中华鲟受精细胞学研究

中华鲟(Acipenser sinensis Gray)的成熟卵具有一层放射膜及二层卵黄膜。在动物极有9—15个受精孔。每一受精孔有一大的入口(12.7—13.9μm直径)及一细长的受精管道(1.2—1.3μm直径)。 进入受精孔的许多精子只能按序入卵。其中只有一个精子的头部膨大核化,最后形成雄性原核。同时活跃的卵子也形成雌性原核。雌、雄原核彼此接触,最后融合成合子核,随后分成两个子核。 中华鲟的受精方式为多精入卵,单精受精。     

皱纹盘鲍受精过程的电镜观察

本文用透射电镜观察了皱纹盘鲍的受精过程。鲍卵子的胶膜使精子活化,并诱发了顶体反应,卵黄膜使顶体反应达到高潮。精子入卵后,卵发生皮层反应并形成受精膜开 减数分裂。此外,还观察到鲍的多精入卵现象。     

我国隐鳃鲵科、小鲵科、蝾螈科卵的比较

有尾两栖类雌性配子的形状和结构的种属差异性很大,本文对此作一简要介绍。１大鲵卵带内结构和特点大鲵产出的卵是一条长珠链状卵带,其卵球呈淡黄色的圆球形,直径为９ｍｍ,为蛙卵的４～５倍,东方蝾螈的３～４倍。卵具有３层胶膜。卵球包有一薄层卵黄膜,其外面包裹一...     

中华大蟾蜍输卵管促受精因子的实验分析

在孕酮作用厂,切除卵巢的中华大蟾蜍输卵管上皮细胞不仅能够使外源移植的卵母细胞在输卵管中正常运行,还保证卵母细胞正常受精。根据输卵管卷曲部分泌物的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,存在依赖孕酮的３３ｋＤ蛋白质。经兔抗３３ｋＤ蛋白抗体处理具输卵管分泌物的卵母细胞,受精率受到显著抑制·提示该蛋白有促受精活性。输卵管分泌物介入受精涉及复杂的多种因子。     

一种快速去除林蛙受精卵胶和卵黄膜的方法

研究林蛙(Rana amurensis)受精卵的表面膜,有时先要除去包裹在蛙卵外面的胶膜(卵胶和卵黄膜)。机械法剥离胶膜可以得到完整无损的裸卵,但难度大、效率低。Katagiri 从哈士蟆和日本青蛙胚胎     

家蚕卵裂核第一次分裂的方位观察

卵裂在胚胎学上有一定的规律,Wilson(1892)曾从几何学的角度,说明卵裂面对于卵轴或胚轴的位置关系,裂球对于正体位置关系的卵裂类型,主要取决于成胚原形质和卵黄的分配。家蚕卵的类型属于中黄卵,在卵黄膜内几乎全是卵黄集中分配的地方,只有在动物极的漏斗状范围内,卵黄分配稀少。卵的成熟分裂、受精和卵裂都开始在卵的动物极内(图1),然后引向植物极。     

产卵前、后蟾蜍(B.bufo gargarizans)输卵管磷酸酶和粘多糖类的消长变化及其和卵胶形成的关系

Bataillon(1929,1930)和朱洗等(1942,1950,1956)曾报告过两棲类卵的受精和卵胶膜有密切的关系。他们的研究都证明蛙和蝾螈的卵,如没有外面的胶膜或用人工方法去除胶膜后都没有受精能力。由此可见,两棲类卵外的胶膜对受精作用是有很重要意义的。关于蟾蜍卵胶在受精时的机制问题,Kambara(1953)和朱洗等(1956)已作过报道。Kambara证明去掉胶膜后的蟾蜍卵,如在卵的表面涂上6％     

中华鲟授精过程扫描电镜观察

在扫描电镜下观察到:中华鲟的成熟卵具有一层放射膜,两层卵黄膜;卵的动物极端有9—15个受精孔,受精孔直径约为12.7—13.9μm;精子由伞状顶体、棍棒状头部、漏斗状中段及扁平细长的尾部组成;各受精孔都能接纳多个精子;卵受精5秒后,精子才开始入卵,且精子入卵速度各不相同。受精时间持续较长,可由5秒延长至5分钟;卵受梢后,受精管道内除缠绕成团的精子尾部外,未发现其他堵塞物。     

猪卵母细胞的体外受精及多精受精

对用于猪体外受精(IVF)的研究方法和技术,如传统的液滴IVF、透明带下注射精子受精(SUZI)、卵母细胞质内单精注射受精(ICSI)及细管IVF等进行了简述。与其它动物相比,进行猪卵的体外受精研究,多精受精现象特别明显。大量的研究表明,猪卵的多精受精不但与其品种特性有关,而且与卵母细胞成熟的程度、透明带的异常、受精时获能精子的浓度、输卵管分泌物、受精液蛋白添加成分、NaHCO3浓度、咖啡因、pH值以及温度等因素密切相关。     

