整的胃腺癌121例,利用CD34和PAS双重染色观察是否存在VM,然后对VM阳性组和阴性组进行HIF-1α染色,分析VM与HIF-1α表达的关系及HIF—1α表达与患者临床病理指标的关系。结果121例胃腺癌组织中有44例（36．36％）存在VM。VM阳性组和VM阴性组HIF-1α蛋白表达阳性率分别为77．27％（34／44）和54．55％（42／77）,两组间的差异有统计学意义（P〈0．05）;有、无淋巴结转移的胃腺癌组织HIF-1α表达阳性率分别为76．74％（66／86）和28．57％（10／35）,两组间的差异有显著性（P〈0．01）;中、低分化胃腺癌组织中HIF-1α表达阳性率分别为50．85％（30／59）、74．19％（46／62）,两组间的差异有显著性（P〈0．01）。结论胃腺癌组织中存在VM,HIF-1α的表达可能促进VM的形成。VM与HIF-1α的表达可能是胃腺癌浸润、转移的重要生物学标志。     

185例儿童急性白血病流式细胞术免疫分型研究

目的：探讨儿童急性白血病流式细胞术免疫分型的意义。方法：采用流式细胞术三色荧光标记技术和CD45／SSC双参数散点图设门,检测185例儿童急性白血病的免疫表型,对抗原表达情况进行分析。结果：流式细胞术免疫分型和FAB分型的符合率为89．19％。185例儿童急性白血病中,ALL为121例,占AL的65．41％,B—ALL为113例,主要表达B系的CD19（99．12％）、CD22（98．13％）、CD79a（96．19％）、CD10（86．73％）。T—ALL占8例;主要表达CD5（100％）、CD7（100％）、cCD3（100％）、CD8（87．5％）。AML为47例,占25．41％,主要表达CD33（93．62％）、CD15（78．72％）、CD64（76．6％）、MPO（76．6％）、CD13（74．47％）。在B—ALL,AML,T—ALL中,敏感性最高的抗体分别是CD19,CD33,CD5和CD7,特异性最强的抗体分别是CD79a,MPO,cCD3。AMLL为17例,占9．19％,其中B／M为9例,T／B为5例,T／M为3例。My＋-ALL为54例,占ALL的44．63％,表达的髓系抗原为CD13、CD15、CD33、CD64。Ly＋-AML为18例,占AML的38．30％,表达的淋系抗原为CD19、CD4、CD7。系列非相关抗原CD34的表达率为67．57％,HLA—DR的表达率为85．41％,CD38的表达率为80．59％,TdT的表达率为62．59％。结论：流式细胞术免疫分型在白血病分型中起重要作用,是FAB分型的补充和修正,提高了儿童急性白血病诊断的准确率。有必要进一步加强流式细胞术免疫分型的标准化工作。     

CD8＋CD122＋T细胞在脑缺血过程中作用的研究

目的：探讨CD8＋CD122＋T细胞在脑缺血过程中的作用及其机制。方法：线栓法建立小鼠大脑中动脉栓塞模型（MCAO）;激光共聚焦显微镜检测小鼠脑缺血组织中CD8＋CD122＋T细胞浸润情况;流式细胞仪检测脑缺血组织中CD8＋CD122＋T细胞／CD3＋T细胞的比例及脾和胸腺中CD8＋CD12TT细胞数量变化;RT—PCR方法检测CD8＋CD122＋T细胞对氧糖剥夺（Oxygen—glucosedeprivation,OGD）条件下星形胶质细胞表达TNF-α,IL-1β,IFN-γ的影响。结果：各时间点脑缺血组织中均有CD8＋CD122＋T胞浸润,且随脑缺血时间延长,缺血侧脑组织中CD8＋CD122＋T细胞／CD3＋T细胞比例逐渐增加,5d和7d组差异显著,与非缺血侧相比,P5d〈0．05,P7d〈0．05;MCAO小鼠脾及胸腺中CD8＋CD122＋T细胞呈现先增高后降低的趋势。星形胶质细胞经OGD处理后,与对照组相比,IFN-γ、TNF-α、IL—1β表达显著增高,PIFN-γ〈0．01、PTNF-α〈0．001、PIL-1β〈0．01;CD122-blocked组与CD8＋组相比,IFN-γ、TNF-α、IL-1β表达明显增高,PIFN-γ〈0．05、PINF-α〈0．05、PIL-1β〈0．01;CD8＋组与HBSS组相比,IFN-γ表达降低,P〈0．05;IL-1β表达有降低的趋势。结论：CD8＋CD122可细胞在脑缺血过程中发挥保护性作用,其保护作用通过CD122抑制星形胶质细胞TNF-α,IL-1β,IFN-γ炎症因子表达实现的。     

