一种纯化高等植物叶绿体DNA的有效方法

１９８４年,Ｂｏｏｋｊａｎｓ ｅｔ ａｌ．建立了高盐介质纯叶绿体ＤＮＡ的方法。在我们进行的高粱叶绿体光系统基因研究中发现,用Ｂｏｏｋｊａｎｓ的方法提取的ｃｔＤＮＡ酶切效果欠佳,产率太低。应用我们反进的高盐低ＰＨ方法,纯化了高粱、小麦、水稻和速效豌豆等植物的ｃｔＤＮＡ。结果表明,这种改进的方法具有有得率高,酶切效果好和操作简便等优点。     

非损伤性方法的建立及其在亚洲黑熊分子遗传学研究中的应用

哺乳动物野生群体和濒危物种的分子遗传学研究长期以来受到组织样品来源的限制。因为传统的分析方法,如蛋白质电泳、ＤＮＡ限制性片段长度多态及ＤＮＡ序列分析等,需要采集诸如血液、肌肉、肝脏、心脏、肾脏和脾脏等组织材料以提取足量的蛋白质和ＤＮＡ。而这又常常涉及捕捉、损伤甚至杀死动物。本工作探索建立一种非损伤性的途径以解决这一困难。我们采用Ｂｉｏ—Ｒａｄ公司“ＩｎｓｔａＧｅｎｅＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＭａｔｒｉｘ”从遗落于地上的亚洲黑熊单根毛发样品中提取出基因组ＤＮＡ。这种方法简便、快速,仅需一个步骤──在该试剂中以１００℃裂解细胞。不必再经酚和氯仿抽提。我们用ＰＣＲ技术从这种毛发ＤＮＡ中扩增了线粒体细胞色素ｂ基因片段,并测定了该片段的ＤＮＡ序列。我们的工作为开展亚洲黑熊及其他哺乳动物野生群体的分子遗传学研究奠定了基础。     

高等植物DNA重复序列的主要类型和特点

高等植物核基因组的一个显著特征是其内含有大量的ＤＮＡ重复序列,因此它们在核基因组结构和功能研究中居于举足轻重的地位。一些ＤＮＡ重复序列已日趋广泛地作为分子民用于构建遗传图谱、鉴别品种、研究进化和分离目标基因等。主要介绍高等植物几类重要ＤＮＡ重复序列,如卫星ＤＮＡ、微卫星ＤＮＡ、核糖体ＲＮＡ基因、端粒重复序列和转座子等的若干特点和用途。     

应用反义技术研究DNA聚合酶ε在HeLa细胞DNA复制中的功能

我们应用以义技术,结合Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ导入和ＧＰＴ筛选方法,研究了ＤＮＡ聚合酶ε在ＨｅＬａ细胞ＤＮＡ复制过程中的功能,针对ＤＮＡ聚合酶ε和α的反义寡核苷酸都能够专一地抑制ＨｅＬａ细胞的ＤＮＡ合成。首镒直接证明了ＤＮＡ聚合酶ε在哺乳动物细胞的ＤＮＡ复制过程中具有重要作用。．     

流感病毒DNA疫苗的研究进展

ＤＮＡ疫苗是当今微生物疫苗研究的热点之一。已有许多病毒和细菌的ＤＮＡ疫苗在研制之中、流感病毒的ＤＮＡ疫苗与传统疫苗相比,具有诱生免疫反应全面、接种对象广泛、免疫效果良好、保护性更强等优点。本文就流感病毒ＤＮＡ疫苗研究的最新进展作一综述。     

DNA及其蛋白质复合体的电镜观察及研究应用

对生物大分子形状的正确了解有助于对其功能的解析。事实上,借助于电子显微镜观察法,使我们在对构成细胞各组分功能的探讨和研究方面收益匪浅。自从生物这家们认识到ＤＮＡ在细胞行使其功能中的重要性以来,电子显微镜便成为一种最重要的技术手段而被用于分析ＤＮＡ的结构,研究ＤＮＡ的复制、重组和转录机制。近年来,这一领域的研究技术又有了非常大的改进,使人们已经能够借助于电子显微镜,观察介入ＤＮＡ复制、重组和转录等过程中的ＤＮＡ－蛋白质复合体的活体状态。今后,在对生物大分子的活体行为进行探讨时,电子显微镜技术将发挥越来越重要的作用。     

光纤DNA传感器

光纤ＤＮＡ传感器是ＤＮＡ生物传感器中很有潜力、极具发展前途的一种,具有重要的研究价值和诱人的应用前景。该技术灵敏度高,分析操作简便、快速,为分子生物研究提供了一种新方法,在基础医学、临床医学和预防医学各个领域具有十分广泛的应用前景。本文对光纤ＤＮＡ传感器的原理,ＤＮＡ探针在光纤表而的固定化,光纤ＤＮＡ传感器的类型等方面的研究进展作了评述。     

