中国人诱导型一氧化氮合酶基因STR多态性研究

一氧化氮（nitric oxide,NO）作为一种可在细胞间自由扩散的信使分子在神经递质传递和血管舒张调节等生理与病理过程中起着重要作用。NO通过一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）催化L-精氨酸的氧化反应而生成。目前在哺乳动物中已发现细胞来源、表达方式和活性调节不同的3种NOS同工酶,分别为神经原型NOS(meuronal NOS,nNOS）、诱导型NOS(inducible NOS,iNOS）和内皮细胞型NOS（endothelial NOS,eNOS）。3种NOS由位于不同染色体上的基因所编码。人iNOS基因位于第17号染色体长臂(17q11.2～17q12）,全长约37kb,含有26个外显子,iNOS可在多种类型的细胞中通过IL-1、IFN-a、INF-γ等细胞因子和其他介质的刺激作用而诱导表达。iNOS基因5‘-端调控区内存在一个CCTTT串联重复的多态性位点,这一多态性基因座已居北爱尔兰的糖尿病患者中证实与微血管病变有关。另有实验表明,CCTTT串联重复序列的变化对iNOS基因的转录将产生不同影响。目前在东方种族中有关iNOS基因CCTTT串联重复多态性尚未见报道。将303名中国汉族人基因组DNA用于iNOS基因CCTTT串联重复多态性分析,鉴定出了12种等位基因和49种基因型,其中重复17次、18次和19次的等位基因是在人类中首次发现的新等位基因。统计学检验和比较表明,中国汉族人iNOS基因CCTTT串联重复序列的6个等位基因频率与来自英格兰的高加索人差异显著,说明这一多态性位点的等位基因频率分布存在种族差异。在中国正常人群中获得的有关iNOS基因STR多态性的统计资料,对于进一步研究这一多态性基因座与心脑血管疾病的相关性将有重要应用价值。     

生物数据库专栏导读

近年来,随着生物科技和信息科技的迅猛发展,基于生命组学的大数据积累和应用均已达到了前所未有的程度。多元的生物数据库资源,特别是急剧增长的生物学大数据在生物化学与分子生物学研究中得到了广泛应用,对生物学、生物医学的基础研究和转化应用起到了助推器的作用。但是,由于专业的局限性和研究者的着重点不同,部分从事生物学和生物医学的研究者对数据库资源的了解,对大数据的分析、处理和整合能力存在不足,制约了他们对已有数据资源的充分和有效的利用。为此,本期专栏选择了近年来的一些热门研究领域,特邀长期活跃在相关研究领域的一线科研工作者,结合他们自己的相关工作,分别就抗体信息数据库、细胞外囊泡数据库、蛋白质相互作用数据库、细菌sRNA数据库和RNA二级结构数据库的现状、特点和应用进行了较为系统的综述。下面对各篇文章内容给予简单介绍。 抗体不仅是机体的重要免疫分子,也是生物学研究的主要工具分子之一,并且做为疾病诊断和治疗的抗体分子在临床上得到了越来越广泛的应用,治疗性抗体已经成为生物制药产业的龙头。冯健男等的“抗体信息数据库”一文,系统地介绍了有“免疫遗传门户数据库”之称的国际免疫遗传信息系统IMGT、Kabat数据库、抗体在线分析系统abYsis和服务于免疫相关实验的抗体在线目录等特色数据库。细胞外囊泡是近年来的研究热点,特别是细胞外囊泡在细胞信息传递和疾病的诊断方面的研究进展迅速。丁勇等的“细胞外囊泡及细胞外囊泡数据库”一文,系统地介绍了目前收录数据比较全面、具有影响力的细胞外囊泡数据库ExoCarta、Vesiclepedia和Evpedia数据库和数据库特点,并对不同数据库进行了比较。蛋白质相互作用是蛋白质研究的重要内容,是认识生命过程和疾病防治的重要基础之一,王建的“蛋白质相互作用数据库”一文,分别对综合蛋白质相互作用数据库、特定物种的蛋白质相互作用数据库和信号通路数据库的特点进行了系统介绍。无论真核细胞还是原核细胞普遍存在大量的功能小RNA分子,小RNA研究对揭示生命的基本规律具有重要意义。李伍举等的“细菌sRNA数据库”一文,分别对细菌sRNA的综合数据库、细菌sRNA的专业数据库进行了详细的综述,将对拟开展细菌sRNA生物信息学和功能研究人员构建细菌sRNA及其靶标预测模型提供帮助。RNA功能与RNA结构密切相关,RNA结构研究已经成为RNA研究的热点之一。刘涛等的“RNA二级结构数据库”一文,对常用的基于三维测定结构证据的RNA二级结构数据库进行了介绍,以便于研究人员从中可以获得相对准确的数据构建结构预测模型。 生物化学和分子生物学研究不仅是生物数据库资源的产出者,同时也是生物数据库资源的使用者,希望本专栏能够对相关研究人员有所裨益。     

DNA拓扑异构酶的分型

ＤＮＡ拓扑异构酶的分型郑晓飞孙志贤（军事医学科学院放射医学研究所,北京１００８５０）关键词ＤＮＡ拓扑异构酶ＤＮＡ拓扑异构酶是真核细胞和原核细胞中的基本酶。ＤＮＡ拓扑异构酶在细胞生命过程中起着重要作用,如在ＤＮＡ复制、修复、转录、重组中解开在复制和重组...     