54例慢性淋巴细胞白血病的临床回顾性分析

目的：本研究旨在探讨慢性淋巴细胞白血病（CLL）的实验室检查特点及特征性临床表现。方法：利用血细胞分析仪、流式细胞术、骨髓形态分析及R显带技术等对我院2002年4月．2012年4月收治的54例慢性淋巴细胞白血病患者的相关临床资料如血细胞计数、骨髓形态、染色体及免疫表型等进行检测并对结果进行回顾性分析。结果：CLL多发于老年患者,男性多见,中位年龄65岁（45．82岁）。大部分患者初诊时可出现典型的临床表现,37例（68％）患者初诊时淋巴结大,49例（91％）初诊时白细胞≥10×109、L,淋巴细胞绝对值≥5×109／L。13例（24％）初诊时肝脾或者脾大,17例（31％）初诊时乏力、消瘦。34（63％）例患者可见典型的CLL免疫表型,CD5、CDl9．CD23、CD20的阳性率分别为90％、87％、72％、67％。32例患者染色体检测结果表明：13q-2例,17p．2例,11q-1例,＋12有1例,6q-1例,t（14,16）1例。2例患者发生了自身免疫性溶血性贫血（AIHA）。1例患者发生了Richter转化,肿大淋巴结活检显示部分区域为弥漫性大B细胞淋巴瘤,其高表达CD20、CDl9、CD22。结论：慢性淋巴细胞白血病具有其典型的临床表现、免疫表型及遗传学改变,并且对诊断及治疗有重要意义。     

乳腺癌组织中ER、PR、C-erbB-2、CD44V6、Ki67表达的相关分析及临床意义

目的：探讨乳腺癌组织中ER、PR、C-erbB-2、CD44V6和Ki67的表达与年龄、肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移的关系以及它们相互之间的线性关系,同时分析其在乳腺癌的发生、发展中所表现出的临床作用和意义。方法：采用免疫组化S—P法检测103例乳腺癌标本中ER、PR、C-erbB-2、CD44V6和Ki67的表达,并与临床病理因素进行相关性分析。结果：103例患者中ER阳性的有57例（55．34％）,PR阳性的有49例（47．57％）,C-erbB．2阳性的有39例（37．86％）,CD44V6阳性的有68例（66．02％）,Ki67阳性的有例（90．29％）,其中以Ki67的表达率最高,C—erbB．2的表达率最低;不同年龄、淋巴结是否转移对ER、PR、C—erbB-2、CD44V6和Ki67表达量的差异。无统计学意义（P〉0．05）;PR的表达与乳腺癌临床分期相关（P〈0．05）,临床分期越高,PR的表达量越低;C．erbB．2的表达与肿瘤大小相关（P〈0．05）,肿瘤组织越小,C—erbB-2的表达量越低;ER的表达量和CD44V6的表达量的差异,有统计学意义（P〈0．05）。结论：在乳腺癌发病率越来越高的中国以至世界,免疫组化检测ER、PR、C—erbB-2、CD44V6和Ki67的阴阳性表达,可以作为乳腺癌发生、发展的评价指标,联合检测更加有助于早期乳腺癌患者的临床治疗和预后判断,减轻乳腺癌患者的身体和心理的痛苦,为临床医生选择和评估乳腺癌患者的治疗方案提供一些参考,更为下一步的个体化治疗和基因治疗做了一些前序工作。     