黑眶蟾蜍输卵管直段上皮的扫描电镜观察

无尾两栖类的输卵管直段在卵子的受精中起着重要的作用。已有报道,输卵管直段的分泌物可以改变南美洲蟾蜍(Bufo arenarum)卵母细胞的糖代谢途径,促使卵母细胞成熟(Legname et al.,1972)。非洲爪蟾(Xenopus laeuis)、南美洲蟾蜍和日本林蛙(Rana japonica) 的卵母细胞经过输卵管直段时,卵黄膜的结构发生改变(Grey et al., 1977;Yoshizaki et al., 1981;Mariano et al., 1984)。南美洲蟾蜍的输卵管直段能分泌出类胰蛋白酶,此酶可使卵母细胞的卵黄膜结构改变(Miceli et al., 1978,1980)。本文用扫描电镜观察黑眶蟾蜍输卵管直段上皮在排卵前、排卵时和产卵后的变化,以期阐明直段上皮的变化与卵巢中卵母细胞的成熟排放之间的联系。     

中华大蟾蜍多种组织内5-羟色胺免疫染色细胞的分布

用过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)法,对中华大蟾蜍消化道(冬眠期与非冬眠期),脑及其他组织的5-HT分布进行了研究。5-HT免疫染色细胞位于脑干中缝核区和间脑的第Ⅲ脑室腹侧的室管膜细胞区。阳性神经元呈圆形或卵圆形,细胞常有突起与其他阳性细胞突起相连,上述部位中还有一些阳性神经纤维。消化道的免疫染色细胞密度在胃幽门、胃体和胃贲门处最高,食道和十二指肠次之,大肠和小肠最低。非冬眠期蟾蜍消化道内免疫染色细胞密度明显高于冬眠期的(P<0.05)。阳性细胞位于粘膜上皮或腺上皮细胞间,细胞有一个或一个以上呈阳性反应的突起,有的突起伸入肠腔面或腺腔面,有的穿过基膜到达固有层,表明这些细胞兼有内、外分泌的功能。在甲状旁腺的主细胞间,肺呼吸性细支气管上皮和肺泡管上皮细胞间都有5-HT免疫染色细胞,细胞呈立方形、圆形、卵圆形或不规则形,常有几个细胞成簇分布。     

中华大蟾蜍卵母细胞成熟过程中膜电位变化的实验分析

中华大蟾蜍冬眠卵和高温卵的静息膜电位分别为-41.51±O.77 mV和-43.83±1.39mV。孕酮作用后,冬眠卵发生GVBD,膜逐渐去极化,至第二次成熟分裂中期,膜电位甚至可降至-10 mV;高温卵不发生GVBD,在早期(前4小时左右)出现膜去极化,之后恢复。高温休克(37-38℃)卵虽然亦不发生GVBD,膜去极化的情况与高温卵的相似,然而,卵质中却出现MPF。将孕酮作用后的冬眠卵核液转移注入未经任何处理的冬眠卵中,未能激起受体卵GVBD ??和膜去极化。接受MPF或促冬眠卵成熟因子的冬眠卵,均发生GVBD和膜去极化。接受MPF的冬眠卵的GVBD时间较孕酮诱发的提前约4小时,膜去极化的进程也相应提前4小时左右。蛋白质合成抑制剂嘌呤霉素能抑制由孕酮诱发的冬眠卵成熟效应,而不能抑制由MPF诱发的卵成熟效应。接受MPF的高温卵发生GVBD和膜去极化,而高温卵本身无能产生MPF,也不具备扩增MPF的能力。上述实验结果说明,冬眠卵质膜去极化与GVBD之前的核液无关,与MPF的出现亦无直接关系,该逐渐去极化的全过程可分二阶段,前阶段的去极化与孕酮诱发的早期蛋白质合成活动有关,后阶段与含MPF的卵质引起的生物学效应有关。     

内源环化腺苷酸(cAMP)含量变化对卵母细胞成熟的影响

孕酮处理前,冬眠卵内源cAMP平均水平为500 Fmol.左右;处理后cAMP迅速下降,在12小时内下降59%,卵的生殖泡破裂。高温卵或热休克冬眠卵,孕酮刺激后cAMP水平亦下降,生殖泡却未破裂,但在高温卵质中出现依赖“冬眠因子”的促成熟活性物质,而在热休克冬眠卵质中出现不依赖“冬眠因子”的促成熟活性物质。热休克能影响卵的生殖泡破裂,却未影响卵质中MPF的形成。孕酮刺激后引起的卵内cAMP含量下降,只能是卵母细胞成熟的必要条件,而不是唯一的条件。     

胞内膜层系统参与孕酮诱发卵母细胞成熟的启动调控

在两栖类,孕酮诱导的cAMP水平下降既是卵球成熟的早期必要变化之一,同时对成熟启动来说又是充分的条件。cAMP水平下降是中华大蟾蜍卵母细胞成熟启动信号,但其卵质是否能产生MPF,还有赖于其它因子的存在。孕酮的受体不但存在于两栖类卵母细胞的质膜上,在细胞质内同样存在。卵母细胞的质膜不是孕酮诱发成熟的唯一作用位点。中华大蟾蜍卵母细胞的质膜和细胞质中的膜层上都有腺苷酸环化酶活性存在。孕酮不但??能通过抑制质膜上的,而且还能抑制细胞质中膜层上的腺苷酸环化酶活性,降低细胞内cAMP水平,诱发卵母细胞成熟。     