原子力显微镜研究不同温度下质粒DNA结构变化

采用原子力显微镜（ＡＦＭ）在无水乙醇中成象了ｐＢＲ３２２质粒ＤＮＡ。在不同温度范围加热云母表面的ＤＮＡ溶液,并在相应温度下干燥使ＤＮＡ充分展开地固定在云母基底上。ＡＦＭ观察结果表明：在３０～４０℃,质粒ＤＮＡ主要是超螺旋和环状分子;在４０～５０℃,环状分子开环形成线形分子;　在７０～８０℃,这些线形分子全部变性,解链形成无规线团。我们通过测定ｐＢＲ３２２质粒ＤＮＡ的熔融曲线,发现了两个突变点,对应于ＡＦＭ所观察到的质粒ＤＮＡ在加热过程中由环状变成线形、双螺旋解开成单链的两个结构变化过程。这是首次通过ＡＦＭ直接观察到质粒ＤＮＡ在不同温度下的结构变化。     

转移DNA

农杆菌能够将其环状质粒上的一段转移ＤＮＡ(ｔｒａｎｓｆｅｒＤＮＡ ,Ｔ ＤＮＡ)转移并整合到受体细胞的基因组中 ,并使之携带的基因在受体细胞中表达。利用这种天然载体转化系统 ,除了可以在细菌间进行接合转移外 ,还可以向真菌、放线菌等低等真核生物和许多高等植物基因组转移[1] 。利用人工构建的转移复合物可以将ＤＮＡ转运到哺乳动物的细胞核中[2 ] 。虽然不同农杆菌质粒ＤＮＡ同源性有较大差异 ,但仍有一些共有的保守区段 ,如Ｔ ＤＮＡ区、Ｖｉｒ区、质粒复制起始区、质粒接合转移毒性区等。其中Ｔ ＤＮＡ区和Ｖｉｒ区是与Ｔ ＤＮＡ…     

应用大肠杆菌染色素DNA在非洲爪蟾卵提取物实现诱导非细胞体系…

近年来我们实验室已成功地利用细胞核体外组装的实验模式,将多种生物的ＤＮＡ在非洲爪蟾卵提取物中实现了非细胞体系核装配。但亲缘关系最远的原核生物的染色体ＤＮＡ是否也能在此真核体系中进行核装配一直没有报道。我们以大肠杆菌染色体ＤＮＡ为材料,研究了它诱导的非细胞体系核装置。在光镜与电镜水平观察了核装配的过程。显微分光光度计扫描显示ＤＮＡ片段在核装配过程中经历了凝集－去凝集的变化。证明大肠杆菌染色体ＤＮＡ也     

半导体激光辐照DNA的光谱分析

本文通过半导体激光等辐照源对ＤＮＡ辐照,研究激光、紫外、普通红光对ＤＮＡ吸收光谱的影响。发现激光（６６０ｎｍ）与紫外（峰值波长２５４ｎｍ）均能使ＤＮＡ吸收峰值改变,表明它们均能被ＤＮＡ吸收,与ＤＮＡ发生作用,从而使ＤＮＡ构型发生变化,但激光、紫外与ＤＮＡ作用机理是不同的。而普通红光（峰值波长６６０ｎｍ）对ＤＮＡ光谱无甚影响,这说明了激光与ＤＮＡ作用的非线性共振吸收存在。并发现在激光辐照ＤＮＡ时,激光剂量不同以及ＤＮＡ溶液浓度不同,对ＤＮＡ光谱的影响也不同。这些结果对激光育种和激光生物学实验有一定参考价值。     

一种从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的简单电洗脱装置

我们设计了一种简单电洗脱装置,从琼脂糖胶中回收ＤＮＡ。该装置由两个带旋盖的小管、两块透析膜和一个凝胶屏障组成。在电场作用下,ＤＮＡ从凝胶中迁移出来,通过凝胶屏障进入由凝胶屏障和透析膜组成的回收小仓。用微量吸样器收集ＤＮＡ,乙醇沉淀和清洗。该法ＤＮＡ的回收率约８５％;回收的ＤＮＡ可用于基因工程常规实验。     

高效率提取凋亡细胞DNA片段

琼脂糖凝胶电泳形成的ＤＮＡ梯子（ＤＮＡＬａｄｄｅｒ）是判断细胞是否凋亡的重要指标,在实验过程中如何高效率地提取细胞ＤＮＡ片段十分关键。常规的方法实验流程长,反复抽提容易使ＤＮＡ小片段丢失,实验结果的重复性较差且要接触酚、氯仿等有机溶剂,不利于身体健康...     