PDGF-D、MPO与CD15在大肠癌中的表达及临床相关性研究

目的：探讨血小板源性生长因子D（PDGF-D）、髓过氧化物酶（MPO）YL粒细胞相关抗原（CD15）在大肠癌组织中的表达及其与临床特征之间的关系。方法：采用免疫组化染色方法检测88例大肠癌组织、72例大肠腺瘤组织及50例正常大肠粘膜组织中PDGF-D、MPO及CD15的表达情况。结果：PDGF—D、MPO、CD15在大肠癌组织中的阳性表达率分别为85．23％、63．64％、61．36％。PDGF—D、MPO在正常组、大肠腺瘤组和大肠癌组三者之间的表达均有显著性差异（P〈0．05）。CD15在正常组、大肠腺瘤组中的阳性表达率与大肠癌组中的阳性表达率有显著性差异（P〈0．05）,但在正常组与大肠腺瘤组中的阳性表达率无显著性差异（P〉0．05）。PDGF—D、MPO、CD15的表达在有淋巴结转移组织中的阳性率分别为92_31％、75．00％,73．08％;在无淋巴结转移组织中的阳性率分别为75．00％、52．78％,47．22％,三者在有无淋巴结转移组织中的阳性率均有显著性差异（P〈0．05）。PDGF．D、MPO、CD15在大肠癌中的表达与性别、年龄及组织分化程度均无相关（P〉0．05）。经Spearman相关性分析,PDGF—D及MPO在大肠癌的表达具有相关性（P〈O．05）。大肠癌中CD15与PDGF—D、MPO的表达无明显相关性（P〉0．05）：结论：PDGF—D、MPO与CDl5在大肠癌中的高表达,提示均参与了大肠癌的发生发展,可作为大肠癌恶性程度和侵袭转移的分子生物学标志物。     

白细胞介素21对SHIV感染的恒河猴外周血CD8~＋ T细胞分泌γ干扰素的影响

目的研究白细胞介素21（interleukin 21,IL-21）对SHIV感染CD8＋T细胞分泌干扰素γ（interferon-γ,IFN-γ）的影响。方法从SHIV/恒河猴模型外周血中分选出CD8＋T细胞,加入IL-21诱导培养,应用ELISA方法检测细胞培养上清液中IFN-γ浓度,RT-PCR方法检测细胞中IFN-γmRNA的表达水平,流式细胞术检测分泌IFN-γ的CD8＋T细胞所占的百分比。结果 10 ng/mL IL-21明显促进CD8＋T细胞分泌IFN-γ（P〈0.05）,IFN-γmRNA的表达明显升高,4 h为刺激CD8＋T细胞胞内IFN-γ合成的最佳时间。结论 IL-21对CD8＋T细胞分泌IFN-γ有促进作用。     

人脐带间充质干细胞的分离培养与鉴定简

目的：建立并优化人脐带间充质干细胞分离纯化方法,并对其表面标志与多向分化潜能进行鉴定。方法：收集健康足月产胎儿脐带组织,采用组织块贴壁法进行原代培养,流式细胞仪对其表面标志进行检测,通过向成骨成脂分化对其多向分化潜能进行鉴定,RT-PCR对其干细胞特性基因Oct4、Nanog、Sox2、Nestin进行检测。结果：采用组织块贴壁法可在2周左右获得大量间充质干细胞,培养的细胞经流式细胞仪检测,高表达CD29、CD44、CD105、CD106,低表达CD34、CD45;经成骨成脂诱导2周后可分化为成骨细胞和成脂细胞,RT-PCR检测发现原代细胞表达Oct4、Nanog、Sox2、Nestin基因。结论：人脐带间充质干细胞可在体外扩增培养,具有多向分化潜能,可作为组织工程种子细胞来源。     