孕酮诱发蟾蜍卵母细胞成熟作用部位的探讨

冬眠蟾蜍长足卵母胞胞,经手工剥除其卵巢膜、滤泡膜、透明带和质膜,包埋在琼脂块里,孕酮作用3小时(18±1℃)后,该细胞质团块中出现促成熟活性物质(MPF);将含有此MPF的微量卵质(约50毫微升),注入未经激素处理的卵球,能诱发后者恢复减数分裂,胚泡破裂,排出第一极体,正常抵达第二次成熟分裂中期。如果在去除上述卵外和卵表膜层结构的同时,剔除其细胞核(胚泡),然后包裹在琼脂中,经孕酮处理3小时左右,照样能够诱发产生促成熟活性物质;微量细胞质的转移,照样能使未经激素处理的受体卵正常成熟。随着供体卵质块与孕酮接触时间的延长,其诱发受体卵成熟的百分率逐渐增高。孕酮处理后9小时的供体卵质块,几乎全部能使受体卵正常成熟。上述结果表明,在本实验处理的条件下,孕酮诱发中华大蟾蜍卵母细胞形成促成熟活性物质的过程,既不依赖于卵表透明带与质膜,也不依赖于细胞核,而是细胞质自身活动的结果;显然,孕酮诱发蟾蜍卵母细胞成熟的初始作用部位是在细胞质。     

蟾蜍种间核移植胚胎发育早期LDH同工酶的表现

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳,对中华大蟾蜍(Bufo bufo比gargarizans)与花背蟾蜍(Bufo raddei)种间核移植胚胎发育早期六个不同阶段中全胚胎的乳酸脱氢酶(LDH)同工酶进行了分析。酶谱比较的结果表明:在正、反种间移核胚胎中,供体核LDH基因的活动开始表现于尾芽胚期;此前,杂种胚胎中LDH同工酶谱类型与受体一致。     

鸟氨酸脱羧酶参与孕酮诱导的卵成熟过程吗?

在孕酮诱导的蟾蜍卵母细胞成熟过程中,ODC活性约增加2倍。佛波酯PMA能促进孕酮诱导的成熟速度,而对ODC的活性无明显影响。精胺对ODC活性有显著的作用:当卵母细胞培养在含5mmol/L精胺的碱性任氏生理盐水(pH11.6)中时,ODC活性下降17%,而孕酮诱导的成熟速度却大为增加;当精胺注入卵母细胞后。ODC活性明显下降,而且即使孕酮诱导的ODC活性增加完全被抑制,仍有80%以上的卵母细胞发生GVBD。上述结果充分表明,ODC活性的变化不参与孕酮诱导蟾蜍卵母细胞成熟的调控过程。由于在孕酮处理的卵母细胞中,ODC活性的增加发生在精胺水平下降之后,又外源精胺能大幅度抑制卵内ODC活性,故精胺很可能是卵母细胞ODC活性的调节物。     

花背蟾蜍角膜早期形态发生的超微结构研究

本文用透射电镜对花背蟾蜍角膜早期形态发生(18期至25期即肌肉感应期至鳃盖完全封闭期)过程中超微水平的变化进行了细致的研究。结果表明:从19期至21期(心跳期至胚胎开口期)角膜处于尚无特异分化的预定角膜阶段,其结构与邻近表皮无明显区别;22期至24期末(尾血循环期至右侧鳃盖封闭期)是角膜上皮分化阶段,主要变化是角膜上皮变薄、上皮细胞中的色素颗粒被酶解和经粘液泡排出、上皮下层的形成以及内角膜基质原基细胞层数的增加;25期后进入透明的蝌蚪期角膜,此期上皮下层仍不被间质细胞侵入,内皮和基质是以内角膜基质原基的形式存在。     

中华大蟾蜍和花背蟾蜍间移核胚胎早期发育中染色体变化的研究

本研究以中华大蟾蜍和花背蟾蜍间正反核、质组合的移核胚胎为材料,对其三个不同发育阶段(囊胚晚期、原肠早期、原肠晚期)的移核胚胎染色体进行了组型分析。结果表明,无论以中华大蟾蜍囊胚细胞核作供体,花背蟾蜍去核未受精卵作受体的移核胚胎,还是相反组合的移核胚胎,在三个不同发育阶段,其染色体数目和形态均有变化,即:(1)表现出数目上有规律性的减少,一般减少2条、3条和4条;(2)出现异型染色体,如染色体断裂和双缢痕染色体;(3)表现出比较恒定的异常组型,即缺失第3染色体,多第4、5、6另染色体。在三个发育时期的分裂中期象中,具有2n=22者,中核组占40.3％-41.3％,花核组占52.3-53.1％。