水稻线粒体DNA的提取与分析

为了研究水稻细胞质雄性不育的分子基础,我们比较了各种提取线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）的方法,并提出了一些改进措施。以丛广４１Ａ、丛广４１Ｂ和杂种一代广优青为材料,对所提取的材料ｍｔＤ－ＮＡ进行了紫外扫描、ＯＤ值测定、电泳、酶切等分析,结果表明,以新鲜材料进行不连续蔗糖密度梯度超速离心对提取高纯度的线粒体ＤＮＡ效果较好。     

分子间三链DNA的应用

自Ｄｅｒｖａｎ等１９８７年首先证实三链ＤＮＡ的形成可介导对靶ＤＮＡ的特异切割以来,有关三链ＤＮＡ的研究进展和奶快。本综述了近几年分子间三链ＤＮＡ在基因表达调控、染色体作图、基因分离及定点诱变等方面的应用,并对三链ＤＮＡ应用中存在的几个问题及相应的解决方法作了简单介绍。     

真核DNA复制机制的研究进展

人们对原核细胞ＤＮＡ复制机制早已有较深入的了解 ,但对真核细胞ＤＮＡ复制机制的认识 ,直到 90年代中期才比较清楚。ＳＶ40ＤＮＡ复制系统是研究真核染色体ＤＮＡ复制的理想体系。在ＳＶ40ＤＮＡ复制系统中由病毒编码的唯一的复制因子是Ｔ抗原 ,其余的复制因子全依赖于宿主细胞。利用纯化的蛋白质或人细胞抽提物在体外重新构建ＳＶ40ＤＮＡ复制体系 ,可以细致、深入地研究真核ＤＮＡ复制的起始、延伸和滞后链的成熟。1 .在ＤＮＡ复制的起始至延伸阶段发生ＤＮＡ聚合酶α/δ转换哺乳动物细胞有 5种ＤＮＡ聚合酶 (α、β、γ、δ、ε、)。由…     

DNA拓扑异构酶的分型

ＤＮＡ拓扑异构酶的分型郑晓飞孙志贤（军事医学科学院放射医学研究所,北京１００８５０）关键词ＤＮＡ拓扑异构酶ＤＮＡ拓扑异构酶是真核细胞和原核细胞中的基本酶。ＤＮＡ拓扑异构酶在细胞生命过程中起着重要作用,如在ＤＮＡ复制、修复、转录、重组中解开在复制和重组...     

DNA疫苗研究现状和展望

自１９９２年第一次报道ＤＮＡ疫苗技术以来,在短短３－４年的时间内这一技术得到飞速发展,在ＤＮＡ疫苗的作用机理、如何增强ＤＮＡ免疫效果以及ＤＮＡ疫苗的优势和问题等方面做了大量卓有成效的探索,尽管现在人们对ＤＮＡ疫苗抗原提呈作用机理还不清楚,也还没有完全了解ＤＮＡ疫苗安全性问题,但是对ＤＮＡ疫苗的免疫防御、免疫治疗和免疫调节作用已有了较为清晰的认识。本文拟对此作一简要概述。     

一种从重组质粒快速提纯DNA插入片段的方法

本文介绍一种从重组质粒中快速提纯ＤＮＡ插入片段的方法。质粒ＤＮＡ的制备简单、快速、分离的质粒ＤＮＡ可用于限制性酶切和转化大肠杆菌等。从琼脂糖凝胶中提纯ＤＮＡ插入片段的方法操作简单,回收效率高,提纯的ＤＮＡ片段可用于连接和制备杂交探针等。     

真核生物的DNA甲基转移酶与DNA甲基化

真核生物的ＤＮＡ甲基化就是在ＤＮＡ的ＣｐＧ二核苷酸胞嘧啶的第 5位碳原子上加上甲基 ,催化这一过程的是ＤＮＡ甲基转移酶 (Ｄｎｍｔ)。ＤＮＡ的甲基化修饰参与基因表达调控、胚胎发育、细胞分化、基因组印迹、Ｘ染色体灭活和细胞记忆等诸多重要生物学过程[1,2 ] 。在不同组织或同一类型细胞的不同发育阶段 ,基因组ＤＮＡ上各ＣｐＧ位点甲基化状态的差异即构成基因组的ＤＮＡ甲基化谱。根据催化反应类型。可以将ＤＮＡ甲基转移酶分为三类 :第一类将腺嘌呤转化成Ｎ6 甲基腺嘌呤 ;第二类将胞嘧啶转化成Ｎ4 甲基胞嘧啶 ;第三类将胞嘧啶转化成…