脐血间充质干细胞诱导向神经元样细胞分化的实验研究

目的：研究脐血间充质干细胞生物学特性及向神经元样细胞分化的潜能。方法：采用密度梯度离心结合贴壁培养法自脐血中分离间充质干细胞,观察细胞生长情况,描绘生长曲线,流式细胞仪检测细胞表面标志物,分别向成骨细胞、脂肪细胞、神经元样细胞进行诱导分化,通过茜素红染色、油红O染色检测脐血间充质干细胞成骨、成脂肪细胞诱导分化能力,而以免疫组织化学检测诱导后细胞表面神经标志物的表达。结果：纯化的脐血间充质干细胞贴壁生长,呈均一梭形,生长曲线呈S型,并以P3代增殖能力最强,细胞表面不表达或弱表达CD34、CD35、CD106,高表达CD29、CD44、CD105。成骨诱导2周后,可检测到钙化基质的形成,成脂肪诱导3周后,可检测到脂滴的形成。向神经元样细胞诱导分化后,可观察到典型的神经元样形态改变,且NSE、NF、GFAP阳性表达。结论：分离纯化的脐血间充质干细胞具有较强的增殖能力与分化潜能,并在体外诱导条件下可以向神经元样细胞定向分化。     

TH(1)- and TH(2)-TYPE cytokine expression by activated t lymphocytes from the lung and spleen during the inflammatory response to respiratory syncytial virus

RSV is an important cause of lower respiratory tract illness in infants and the elderly worldwide. The components involved in immunity and those that contribute to inflammation of RSV-induced disease are not clearly understood. To address the relationship between activation antigen and cytokine expression, intracellular levels of IL-2, IL-4, IL-5 and IFN-gamma were determined for CD3, CD44, CD49d, CD54, CD62L and CD102 lymphocytes from the bronchoalveolar lavage and spleen. To examine activation at the DNA level, lymphocytes expressing IL-2, IL-4, IL-5 or IFN-gamma were analysed for G2+M DNA content or phosphatidylserine expression (apoptosis). Trafficking of lymphocytes to the BAL was detected at day 5 p.i., peaked day 7 p.i., and predominately involved CD54(+)and CD102(+)lymphocytes expressing high levels of IL-2, IL-4, IL-5 and IFN-gamma. Lymphocytes expressing CD44(+), CD49d(+)and CD62L(lo)were also observed, however they expressed these cytokines to a lesser extent. DNA analysis of lymphocytes expressing IL-2 or IFN-gamma revealed higher G2'M levels compared to lymphocytes expressing IL-4 or IL-5, suggesting greater activation of Th(1)-type lymphocytes in the lung. These data demonstrate that RSV-induced pulmonary inflammation involves extensive cellular activation and cytokine expression, particularly by CD54(+)and CD102(+)lymphocytes in the lung.     

调节性T细胞在健康人群中的表达

目的:观察外周血CD4+CD25+CD127low调节性T细胞(Treg细胞)在不同性别、不同年龄段健康人群中的表达水平,建立该指标应用于临床分析的实验室参考范围。方法:收集180例健康体检成年人EDTA-K3抗凝外周静脉血,用流式细胞术分析CD4+细胞中表达CD25+CD127low细胞的百分率,以SPSS 13.0软件进行统计学分析。结果:Treg细胞在男女性别间的表达百分率无显著性差异(P0.05),在≤49岁的3组之间、≥50岁的2组之间的差异亦无显著性(P0.05);Treg细胞的表达范围在≤49岁为(3.30±1.45)%,≥50岁为(4.69±1.27)%;将≤49岁的3组与≥50岁的2组分别进行两两分析,Treg细胞百分率均存在显著性差异(P0.05)。结论:CD4+CD25+CD127Low调节性T细胞应用于临床时可以忽略性别,须针对≤49岁与≥50岁2个年龄段建立不同的参考范围;本研究建立的Treg细胞参考值范围符合本院健康体检人群特点,该指标可作为本实验室对临床疾病检测及判断预后的依据。     