人端粒结合蛋白TRF1的克隆、表达和抗体制备

利用RT-PCR技术,从HeLa细胞的cDNA文库中扩增到人端粒结合蛋白1(hTRF1)基因编码区序列,克隆至pUCm-T载体,测序正确后,构建带His₆-tag原核表达载体pET-28c-TRF1,经IPTG诱导表达的His₆-TRF1融合蛋白分子量约为65kD,Western-blot证实表达产物可特异地与TRF1抗体sc-6165结合。用Ni^2＋NTA胶亲和层析纯化可得到电泳均一的融合蛋白,免疫新西兰纯种大白兔,获得特异性好的多克隆抗体,该抗体可用于免疫荧光染色和Western-blot方法检测哺乳动物细胞内源性的TRF1分子。     

中国人eNOS基因VNTR多态性的基因型与等位基因频率

一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）催化L－精氨酸的氧化反应生成L－瓜氨酸和一氧化氮（nitric oxide,NO）。NO可通过cGMP依赖的信号传导途径介导平滑肌细胞舒张,是调节血管张力的重要信使分子。NO尚可抑制血小板凝集,对血栓形成起重要调节作用。目前在哺乳动物中已发现细胞来源、表达方式和活性调节不同的3种NOS同工酶,分别为神经元型NOS（neuronal NOS,nNOS）、诱导型NOS（inducible NOS,iNOS）和内皮细胞型NOS(endothelial NOS,eNOS）。人的eNOS基因位于第7号染色体长臂（7q36）,全长约21kb,含有26个外显子和25个内含子。eNOS基因存在多个与心脑血管疾病相关的基因多态性位点。其中位于第4内含子的一个以27bp为核心的数目可变性串联重复序列（variable number of tandem repeat,VNTR）多态性位点,已被证实与原发性高血压、心肌梗死和静脉血栓形成有关。目前在我国尚缺乏NOS基因多态性在正常人群中基因型及等位基因频率分布的统计资料。为此,我们从316名健康中国人的基因组DNA检测了eNOS基因第4内含子VNTR多态性的基因型和等位基因,鉴定出重复6次、5次和4次的3种等位基因,以及6／5杂合、5／5纯合、5／4杂合和4／4纯合的4种基因型。同时我们将正常中国人eNOS基因VNTR多态性的基因型和等位基因频率与其他种族的相关资料进行了统计对比。结果表明,中国人eNOS基因VNTR的各种基因型和等位基因频率与日本人相似,4／4纯合基因型频率与高加索人差异显著,各种基因型和等位基因频率与非裔美国人均存在显著差异。     

小分子药靶——RNA药靶研究进展

对RNA药靶的特点、研究策略和针对RNA药靶的小分子药物筛选方法,进行了综述.RNA的三级结构作为分子相互作用的识别位点和结合位点对RNA的生物功能的实现具有重要决定作用,RNA分子同蛋白质一样将成为新型小分子药物的作用靶点.     

类mRNA RNA研究进展

类mRNA RNA(mRNA-like RNA)是一类3ˊ端有Poly A，无典型ORF，不编码蛋白质，而直接在RNA水平上发挥作用的RNA分子，近年来的研究表明各种不同的类mRNA RNA广泛存在于不同的细胞内，并发挥着重要的调控作用。它们与细胞的生长和分化、胚胎的发育、肿瘤的形成和抑制密切相关。     

癌症治疗的目标——抑制端粒酶的策略

端粒酶与癌症密切相关,抑制端粒酶的活性可以抑制癌细胞的生长.反义核酸、核酶、细胞分化剂、逆转录酶抑制剂和鸟嘌呤四联体等都可以在不同程度上抑制端粒酶活性.在癌症治疗中具有很大应用潜力.     

多重PCR在质粒拷贝数检测中的应用

聚合酶链式反应(PCR)作为常规分子克隆技术已在分子生物学的各个领域得到广泛应用.然而,多重PCR技术应用于质粒拷贝数检测的研究尚未见报道.为深入探索多重PCR在质粒拷贝数测定中的应用,首先利用构建的多重PCR引物设计及评估体系分别针对细菌基因组DNA和质粒载体DNA序列设计多重PCR引物;然后以转化有不同质粒载体的大...