zVAD-fmk对未成熟树突状细胞诱导初始性CD4＋T细胞分化为调节性T细胞影响的体外研究

目的 研究 Caspase 通路在未成熟树突状细胞（imDC）诱导同种异体 CD4＋ T 细胞转化为调节性 T 细胞（Treg）中的作用及探讨免疫耐受机制建立可能的分子机制.方法 将人外周血分离、培养出的imDC 与健康胎儿脐血中分离CD4＋ T 细胞混合培养,同时加入zVAD-fmk,以流式细胞仪检测CD4＋CD25＋ T 细胞（Treg 细胞）转化率.结果 （1）imDC 的鉴定：外周血经诱导后分离的imDC,以流式细胞仪检测细胞表面分子,imDC 表面分子表达的结果：CD80（7.27 ± 0.13）、CD83（3.53 ± 0.35）、CD1a（4.29 ± 0.27）;（2）混合培养后CD4＋CD25＋T细胞的转化率结果为：空白组（1.78 ± 0.11）﹪、对照组（22.23 ± 0.77）﹪、低浓度zVAD-fmk 组（21.63 ± 0.82）﹪、中浓度zVAD-fmk 组（12.24 ± 0.54）﹪、高浓度zVAD-fmk 组（12.20 ± 0.96）﹪,结果对照组和低浓度组、中浓度组和高浓度组间比较,P 〉 0.05,其余各组间比较,P 〈 0.05.加入zVAD-fmk 并与imDC 细胞混合培养的T 细胞转化率相对于未加入阻断剂的T 细胞较低,同时Caspase 信号通路对zVAD-fmk 无浓度依赖性.结论 imDC 可以诱导同种异体初始性CD4＋ T 细胞分化为Treg.Caspase 信号通路特异性的阻断剂zVAD-fmk 可以部分抑制Treg 的转化,说明Caspase 信号通路在诱导免疫耐受中可能起了较为重要的作用.     

瑞舒伐他汀促进缺氧复氧间充质干细胞增殖的机制研究

目的：探讨瑞舒伐他汀对缺氧复氧损伤后脂肪来源间充质干细胞增殖的影响及机制。方法：酶消化法分离小鼠的脂肪间充质干细胞（AD-MSCs）,流式细胞术检测CD90、CD44、CD34、CD45等细胞标志物。建立缺氧（H）6h/复氧（R）42h细胞模型,AD-MSCs分为3组：①对照组;②缺氧/复氧组（H/R）;③H/R＋瑞舒伐他汀干预组（浓度分别为10-8、10-7、10-6mol/L）。MTT法测定各组细胞增殖,免疫印迹法检测细胞内Akt、Erk及其磷酸化的表达水平。结果：流式细胞术结果显示脂肪间充质干细胞CD44及CD90阳性,CD34、CD45阴性。MTT实验显示在缺氧环境中,瑞舒伐他汀的干预可显著增加AD-MSCs的增殖（P〈0.05）。Westernblot检测pAkt及pErk的表达在瑞舒伐他汀干预组明显高于对照组和H/R组。（P〈0.05）。结论：瑞舒伐他汀可通过Akt、Erk信号途径促进H/R损伤后AD-MSCs的增殖。     

Ghrelin对缺氧复氧状态下脂肪间充质干细胞保护作用的研究

目的：探讨缺氧复氧损伤环境下Ghrelin对脂肪来源的间充质干细胞（AD-MSCs）的保护作用,以寻求AD-MSCs心肌内移植的有利因素。方法：采用胶原酶消化法分离小鼠AD-MSCs,流式细胞术鉴定其标志。建立缺氧/复氧细胞模型,分3组：①对照组;②缺氧/复氧组（H/R）;③H/R＋Ghrelin（浓度分别为10-9、10-8、10-7mol/L）干预组。MTT法测定各组细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡。结果：流式细胞术结果显示AD-MSCs CD44及CD90阳性,CD34、CD45阴性。AD-MSCs MTT分析显示在缺氧环境中,Ghrelin相比于单纯H/R组能够显著促进AD-MSCs的存活与增殖,并抑制其凋亡（P〈0.05）。结论：Ghrelin可以明显提高缺氧复氧环境下AD-MSCs的生存与增殖,抑制缺氧诱导的凋亡发生,有望为心肌梗死的干细胞移植治疗创造新的有利因素。